14

Guía de microscopio

Introducción

Desde la antigüedad muchas personas descubrieron ciertas maneras de ver los objetos aumentados de
tamaño. Una gota de rocío, por ejemplo, nos permite ver con mayor detalle la superficie sobre la cual se
deposita. Este efecto, con seguridad se repitió, cuando el hombre fue capaz de descubrir el vidrio y fabricar
lentes. Hacia el año 1300 en Holanda, comenzó el auge de la utilización de lentes en la fabricación de lupas
o cristales de gafas para mejorar la visión. Estas tenían poco aumento, hasta que se descubrió que las lentes
convexas empleadas para corregir la presbicia, servía también para ver los objetos aumentados de tamaño.
Se afirma que fueron dos Holandeses fabricantes de lentes, Hans y Zacharias Janssen, quienes hacia el año
1600 inventaron el microscopio de una manera rudimentaria. En efecto, colocaron una lente convexa en
cada uno de los extremos de un tubo y comprobaron que mirando a través de él, los objetos se veían de
mayor tamaño. Galileo, en 1610, se convirtió en el gran difusor de las bondades del microscopio, pero ya
en aquella época existían investigadores para quienes el uso de este aparato resultaba indispensable.

El microscopio es una ayuda importante en el laboratorio de microbiología, el cual proporciona

amplificaciones de elementos y estructuras que son invisibles con la simple inspección ocular, este nos es
de gran apoyo para así lograr diferenciar y caracterizar elementos.

Objetivos

Al finalizar los laboratorios de microscopio el estudiante estará en capacidad de:

Describir las partes del microscopio y manejar adecuadamente cada una de ellas

Realizar diferentes enfoques utilizando todos los objetivos

Reconocer la importancia del microscopio como instrumento básico en microbiología

Microscopio

El microscopio es un instrumento esencial en el laboratorio de microbiología; permite observar

microorganismos y estructuras que no son visibles a simple vista. Con el microscopio se consigue un
amplio margen de aumento óptico del objeto a observar. Existen varios tipos de microscopios y se han
desarrollado varios métodos que permiten examinar con gran detalle las muestras que contienen
microorganismos. Las células y tejidos no coloreados se captan en el microscopio como falto de color y

15
 Guía de microscopio

transparente, con poca estructura interna, puesto que no presentan

suficiente contraste. Con la ayuda de coloraciones histológicas se consigue
una absorción diferencial de luz de modo que las distintas estructuras se
visualizan.

La palabra microscopio viene de micro y del gr. Skopein que significa

mirar, examinar. El microscopio es un instrumento óptico que sirve para
aumentar considerablemente la imagen de los objetos muy diminutos.

Con el microscopio de luz las preparaciones teñidas son observadas por

transiluminación.

El microscopio está compuesto de una parte mecánica y una parte óptica

(sistema de lentes).

Parte mecánica
Entre ellas podemos encontrar el pie o pedestal que va a adquirir diversas formas tales como circular,
cuadrada, rectangular y semilunar. También va a estar compuesto por el tornillo macrométrico (enfoca la
imagen) y por el micrométrico (afina la imagen); ambos tornillos se encuentran en el asa o brazo del
microscopio; y por el otro lado vamos a encontrar al porta objetos, carro de movimientos que nos van a
permitir deslizar el portaobjetos hacia abajo, arriba y a los costados. Las pinzas van a sostener la lámina
porta objetos. En la subplatina vamos a encontrar el condensador, que va a concentrar la luz para poder
observar la imagen, tiene un tornillo que permite hacer ascenso y descenso. También vamos a tener al
diafragma que es una serie de láminas sobrepuestas que se abren y cierran permitiendo el paso de luz; por
debajo de este encontramos filtros que son de color azul que van a transformar la luz amarilla en luz
blanca. En la parte inferior encontramos el espejo que puede ser plano con una cara cóncava.

Parte óptica
En cuanto a la parte óptica el microscopio va a usar lentes convergentes: plano convexa, biconvexa,
cóncavo-convexa; y está compuesta por tres sistemas de lentes: condensador, objetivos, oculares.

El condensador proyecta un rayo cónico de luz para iluminar el objeto a ser observado.

Los objetivos aumentan el tamaño de la imagen y la proyectan en dirección de los lentes

oculares. Son varios y adecuados al revolver porta objetivo; en la parte inferior tiene una lente
frontal plano convexa, y en la superior una sucesión de lentes correctores. Van a tener aumentos de
4x (pequeño aumento), 10x (mediano aumento), 40x (gran aumento), 100x (inmersión).

16
 Guía de microscopio

El ocular aumenta mucho más la imagen y la proyecta a la retina del observador o a las
pantallas. El ocular es el responsable del aumento de la imagen, éste va a estar dado por un sistema
de lentes dado por oculares que son tubos huecos que tienen una lente superior e inferior
planaconvexa (aumentos de 4x, 15x, 20x).

Partes del microscopio

Componentes del microscopio

Los diversos componentes del microscopio se pueden agrupar en cuatro sistemas:
1. El sistema de soporte
2. El sistema de aumento
3. El sistema de iluminación
4. El sistema de ajuste

1. El sistema de soporte
Consiste en:
a. el pie
b. el bastidor
c. portaobjetivo revólver (cambiador de objetivos)
d. la platina
e. la platina mecánica, que imprime un movimiento lento y regulado al portaobjetos

2. El sistema de aumento
Consiste en un conjunto de lentes.
Las lentes del microscopio se encuentran montadas en dos grupos, uno en cada extremo de un
tubo relativamente largo, o tubo del microscopio.
- El primer grupo de lentes se halla en el extremo inferior del tubo, inmediatamente arriba
de la preparación que se va a examinar (el objeto), y se denomina objetivo.
- El segundo grupo se encuentra en el extremo superior del tubo, por donde mira el
microscopista y se llama ocular.

a. Los objetivos
Aumento
El poder de aumento de cada objetivo se
indica por un número grabado en la manga de
la lente:
- El objetivo x 10 aumenta 10 veces.

17
 Guía de microscopio

- El objetivo x 40 aumenta 40 veces.

- El objetivo x 100 aumenta 100 veces, (El objetivo x 100 generalmente se encuentra
marcado con un anillo rojo para indicar que se debe usar con aceite de inmersión).

La abertura numérica (AN)

La AN también se halla grabada en la manga de la lente, junto a
la indicación del poder de aumento; v.g.:
- 0,30 en el objetivo x 10
- 0,65 en el objetivo x 40
- 1,30 en el objetivo x 100
A medida que aumenta la AN es mayor el poder de resolución
(capacidad de hacer perceptibles detalles adyacentes muy cercanos,
separándolos y aclarándolos).
(Además, a medida que aumenta la AN disminuyen las dimensiones de la lente frontal
montada en la base del objetivo. La lente frontal del objetivo x 100 tiene el tamaño de una
cabeza de alfiler, por lo que se debe manejar con cuidado.)

En la manga del objetivo puede haber otros números:

La longitud recomendada en mm para el tubo del microscopio (entre
el objetivo y el ocular), es generalmente de 160 mm
El grosor recomendado en mm para el cubreobjetos utilizado para
tapar el portaobjetos, v.g., 0.17.
Las roscas para atornillar todos los objetivos son uniformes, de .r
añera que estos se pueden intercambiar en el revólver.

Distancia de operación del objetivo

Esta es la distancia que hay entre la lente frontal del objetivo y el portaobjetos cuando la
imagen se encuentra enfocada, a medida que el poder de aumento del objeto es mayor
disminuye la distancia de operación.

- Objetivo x 10: la distancia de operación

es de 5 - 6 mm.
- Objetivo x 40: la distancia de operación
es de 0,5 - 1,5 mm.
- Objetivo x 100: la distancia de operación
es de 0,15 - 0,20 mm.

18
 Guía de microscopio

Poder de resolución
Cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo
será mas clara la imagen y aumentará la capacidad de
poner de manifiesto detalles adyacentes muy cercanos,
separándolos y aclarándolos. El poder de resolución
máximo de un buen microscopio de laboratorio
médico es, aproximadamente, de 0,25 µm (el poder de
resolución del ojo humano normal es de 0,25 mm).

El aceite de inmersión aumenta el poder de resolución al hacer que se conserven muchos

rayos luminosos que se perderían por refracción al usar un objetivo seco.

b. El ocular
Aumento
El poder de aumento se encuentra marcado en el ocular:
- Un ocular x 4 aumenta 4 veces la imagen que produce el
objetivo.
- Un ocular x 6 aumenta la imagen 6 veces.
- Un ocular y 10 aumenta la imagen 10 veces. Si la imagen
del objeto se hace aumentar 40 veces mediante el objetivo
x 40 y en seguida 6 veces mediante el ocular x 6, el
aumento total será de 6 x 40 = 240.
Para calcular el aumento total de la imagen del objeto que se observa, multiplíquese el poder
de aumento del objetivo por el del ocular.
El poder de aumento de los microscopios utilizados en los laboratorios médicos oscila
entre 50 y 1000.

3. El sistema de iluminación

a. La fuente luminosa
De preferencia se empleará luz eléctrica, pues es más fácil de ajustar. Puede proporcionarla
un bombillo contenido en el microscopio por debajo de la platina o mediante un bombillo
exterior colocado frente al microscopio.

De lo contrario se podrá utilizar la luz del día. El microscopio nunca se debe utilizar ni debe
permanecer bajo la luz directa sol.

19
 Guía de microscopio

b. El espejo
El espejo refleja los rayos de la fuente luminosa
sobre el objeto. Por un lado su superficie es plana y
cóncava por el otro. El lado cóncavo constituye un
condensador de escaso poder y no se debe usar si
ya se cuenta con un condensador propiamente
dicho.

c. El condensador
El condensador lleva los rayos luminosos a un foco
común sobre el objeto que se habrá de examinar.

Se encuentra colocado entre el espejo y la platina. Se

puede elevar (iluminación máxima) y bajar
(iluminación mínima). Se debe centrar y ajustar
adecuadamente.

d. El diafragma
El diafragma, que se encuentra dentro del
condensador, se utiliza para reducir o ampliar el
ángulo, y por lo tanto, también la cantidad de luz que
entra en el condensador.

Cuanto más se abre el diafragma mas se amplía el

ángulo y en consecuencia aumenta la AN y se pueden
observar detalles más pequeños. Sin embargo, al
mismo tiempo se reduce el contraste.

e. Filtros
En algunos microscopios se ajustan filtros de colores (principalmente azules) debajo del
condensador. Se pueden dejar en su sitio o quitarlos, según el tipo de preparación que se
vaya a observar.

20
 Guía de microscopio

4. El sistema de ajuste
Este sistema comprende:
1. La cremallera de avance rápido: es el tomillo
mayor. Se utiliza primero para lograr la
aproximación del enfoque.

2. El tornillo micrométrico de avance lento:

hace que el objetivo se desplace más lentamente.
Se emplea para conseguir un enfoque perfecto
del objeto.

3. El tomillo de ajuste del condensador: se

utiliza para elevar el condensador y aumentar la
iluminación o descenderlo y reducir la
iluminación.

4. Los tomillos para centrar el condensador: puede haber tres tomillos colocados alrededor
del condensador: uno al frente, uno a la izquierda y uno a la derecha. Se usan para centrar el
condensador exactamente en relación con el objetivo.

5. El elevador del diafragma iris: este es un pequeño elevador que se encuentra fijo al
condensador. Se puede mover para cerrar o abrir el diafragma, reduciendo o aumentando
así el ángulo y la intensidad de la luz.

6. Reguladores de la platina mecánica: Se utilizan para desplazar el portaobjetos sobre la

platina:
1 tornillo lo desplaza hacia atrás y hacia adelante
1 tomillo lo desplaza a la izquierda o la derecha.

Manejo del microscopio

1. Sacar el microscopio de su estuche tomándolo con ambas manos, una que lo sostenga por el
soporte y la otra, por la base.

2. Colocarlo suavemente sobre la mesa, de manera que el soporte quede mirando hacia la persona.

21
 Guía de microscopio

3. Girar el portaobjetivos, hasta que el objetivo de menor aumento coincida con la abertura de la
platina. Mirando a través de él, mover el espejo hasta que la luz atraviese la abertura que tiene la
platina; luego ajustar el diafragma para que el campo visual quede iluminado en forma homogénea.
Si el objetivo o el ocular se encuentran empolvados o empañados, hay que limpiarlos
cuidadosamente con un pedazo de papel lente. No se debe usar otro material.

4. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición).

5. Para realizar el enfoque:

- Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se
corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o
ambos.
- Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

6. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación
desde el paso 4. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil
que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con
el objetivo de inmersión.

7. Empleo del objetivo de inmersión:

a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el
de x40.
d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de
accidente es muy grande.

22
 Guía de microscopio

h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar
otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el
objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la
preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de
observación.
j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

Esta figura muestra como se debe coger el microscopio

y como se debe conservar.

Procedimiento

El profesor le asignará las diferentes estructuras

que se deben observar, realice esquemas con cada
uno de los objetivos.

23
 Guía de microscopio

Complete los siguientes esquemas con los diferentes enfoques realizados en esta practica.

Consulta

1. Qué tipos de microscopios existen y cual es su uso

(por lo menos cuatro microscopios diferentes).

_____________________________________________
_____________________________________________
_____________________________________________
_____________________________________________

24
 Guía de microscopio

2. Elabora un dibujo del microscopio óptico y señala

todas sus partes.

3. Elabora un cuadro donde coloques recomendaciones

para el buen cuidado del microscopio incluyendo el
mantenimiento y las medidas de precaución para su
conservación.

4. Dibuja en el cuaderno todos los enfoques

realizados con los diferentes objetivos y anota tus
propias conclusiones.

5. Si una bacteria mide 0.3 micras, de que tamaño se

observa al enfocar con cada uno de los objetivos.

_____________________________________________

6. A través de Internet ingrese a la siguiente

página y desarrolle el e jercicio planteado allí:
http://encina.pntic.mec.es/~esarment/imagenes/practicas/PDescripcionMOp.pdf

25