Agrociencia

ISSN: 1405-3195
agrocien@colpos.mx
Colegio de Postgraduados
México

Moreno Martínez, Ernesto; Vázquez Badillo, Mario; Facio Parra, Federico

Uso de sales del ácido propiónico para inhibir la producción de aflatoxinas en granos almacenados de
maíz
Agrociencia, vol. 34, núm. 4, julio-agosto, 2000, pp. 477-484
Colegio de Postgraduados
Texcoco, México

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=30234411

Cómo citar el artículo

Número completo
Sistema de Información Científica
Más información del artículo Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal
Página de la revista en redalyc.org Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
 MORENO-MARTÍNEZ ET AL.: FUNGISTATOS CONTRA Aspergillus Flavus EN MAÍZ 477

USO DE SALES DEL ÁCIDO PROPIÓNICO PARA INHIBIR LA PRODUCCIÓN DE

AFLATOXINAS EN GRANOS ALMACENADOS DE MAÍZ

USE OF PROPIONIC ACID SALTS TO INHIBIT AFLATOXIN PRODUCTION IN

STORED GRAINS OF MAIZE

Ernesto Moreno-Martínez1, Mario Vázquez-Badillo2 y Federico Facio-Parra2

1
FES Cuautitlán, UNAM; actualmente en Cinvestav, Unidad Querétaro. Libramiento Norponiente,
Núm. 2000. Fraccionamiento Real de Juriquilla. 76230, Santiago de Querétaro, Querétaro.
(ernesto@servidor.unam.mx). 2Centro de Capacitación y Desarrollo de Tecnología de Semillas. Uni-
versidad Autónoma Agraria Antonio Narro. 25315, Saltillo, Coahuila.

RESUMEN ABSTRACT

El método más deseable y efectivo para controlar la producción
de aflatoxinas es la prevención del desarrollo del hongo Aspergillus
flavus Link. En el caso de los granos destinados a la alimentación
animal existe la posibilidad de prevenir o minimizar la contami-
nación con aflatoxinas al utilizar inhibidores químicos, entre los
que se encuentran las sales del ácido propiónico. Se evaluó la efec-
tividad de los propionatos de amonio, de calcio, y de sodio en el
combate del hongo y en la producción de aflatoxinas, en granos de
maíz (Zea mays L.) inoculados con A. flavus. Los granos se alma-
cenaron con contenidos de humedad de 16, 18, 20 y 22 %, durante
30 días a 27 oC. El grano tratado con las tres sales del ácido
propiónico presentó entre 0 y 11 % de invasión del hongo con pro-
ducciones de aflatoxinas entre 1.3 y 8.6 mg/kg. En cambio, el grano
de maíz no tratado con los propionatos presentó hasta 2233 mg/kg y
100 % de granos invadidos. Los tres propionatos previnieron la pro-
ducción de aflatoxinas en el grano, en condiciones ambientales fa-
vorables para el desarrollo de este hongo.
Prevention of the fungus growth of Aspergillus flavus L. is the most
desirable and effective known method for controlling aflatoxin
production. One alternative to prevent or reduce aflatoxin
production in stored grains for animal consumption, is the use of
chemical fungal inhibitors, such as the salts of propionic acid. To
determine the efficacy of ammonium, calcium, and sodium
propionates in reducing the development of A. flavus and the
aflatoxin production, grains of maize (Zea mays L.) were inoculated
with the fungus and treated with those chemicals. Grains were
stored at moisture contents of 16, 18, 20, and 22 % during a 30-
day period at 27 oC. The grains treated with the three propionic
acid salts showed 0 to 11 % kernel invasion by A. flavus, with an
aflatoxin contamination from 1.3 to 8.6 mg/kg. However, the non-
treated grain presented aflatoxin concentrations up to 2233 mg/kg
and 100 % of fungus invaded grains. The propionic acid salts
prevented the aflatoxin production under environmentally
favorable conditions for the development of A. flavus.

Palabras clave: Aspergillus flavus, Zea mays, contaminación de gra- Key words: Aspergillus flavus, Zea mays, grains contamination,
nos, micotoxinas. mycotoxins.

INTRODUCCIÓN INTRODUCTION

E T
l estudio intensivo y sistemático de las micotoxi-
nas se inició a principio de la década de 1960,
con el descubrimiento de las aflatoxinas. Estas
sustancias tóxicas son productos del metabolismo secun-
dario de ciertos hongos del género Aspergillus, de donde
derivaron su nombre (Sargent et al., 1961). Las dos espe-
cies de hongos productoras de aflatoxinas son Aspergillus
flavus Link y A. parasiticus Speare; la primera es más
común en maíz (Zea mays L.) y la segunda en cacahuate
(Arachis hypogaea L.) (Diener y Davis, 1987).
Las aflatoxinas son sustancias muy potentes produc-
toras de cáncer en animales de laboratorio (Wogan y
Newberne, 1967). Numerosas investigaciones se han
Recibido: Noviembre, 1998. Aprobado: Febrero, 2000.
Publicado como ARTÍCULO en Agrociencia 34: 477-484. 2000.
he intensive and systematic study of mycotoxins
began in the 1960’s with the discovery of aflatoxins.
These toxic substances are products of the
secondary metabolism of certain species of the Aspergillus
genus, from which they derived their name (Sargent et
al., 1961). The two species of fungi which produce
aflotoxins are Aspergillus flavus Link and A. parasiticus
Speare. The first species is more common in maize (Zea
mays L.), and the second in peanuts (Hypogaea arachis
L.) (Diener and Davis, 1987).
Aflatoxins are powerful carcinogens in laboratory
animals (Wogan and Newberne, 1967). Intensive research
has been conducted regarding the effects of aflatoxins on
domestic animals health including: retarded growth, slow
weight gain, respiratory and reproductive problems,
diarrhea, hemorrhage, reduced milk and egg production,

477
478 AGROCIENCIA VOLUMEN 34, NÚMERO 4, JULIO-AGOSTO 2000
hecho para evaluar el efecto de las aflatoxinas en la salud
de los animales domésticos, en los cuales se ha detectado
baja ganancia de peso, desarrollo lento, problemas en la
reproducción, diarrea, desórdenes respiratorios, hemo-
rragias, reducción en la producción de leche y huevos,
así como la alteración del sistema inmunológico, con el
consecuente incremento en el desarrollo de infecciones
por bacterias, virus, y otros agentes causantes de enfer-
medades, lo cual incluso ocasiona la muerte de los ani-
males (Keyl y Booth, 1971; Tung et al., 1975; Guthrie,
1979; Bodine y Mertens, 1983).
Existen evidencias que relacionan la ingestión de ali-
mentos contaminados con aflatoxinas y el desarrollo de
cáncer en humanos, particularmente en regiones cálidas
y húmedas, como África y la India.
La Agencia Internacional para la Investigación en
Cáncer (IARC), en 1987 consideró que las aflatoxinas
eran sustancias con alto poder cancerígeno en humanos.
En estudios hechos en Kenia, así como en Tailandia, se
ha encontrado una correlación positiva entre la ingestión
de aflatoxinas y el desarrollo de cáncer en el hígado (Bhat,
1989). También hay evidencias de que el aire con partí-
culas de polvo contaminado con aflatoxinas puede cau-
sar cáncer pulmonar (Dvorackova, 1976); esto es impor-
tante para la salud de los trabajadores que manejan gra-
nos contaminados con aflatoxinas.
La manera más efectiva de evitar los problemas oca-
sionados por las aflatoxinas es impedir que el hongo crez-
ca en el sustrato. En el caso de granos almacenados, esto
se puede lograr de varias formas, como: 1) Mantener la
humedad del grano por abajo de los requerimientos de
agua del hongo; esto es fácil en ciertos productos y en
particular en regiones secas; sin embargo, no lo es en las
regiones cálidas y húmedas, cuando no se cuenta con la
tecnología apropiada, particularmente la del secado; 2)
Conservar los granos a temperaturas inferiores a 10 oC,
con el riesgo de que se desarrollen hongos que pueden
crecer a esas temperaturas, como Penicillium, lo cual es
caro pues requiere de condiciones de refrigeración, so-
bre todo cuando se manejan grandes volúmenes de gra-
nos para la alimentación humana y animal; 3) La resis-
tencia genética de variedades que reduzcan o impidan la
invasión de los granos por el hongo productor de
aflatoxinas sería un método ideal; sin embargo, todavía
no se han desarrollado variedades con esas característi-
cas; y 4) Evitar la germinación de las esporas de los hon-
gos, así como el desarrollo del micelio en el sustrato sus-
ceptible de ser contaminado con estas micotoxinas, me-
diante el uso de inhibidores químicos.
Al respecto, el uso de sustancias químicas, en particu-
lar de ácidos orgánicos y sus sales (Sauer y Burroughs,
1974), para prevenir la producción de aflatoxinas es una
alternativa con grandes posibilidades de uso. Otros
fungicidas, aunque son efectivos contra los hongos de
and compromised immunological systems with
consequent increase in bacterial and viral infections, even
causing mortality in animals (Keyl and Booth, 1971; Tung
et al., 1975; Guthrie, 1979; Bodine and Mertens, 1983).
A correlation exists that is well documented in the
literature between the ingestion of food contaminated with
aflatoxins and the development of cancer in humans,
particularly in warm and humid regions such as Africa
and India.
The International Agency for Research on Cancer
(IARC), in 1987 considered that aflatoxins are powerful
substances causing cancer in humans. In studies
conducted in Kenya, as well as in Thailand, a positive
correlation has been established between the ingestion
of aflatoxins and the development of liver cancer (Bhat,
1989). Also there is evidence that particles of dust in the
air contaminated by aflatoxin result in pulmonary cancer
(Dvorackova, 1976). This is an important health concern
for workers handling aflatoxin contaminated grain.
The most effective way to avoid these problems caused
by aflatoxins is to prevent fungal growth in the substrate.
In the case of harvested grains, this can be achieved by
several means: 1) Maintaining the humidity of the grain
well below the water requirements of the fungus. While
this is fairly easy to do with certain grains and in dry
regions, it is not possible in warm and humid regions,
particularly where the appropriate technology (such as
grain dryers) is not available. 2) Maintaining the stored
grain temperature below 10 oC, with the risk that some
fungi, such as Penicillium, can grow under those
temperature conditions. This refrigeration approach is
cost-prohibitive for grains that are handled in great
volumes for human consumption and animal feeding. 3)
The development of genetic resistance in crops against
toxigenic fungi invasion in the grain could be the most
desirable approach; however, no resistant genotypes have
been developed thus far; and 4) The use of chemical
inhibitors in order to suppress the spore germination of
the fungi, as well as the development of the fungus
mycelium, in the substrate susceptible to contamination
by these mycotoxins.
The use of chemical substances to prevent aflatoxin
production is one of the most compelling alternatives,
using the organic acids and their salts (Sauer and
Burroughs, 1974). Other fungicides, while effective
against storage fungi such as A. flavus, can only be used
on seeds due to their toxicity to animals and the man
(Moreno and Ramírez, 1985).
The first propionic acid formulations that went to the
market were developed for the preservation of maize with
high moisture content (20-30 %) and destined for direct
feeding to cattle (Sauer and Burroughs, 1974).
Recently, a major market has emerged consisting of
different products derived from propionic acid to protect
 MORENO-MARTÍNEZ ET AL.: FUNGISTATOS CONTRA Aspergillus Flavus EN MAÍZ
almacén, entre ellos A. flavus, solamente se pueden usar
en semillas pues son tóxicos a los animales y al hombre
(Moreno y Ramírez, 1985).
Las primeras formulaciones de ácido propiónico que
salieron al mercado, se emplearon para el tratamiento de
granos de maíz con alto contenido de humedad (entre 20
y 30 %) destinados a la alimentación directa del ganado
vacuno (Sauer y Burroughs, 1974).
Recientemente han salido al mercado otras formas de
presentación de productos derivados del ácido propiónico
para proteger de la contaminación con aflatoxinas a los
granos almacenados y a los alimentos balanceados. És-
tos, como todo material higroscópico, pueden absorber
agua del ambiente que los rodea y si se encuentran en
ambientes cálidos con humedades relativas de 85 % o
superiores, las esporas de los hongos pueden germinar e
iniciar su desarrollo, con el consiguiente riesgo de pro-
ducir aflatoxinas. De ahí la importancia de contar con
inhibidores efectivos que eviten, durante el almacena-
miento de los granos y la vida de anaquel de los alimen-
tos balanceados, el desarrollo de los hongos productores
de aflatoxinas. Desgraciadamente la única información
disponible para los usuarios de estos productos es de tipo
comercial. Por esta razón, se evaluó la efectividad de tres
productos derivados del ácido propiónico, para prevenir
la producción de aflatoxinas en grano de maíz, en condi-
ciones de humedad y temperatura favorables para el de-
sarrollo de A. flavus.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizó grano de maíz blanco del híbrido AS-910, proporciona-
do por la Asociación de Productores de Semillas del Estado de Méxi-
co. El maíz fue cosechado en 1997 y el grano se mantuvo a 4 oC hasta
el momento de llevar a cabo la presente investigación, con un conteni-
do de humedad de 11 % y germinación de 99 %, sin presentar infec-
ción por hongos de almacén, ni contaminación con aflatoxinas.
El contenido de humedad de las semillas, tanto del lote original
como de las unidades experimentales, se determinó secando dos mues-
tras, cada una de 5 a 10 g de grano entero, en una estufa con circula-
ción forzada de aire, a 103 oC durante 72 h.
Para identificar y cuantificar la micoflora presente en el interior
de los granos, se emplearon 50 semillas de cada repetición, las que
fueron inicialmente desinfectadas en su superficie, durante dos minu-
tos, con hipoclorito de sodio a 3 %, y sembradas en el medio MSA
(malta, 2 %; sal común, 6 % y agar, 2 %). Posteriormente los granos
fueron incubados alrededor de 8 días a 25 oC (Moreno, 1988).
La germinación de las semillas se determinó en cuatro repeticio-
nes de 50 semillas de cada unidad experimental, en toallas de papel
húmedas enrolladas, las que fueron incubadas a 25 oC durante siete
días (ISTA, 1996). Dados los altos contenidos de humedad de las se-
millas, la prueba de germinación, durante el almacenamiento de la
semilla tratada con los fungistatos, solamente se hizo a los 10 días con
200 semillas por repetición. La germinación de la semilla testigo no
479
grains and feeds from aflatoxin contamination. Grains
and feeds, like all hygroscopic materials, can gain or lose
water from the atmosphere that surrounds them, and if
they are stored in warm atmospheres with relative
humidities of 85 % or higher, the spores of toxigenic fungi
can germinate and initiate their development, with the
consequent risk of aflatoxin production. This fact
underlines the importance of using effective inhibitors
capable of preventing the development of toxin-producing
fungi during the storage of grains and feeds.
Unfortunately, the only available information for the users
of these products is of commercial type. Therefore, we
evaluated the effectiveness of three products derived from
propionic acid in the prevention of aflotoxin production
in maize grain under conditions of humidity and
temperature favorable for the development of A. flavus.
MATERIALS AND METHODS
White maize grain of hybrid AS-910 was used, provided by the
Association of Producers of Seeds of the State of México. The maize
was harvested in 1997, remaining at 4 oC until carrying out the storage
tests, with a humidity content of 11 % and germination of 99 %; without
infection by storage fungi, nor contamination with aflatoxins.
The humidity content of the seeds in the original lot, as well as in
the experimental units, was determined by drying two samples of 5-
10 g of whole grain in a forced air circulation oven at 103 oC during
72 h.
The identification and quantification of the mycoflora present in
the grains of maize was determined in 50 grains of maize from each
replicate. The grains were surface-disinfected during two minutes in a
3 % sodium hypochloride solution and planted in MSA medium (malta,
2 %; common salt, 6 %, and agar, 2 %). Later the maize grains were
incubated around 8 days to 25 oC (Moreno, 1988).
The germination of the seeds was determined in four replications
of 50 seeds of each experimental unit, in rolled humid towels of paper,
and incubated to 25 oC during seven days (ISTA, 1996). Due to the
high moisture content of the seeds, the seed germination test was only
performed at 10 days of storage with 200 seeds by replication. The
germination of the control seed, heavily invaded by A. flavus, was not
determined in order to avoid laboratory personnel exposure in an
atmosphere highly contaminated with spores of the fungus.
The maize grains were inoculated with spores of the fungus A.
flavus, isolated from maize grown in the northern State of Tamaulipas.
The fungus was cultivated in Petri dishes containing the MSA medium
for seven days at 25 oC. The fungus spores were removed with a spatula
to prepare a water suspension with 10 000 spore per milliliter, which
was used to inoculate the experimental maize grains.
To inhibit the development of the toxigenic fungi, three
commercial products were tested: Luprosil NC (propionato of
ammonium, 53.5 %, a. i.) liquid presentation; and dust presentation of
Luprosil Salt (propionato of calcium, 77.5 % a.i.) and Luprosil Sodium
Salt (propionato of sodium, 76 % a.i.). The doses of the product were
based on the commercial recommendations (Table 1).
480 AGROCIENCIA VOLUMEN 34, NÚMERO 4, JULIO-AGOSTO 2000
se evaluó para no exponer al personal a la inhalación de una atmósfera
altamente contaminada con esporas del hongo.
Los granos fueron inoculados con esporas del hongo A. flavus,
aislado de maíz proveniente del norte del Estado de Tamaulipas. El
hongo se cultivó en cajas de Petri con el medio MSA durante siete
días a 25 oC; con una espátula se desprendieron las esporas del hongo
para preparar una suspensión con 10 000 esporas por mililitro, sus-
pensión que fue utilizada para inocular los granos de maíz.
Como inhibidores de hongos se utilizaron tres productos comer-
ciales: Luprosil NC (propionato de amonio, 53.5 % i.a.), presentación
líquida; Luprosil Sal (propionato de calcio, 77.5 %), presentación en
polvo; y Luprosil Sal Sódica (propionato de sodio, 76 % i. a.), presen-
tación en polvo. Las dosis del producto se basaron en la recomenda-
ción comercial (Cuadro 1).
Las aflatoxinas se determinaron de acuerdo con la metodología
de extracción, identificación y cuantificación desarrollada por VICAM,
utilizando para ello el equipo AFLATEST, con las columnas de
anticuerpos monoclonales para aflatoxina B1 y los reactivos analíti-
cos requeridos por el método. Cuando la concentración de la aflatoxina
B1 fue mayor de 50 mg/kg, se hicieron diluciones del extracto para su
cuantificación en el fluorómetro. La lectura de las columnas se hicie-
ron en un fluorómetro Sequoia Turner, Modelo 450 (Candlish et al.,
1991).
Preparación de las unidades experimentales
El contenido de humedad de los granos de maíz fue ajustado a 16,
18, 20 y 22 % mediante la adición de agua (Pixton, 1982); el menor
(16 %) es considerado como poco favorable para el desarrollo de las
especies del género Aspergillus, y los otros tres permiten un desarro-
llo vigoroso del hongo (Christensen y Kaufmann, 1969; Diener y Davis,
1970; Sauer et al., 1992). El agua que se añadió para obtener los con-
tenidos de humedad deseados sirvió también como vehículo para la
aplicación tanto del inóculo de A. flavus como de los inhibidores. El
ajuste de humedad se hizo en dos etapas: en la primera se añadió la
mitad del agua requerida y uno de los mililitros de agua fue sustituido
por un mililitro de la suspensión de esporas de A. flavus; después, los
frascos que contenían los granos de maíz se guardaron durante 20 horas
a 4 oC para permitir una homogeneización de la humedad de los granos.
En la segunda etapa se añadió el resto del agua con los inhibidores.
Los granos de maíz se almacenaron en frascos de vidrio, en los
que se colocaron 150 g por repetición. Los frascos se taparon con una
película delgada de polietileno (para reducir la pérdida de humedad
Cuadro 1. Dosis comerciales de los inhibidores de hongos de
acuerdo con la humedad del producto a tratar.
Table 1. Commercial doses of fungal inhibitors applied according
to the moisture content of the grain.
Contenido de Luprosil NC Luprosil Sal y Luprosil Sal Sódica
humedad (%) (L/t) (kg/t)
16 6.5 4.7
18 8.5 6.0
20 10.5 7.3
22 12.5 8.6
The aflatoxins were determined according to the AFLATEST
method developed by VICAM using monoclonal antibodies columns
for aflatoxin B1, as well as the analytical reagents required by the
method. When the concentration of the aflatoxin B1 was greater than
50 mg/kg, dilutions from the extract were made for their quantification
in the flouorometer Sequoia Turner, Modelo 450 (Candlish et al., 1991).
Preparation of the experimental units
The moisture content of the maize grains was adjusted to four
levels (16, 18, 20 and 22 %) by means of the addition of water (Pixton,
1982). The lowest (16 %) is considered to be the less favorable for the
development of the species of the Aspergillus genus, compared to 18,
20, and 22 % which favors a vigorous development of the fungus
(Christensen and Kaufmann, 1969; Diener and Davis, 1970; Sauer et
al., 1992). The water that was added to reach the desired moisture
contents served as vehicle for the inoculum of A. flavus as well as for
the chemical inhibitors. The moisture content adjustment was done in
two stages: in the first, half of the required water was added and one
milliliter was substituted by a milliliter of the spore suspension of A.
flavus; later, the bottles containing the maize were stored 20 h at 4 oC
to allow the moisture content homogenization of the grains. In the
second stage, the rest of the water containing the chemical inhibitors
was added.
The grain was stored in glass bottles, 150 g of maize per replication.
The bottles were covered with thin polyethylene film, to lessen the
loss of humidity from the grain; ten perforations with a pin were made
to the polyethylene film in order to avoid the carbon dioxide
accumulation generated by the respiration of grains and fungi, since
this gas has an inhibitory effect on this type of fungi. The storage
temperature was 27 oC, a very favorable temperature for the production
of aflatoxinas (Diener and Davis, 1987). The storage period was only
30 days, with samplings at 10, 20 and 30 days storage due to the highly
favorable temperature and humidity conditions for the development
of the fungus (Diener and Davis, 1970, 1987).
The experiment was conducted as a completely randomized 4x4x3
factorial trial with three replications: a) moisture content (16, 18, 20
and 22 %); b) fungal chemical inhibitors, including the control and c)
storage periods (10, 20 and 30 days). The means comparison were
performed according to the Duncan’s (0.05) multiple range test.
RESULTS AND DISCUSSION
The moisture contents of maize grain inoculated with
A. flavus, stored during 30 days and 27 oC, remained
within the desired limits (Table 2).
The analysis of variance showed significant
differences (p=0. 01) in aflatoxin production for storage
periods, as well as in the interaction storage periods x
moisture content, and periods x fungal inhibitors.
The production of aflatoxins was low (from 1.3 to
8.6 mg/kg) in grain treated with the three fungal inhibitors
in all moisture contents for each sampling (Table 3). In
the controls, the production of aflatoxins was high, with
 MORENO-MARTÍNEZ ET AL.: FUNGISTATOS CONTRA Aspergillus Flavus EN MAÍZ 481

del grano) a la cual se le hicieron diez perforaciones con un alfiler Cuadro 2. Promedio del contenido final de humedad del grano de
para evitar la acumulación de dióxido de carbono generado por la maíz AS-910, inoculado con Aspergillus flavus, tratado
con tres fungistatos comerciales y almacenado 30 días
respiración de los granos de maíz y la de los hongos, pues este gas a 27 oC.
también tiene un efecto fungistático. La temperatura de almacena- Table 2. Average of the final grain moisture content of maize AS-
miento fue 27 oC, que es considerada como muy favorable para la 910, inoculated with Aspergillus flavus, treated with salts
producción de aflatoxinas (Diener y Davis, 1987). El periodo de al- of propionic acid and stored 30 days at 27 oC.
macenamiento fue sólo de 30 días, con muestreos a 10, 20 y 30 días, Contenido inicial de humedad (%)
Fungistato
dadas las condiciones óptimas de temperatura y humedad para el de-
(Propionatos)
sarrollo del hongo (Diener y Davis, 1970, 1987). 16 18 20 22
El experimento se analizó con base en un diseño completamente
Amonio 15.5 17.9 20.5 21.7
al azar con tres repeticiones, en arreglo factorial completo 4x4x3, pro- Calcio 16.0 17.7 20.4 21.1
ducto de los factores: a) contenido de humedad (16, 18, 20 y 22 %); b) Sodio 15.6 17.7 20.6 21.9
fungistatos (los tres inhibidores y un testigo) y c) periodos de almace- Testigo 16.0 17.9 21.9 22.9
namiento (10, 20 y 30 días). La comparación de medias se efectuó
mediante la prueba de Duncan (0.05). Cuadro 3. Producción de aflatoxinas en granos de maíz AS-910,
inoculado con Aspergillus flavus, tratado con tres fun-
RESULTADOS Y DISCUSIÓN gistatos comerciales, almacenado por 30 días a 27 oC,
con cuatro contenidos de humedad.
Table 3. Aflatoxin production in maize grain, AS-910, inoculated
En el Cuadro 2 se observa que los contenidos de hu- with Aspergillus flavus, treated with propionic acids salts
medad del grano de maíz inoculado con A. flavus, alma- and stored 30 days at 27 oC with four moisture contents.
cenado durante 30 días a 27 oC, se mantuvieron dentro
Contenido de aflatoxinas (mg/kg)
de los límites deseados. Fungistato Contenido de
El análisis de varianza mostró diferencias altamente (Propionatos) humedad (%) 10 días 20 días 30 días
significativas en producción de aflatoxinas (p=0.01) para
los periodos de almacenamiento, así como para la inte- Amonio 16 2.0 i 2.3 i 2.0 i
Amonio 18 8.0 i 2.0 i 2.3 i
racción periodos x contenidos de humedad y periodos x Amonio 20 4.3 i 3.6 i 2.6 i
fungistatos. Amonio 22 2.3 i 2.3 i 4.3 i
En el Cuadro 3 se observa que la producción de Calcio 16 6.3 i 2.3 i 3.6 i
aflatoxinas fue baja (de 1.3 a 8.6 mg/kg) en el grano tra- Calcio 18 3.0 i 2.0 i 5.6 i
Calcio 20 4.3 i 2.0 i 3.6 i
tado con los tres fungistatos, en todos los contenidos de Calcio 22 4.3 i 1.3 i 3.0 i
humedad y en cada muestreo. En los testigos la produc- Sodio 16 2.6 i 3.0 i 3.0 i
ción de aflatoxinas fue alta, con excepción del testigo Sodio 18 4.0 i 3.0 i 2.3 i
almacenado con un contenido de humedad de 16 %, en Sodio 20 4.3 i 8.6 i 2.0 i
Sodio 22 4.0 i 3.0 i 2.3 i
el que a los 10 días la concentración de aflatoxinas fue de Testigo 16 15.6 i 57.0 i 116.0 h
15.6 mg/kg; sin embargo, a los 20 días fue de 57 mg/kg Testigo 18 21.0 i 916.0 g 2133.0 b
y 116 mg/kg a los 30 días. Testigo 20 1600.0 c 1433.0 e 2233.0 a
La producción promedio de aflatoxinas en el grano Testigo 22 1500.0 d 1100.0 f 2166.6 b
tratado con los tres inhibidores químicos no excedió a Valores seguidos por la misma letra no difieren estadísticamente
5 mg/kg de grano (Cuadro 4). Como en México la tole- (Duncan, 0.05).
rancia máxima para los granos destinados a la alimenta-
ción del hombre y la de las aves es de 20 mg/kg de ali- the exception of control grain stored with a 16 %
mento, se considera que la protección dada por los tres humidity content, in which the aflatoxin concentration was
fungistatos es satisfactoria. 15.6 mg/kg; however, at 20 and 30 days the aflatoxin
Con base en los resultados de los Cuadros 3 y 4, la concentration was 57.0 mg/kg and 116.0 mg/kg,
humedad de 16 %, que es común encontrar en bodegas respectively.
de grano de maíz en México, permitió el desarrollo de A. The average aflatoxin production in the grain treated
flavus y por lo tanto la producción de aflatoxinas. Asimis- with the three fungal inhibitors did not exceed 5 mg/kg
mo, los resultados señalan que los tres fungistatos fueron (Table 4). In México, the aflatoxin tolerance for maize
efectivos en las condiciones experimentales indicadas. grain for food or feed is 20 mg/kg, so the effectiveness of
Como era de esperarse por el tipo de inoculación apli- the fungal inhibitors is considered satisfactory.
cado, el único hongo que se aisló fue A. flavus, cuya pre- According to the results shown in Tables 3 and 4, the
sencia fue abundante en los granos no tratados con los 16 % moisture content of the maize grain, which is
propionatos (Cuadro 5); en este caso, la alta incidencia commonly found in the storage of this grain in different
del hongo concuerda con la alta producción de aflatoxinas. regions of Mexico, allowed the proliferation of A. flavus
482 AGROCIENCIA VOLUMEN 34, NÚMERO 4, JULIO-AGOSTO 2000

Cuadro 4. Contenido promedio de aflatoxinas (mg/kg) en grano and the production of aflatoxins. The results also indicate
de maíz AS-910, inoculado con Aspergillus flavus, tra- that the three inhibitors tested were effective under these
tado con tres fungistatos comerciales, almacenado por
30 días a 27 oC; promedio de tres fechas de muestreo. experimental conditions.
Table 4. Average aflatoxin production (mg/kg) in grain of maize, As expected by the type of inoculation used, the only
AS-910, inoculated with Aspergillus flavus, treated with fungus isolated was A. flavus, whose presence was
three fungal inhibitors and stored 30 days at 27 oC; abundant in grains not treated with the propionates
average of three sampling periods.
(Table 5). The high incidence of A. flavus in grains not
Contenido de humedad (%) treated with the fungicides, agrees with the high
Fungistato
production of aflotoxins.
(Propionatos) 16 18 20 22 Insofar as the prevention of the development of this
Amonio 2e 4e 4e 3e fungus is concerned, the results agree with those of Sauer
Calcio 4e 4e 3e 3e and Burroughs (1974), who achieved a good control of
Sodio 3e 3e 5e 3e the fungi with the propionic acid products they tested. It
Testigo 63 d 1023 c 1755 a 1588 b is also known that pure propionic acid has been
Valores seguidos por la misma letra no difieren estadísticamente successfully used to prevent the development of fungi in
(Duncan, 0.05). grains with high moisture contents (around 30 %);
however, the disadvantage of its use is that pure propionic
Cuadro 5. Porcentaje de grano de maíz AS-910 invadido por acid is corrosive, which is a problem in metallic silos
Aspergillus flavus, tratado con tres propionatos comer- (Sauer et al., 1992).
ciales, almacenado por 30 días a 27 oC, con cuatro con- The germination of the treated grain decreased rapidly,
tenidos de humedad.
Table 5. Percentage of grain of maize, AS-910, invaded by Aspergillus with germination rates between 0 and 67 % at 10 days of
flavus, treated with commercial propionates and stored 30 storage (Table 6). Nevertheless, there was evidence of
days at 27 oC under four moisture contents. interaction between the type of propionate and the
moisture content of the seed during the storage period,
Fungistatos Contenido de Días de almacenamiento
since grains with moisture contents of 16 and 18 %, treated
(Propionatos) humedad (%)
10 20 30 with propionate of calcium and propionate of sodium had
higher germination rates than grains with moisture
Amonio 16 3 2 0 contents of 20 and 22 %. On the other hand, the loss of
Amonio 18 0 0 0
Amonio 20 0 0 0 viability of grains treated with propionate of ammonium,
Amonio 22 0 0 0 was almost total for all moisture contents. These results
Calcio 16 4 3 1 indicate that, in the case of the grain treated with
Calcio 18 5 4 3
Calcio 20 0 0 0
Calcio 22 2 0 1 Cuadro 6. Germinación del grano de maíz AS-910 inoculado con
Sodio 16 3 4 2 Aspergillus flavus, tratado con tres fungistatos comer-
Sodio 18 2 3 1 ciales, almacenado durante 10 días a 27 oC, con cuatro
Sodio 20 11 8 0 contenidos de humedad.
Sodio 22 8 0 1 Table 6. Seed germination of maize AS-910 inoculated with
Testigo 16 52 88 71 Aspergillus flavus, treated with propionic acid salts and
Testigo 18 98 100 100 stored 10 days at 27 oC under four initial moisture
Testigo 20 100 100 100 contents.
Testigo 22 100 100 100
Contenido de Germinación (%)
Fungistato humedad (%)
En cuanto a la prevención del desarrollo de este hon-
go, los resultados concuerdan con los de Sauer y Burroughs Amonio 16 3d
Amonio 18 0d
(1974), quienes detectaron un buen control de los hon- Amonio 20 0d
gos con productos derivados del ácido propiónico. Igual- Amonio 22 0d
mente, se sabe que el ácido propiónico puro ha sido utili- Calcio 16 67 a
zado con éxito para prevenir hongos en granos almace- Calcio 18 27 c
Calcio 20 5d
nados con altos contenidos de humedad (alrededor de Calcio 22 0d
30 %); sin embargo, el inconveniente es que el ácido puro Sodio 16 48 b
es corrosivo, lo cual es un problema en silos metálicos Sodio 18 25 c
(Sauer et al., 1992). Sodio 20 4d
Sodio 22 0d
La germinación de los granos tratados disminuyó
rápidamente, ya que en sólo 10 días de almacenamien- Valores seguidos por la misma letra no difieren estadísticamente
to fluctuó entre 0 y 67 % (Cuadro 6). Sin embargo, (Duncan, 0.05).
 MORENO-MARTÍNEZ ET AL.: FUNGISTATOS CONTRA Aspergillus Flavus EN MAÍZ
evidentemente hubo interacción entre el tipo de propio-
nato y el contenido de humedad del grano durante el al-
macenamiento, pues cuando se trataron con propionato
de calcio o con propionato de sodio, con contenidos de
humedad de 16 y 18 %, la germinación fue mayor que en
los granos con contenidos de humedad de 20 y 22 %. En
cambio, en los granos tratados con propionato de amonio
la pérdida de la viabilidad fue casi total en todos los con-
tenidos de humedad. En el caso del grano tratado con
propionato de amonio, la pérdida de viabilidad, práctica-
mente en ausencia de hongos de almacén, se debió prin-
cipalmente a la acción fitotóxica del fungistato.
En el caso de los granos con contenidos de humedad
de 16 y 18 % tratados con los propionatos de calcio y de
sodio, la acción del fungistato no fue tan severa como en
el caso del propionato de amonio, ya que con los mismos
contenidos de humedad las germinaciones fueron mayo-
res. Los granos con contenidos de humedad de 20 y 22 %,
tratados con los propionatos de calcio y de sodio, perdie-
ron su poder germinativo (0 a 5 %), lo cual indica que
con estos fungistatos, a medida que la humedad es ma-
yor, se aumenta su actividad fitotóxica. Sin embargo,
además del efecto fitotóxico de los fungistatos, hay que
considerar el efecto nocivo de los altos contenidos de
humedad sobre la viabilidad de las semillas, lo cual, des-
de hace décadas ha sido ampliamente reconocido
(Christensen y Kaufmann, 1969).
Se sugiere explorar dosis menores de los fungistatos
con el fin de determinar dosis mínimas de efectividad en
la prevención de la producción de aflatoxinas, así como
evaluar otros productos disponibles en el mercado. Por
último, se sugiere investigar el efecto de éstos y otros
fungistatos para determinar con qué dosis y con qué con-
tenidos de humedad es posible proteger a las semillas
agrícolas sin afectar su viabilidad.
CONCLUSIONES
El propionato de amonio, en las dosis de 6.5, 8.5, 10.5
y 12.5 L/t, al igual que los propionatos de calcio y de
sodio, en las dosis de 4.7, 6.0, 7.3 y 8.6 kg/t resultaron
efectivos para prevenir la producción de aflatoxinas en el
grano de maíz, cuando éste se almacenó con contenidos
de humedad desde 16 hasta 22 %, a una temperatura de
27 oC. La producción de aflatoxinas en el grano tratado
con estos fungistatos no fue mayor de 8.6 mg/kg; por el
contrario, el maíz testigo presentó contaminaciones de
15.6 a 2233 mg/kg. La producción de aflatoxina en los
granos tratados con los tres propionatos fueron inferio-
res al límite de 20 mg/kg permitido por las autoridades
sanitarias de México. A los diez días de almacenamiento se
observó fitototoxicidad de los fungistatos en la germina-
ción del grano de maíz. La germinación del grano tratado
con las cuatro dosis del propionato de amonio fue práctica-
mente 0 %.
483
propionate of ammonium, the loss of viability occurred
almost in the absence of storage fungi, and was due to a
phytotoxic effect caused by this fungal inhibitor.
In the case of grains with moisture contents of 16 and
18 % treated with the propionates of calcium and sodium,
the action of the fungicide was not as severe as in the
case of the propionate of ammonium, since at that
moisture contents the germinations rates were higher. The
grains with humidity contents of 20 and 22 %, when
treated with the propionates of calcium and sodium, lost
their viability (0–5 %), which indicates that their
phytotoxicity increases with higher moisture contents. In
addition to the phytotoxic effect of the fungal inhibitors
it is important to consider the injurious effect of the high
moisture contents on the viability of the seeds, which for
decades has been widely recognized (Christensen and
Kaufmann, 1969).
It is suggested that smaller doses of the tested
inhibitors be tried, with the purpose of determining
minimum doses of effectiveness in the prevention of the
production of aflatoxinas. In addition, it would be
advisable to test other chemical substances already
available in the market. Finally, it is recommended that
the effect of these and other fungal inhibitors be
investigated to determine doses and moisture contents to
protect the agricultural seeds without affecting their
viability.
CONCLUSIONS
The propionate of ammonium, in the four tested doses,
6.5, 8.5, 10.5 and 12.5 L/t, as well as the propionate of
calcium and sodium, in the doses of 4.7, 6.0, 7.3 and
8.6 kg/t, were effective to prevent the aflatoxin production
in the grain of maize, when stored at 27 oC with moisture
contents from 16 to 22 %. The production of aflatoxinas
in the grain treated with these inhibitors was not greater
than 8.6 mg/kg. On the other hand, the non treated maize
(control) presented an aflatoxin contamination from 15.6
to 2233 mg/kg. The aflatoxin production in grains treated
with the three propionates were lower than the limit of
20 mg/kg allowed by the sanitary authorities of México.
At ten days of storage, a phytotoxicity effect of the fungal
inhibitors was observed on the grain germination. The
germination of the maize grain treated with the four doses
of the propionate of ammonium, was practically 0 %.
—End of the English version—
pppvPPP
AGRADECIMIENTO
A las Biólogas Martha Quezada Viay y Josefina Moreno Lara, así
como al Sr. Gustavo Hernández, por su apoyo técnico.
484 AGROCIENCIA VOLUMEN 34, NÚMERO 4, JULIO-AGOSTO 2000

LITERATURA CITADA ISTA (International Seed Testing Association). 1996. International rules
for seed testing. Rules 1996. Seed Sci. Technol. (Suppl.) 24: 1-
335.
Bhat, R. V. 1989. Risk to human health associated with consumption
Keyl, A. C., and A. N. Booth. 1971. Aflatoxin effects in livestock. J.
of groundnuts contaminated with aflatoxins. In: Aflatoxin
Am. Oil Chem. Soc. 48: 599-604.
Contamination of Groundnuts. Proc. Int. Workshop. 6-9 october,
Moreno M., E. 1988. Manual para la Identificación de Hongos en
1987. ICRISAT. Patancheru, India. pp: 19-29.
Granos y sus Derivados. Programa Universitario de Alimentos.
Bodine, A. B., and D. R. Mertens. 1983. Toxicology, metabolism, and
UNAM. México. 109 p.
physiological effects of aflatoxin in the bovine. In: Aflatoxin and
Moreno M., E. y C. M. Christensen. 1970. Efecto de la humedad y
Aspergillus flavus in Corn. Diener, U. L., R. L. Asquith, and J. W.
hongos sobre la viabilidad de maíz almacenado. Revista Latino-
Dickens (eds.). Alabama Agric. Exp. Stn. Auburn University,
Americana de Microbiología 12: 115-121.
Alabama. pp: 46-50.
Moreno, M. E., and G. J. Ramírez 1985. Protective effect of fungicides
Candlish, A. A. G., M. K. Faraj, G. Harran, and J. E. Smith. 1991.
on corn seed stored with low and high moisture content. Seed Sci.
Immunoaffinity column chromatography for detection of total
Technol. 13: 285-290.
aflatoxins in experimental situations. Biotechnology Techniques
Pixton, S. W. 1982. The importance of moisture and equilibrium relative
5: 317-322.
humidity in stored products. Tropical Stored Products Information
Christensen, C. M., and H. H. Kaufmann. 1969. Grain Storage. The
43: 16-29.
Role of Storage Fungi in Quality Loss. University of Minnesota
Sauer, D. B., and R. Burroughs. 1974. Efficacy of various chemicals
Press. Minneapolis, Minn. 153 p.
as grain mould inhibitors. Trans. Am. Soc. of Agric. Eng. 17: 557-
Diener, U. L., and N. D. Davis. 1970. Limiting temperature and relative
559.
humidity for aflatoxin production by Aspergillus flavus in stored
Sauer, D. B., R. A. Meronuck, and C. M. Christensen. 1992. Microflora.
peanuts. J. Am. Oil Chem. Soc. 47: 347-351.
In: Storage of Cereal Grains and Their Products. Sauer, D. B.
Diener, U. L., and N. D. Davis. 1987. Biology of Aspergillus flavus y
(ed.). 4 th ed. Am. Assoc. Cereal Chem. St. Paul, Minn. pp: 313-
A. parasiticus. In: Aflatoxin in Maize. Zuber, M. S., E. B. Lillehoj,
340.
and B. L. Renfro (eds.). Proc. of Workshop. CIMMYT. April 1986.
Sargent, K., A. Sheidan, J. O. Kelly, and R. B. A. Carnaghan. 1961.
El Batán, México. pp: 33-40.
Toxicity associated with certain samples of groundnuts. Nature
Dvorackova, I. 1976. Aflatoxin inhalation and alveolar cell carcinoma.
192: 1096-1097.
Brit. Medical J. 1: 691.
Tung, H. T., F. W. Cook, R. D. Wyatt, and P. B. Hamilton. 1975. The
Guthrie, L. D. 1979. Effects of aflatoxin in corn on production and
anemia caused by aflatoxin. Poultry Sci. 54: 1962-1969.
reproduction in dairy cattle. J. Dairy Sci. 62: 134-135.
Wogan, G. E., and P. M. Newberne. 1967. Dose-response characteristics
IARC (International Agency for Research on Cancer). 1987.
of aflatoxin B1 carcinogenesis in the rat. Cancer Res. 27: 543-
Monograph on the Evaluation of Carcinogenic Risk to Humans.
548.
IARC. Lyon, France. Suppl. 1: 82-87