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SANTA ELENA
FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR
ESCUELA DE BIOLOGÍA MARINA
ASIGNATURA: Patología
BIOENSAYO
INTEGRANTES
Nicole Naranjo O.
Noha Rivilla M.
CURSO
5/1 BIOMAR
DOCENTE
PERÍODO
2019-II
Resumen:
El uso de fármacos comerciales es muy común para tratar distintos cuadros de dolencias
leves generales como lo es el ibuprofeno, motivo por el cual es necesario investigar el
impacto ambiental que estos producen cuando son desechados. El objetivo del presente
bioensayo fue determinar el grado mínimo de toxicidad de ibuprofeno en distintas
concentraciones en tilapia (Oreochromis sp) a través de la comparación del nivel de
afectación en órganos diana mediante cultivos microbiológicos. Los ensayos
experimentales se llevaron a cabo exponiendo a los organismos a concentraciones de
ibuprofeno de 1 y 2mg𝐿−1 en tallas pequeñas y medianas respectivamente. Ninguno de
los 2 tratamientos arrojó porcentaje de mortalidad directamente, pero se logró evidenciar
las afectaciones a nivel cutáneo de la concentración más alta y se estableció la diferencia
de efecto del fármaco en ambos tratamientos sobre el órgano más afectado que en ambos
casos fue el hígado.
Abstract:
The use of commercial drugs is very common to treat different general mild medical
conditions such as ibuprofen, which is why it is necessary to investigate the
environmental impact they produce when they are discarded. The objective of this
bioassay was to determine the minimum degree of toxicity of ibuprofen in different
concentrations in tilapia (Oreochromis sp) by comparing the level of involvement in
target organs by microbiological cultures. Experimental tests were carried out exposing
organisms to ibuprofen concentrations of 1 and 2mgL ^ (- 1) in small and medium sizes
respectively. None of the 2 treatments showed a percentage of mortality directly, but it
was possible to show the effects at the cutaneous level of the highest concentration and
the difference in the effect of the drug in both treatments on the most affected organ than
in both cases was the liver.
INTRODUCCIÓN: El ibuprofeno es un antiinflamatorio no
esteroideo (AINE), utilizado
La Tilapia (Oreochromis sp) es un pez frecuentemente como antipirético,
teleósteo del orden perciforme, analgésico y antiinflamatorio así como
perteneciente a la familia Cichlidae, también para el alivio sintomático de la
originario de África, habita en la mayor fiebre, dolor de cabeza, dolor dental,
parte de las regiones tropicales del dolor muscular o mialgia, molestias de la
mundo, abundante en ríos donde las menstruación, dolor neurológico de
condiciones son favorables para su carácter leve o moderado y dolor
reproducción y crecimiento. Estos peces postquirúrgico, o para tratar cuadros
viven en el agua cálida y su óptimo inflamatorios, como los que se presentan
desarrollo se logra en temperaturas en artritis, artritis reumatoide (AR),
superiores a los 20° C. La temperatura hinchazón muscular, dolor de garganta y
critica inferior esta alrededor de los 12 – artritis gotosa, incluso es usado en
13° C. (Castillo Campo, L. 2002) Viven ocasiones para tratar acné debido a sus
tanto en aguas dulces como salobres e propiedades antiinflamatorias. (Dec de
incluso pueden acostumbrarse a las 1984). El organismo es capaz de
aguas poco oxigenadas. Son por metabolizar hasta un 90% del ibuprofeno
definición Omnívoros, pero con una ingerido, pero el restante 10% se excreta
tendencia hacia una dieta vegetariana. a las aguas junto con los otros
Las adaptaciones estructurales de las metabolitos resultantes de la digestión
tilapias a esta dieta son principalmente del fármaco. Este hecho puede afectar
un largo intestino muy plegado, dientes más de lo que creemos al medio
bicúspides o tricúspides sobre las ambiente, debido al fenómeno de
mandíbulas y la presencia de dientes bioacumulación y toxicidad del fármaco.
faríngeos. Los alevines se alimentan de Dado que la principal vía por la que el
partículas de fitoplancton y pequeñas fármaco puede llegar al medio ambiente
cantidades de zooplancton. Los peces es por medio de las aguas residuales, un
jóvenes tienen una dieta más variada, mejor tratamiento de estas aguas
que incluye una gran cantidad de incorporando más filtros o tratamientos
copépodos, cladóceros, crustáceos y físico-químicos adecuados podría
otros pequeños invertebrados. En disminuir la presencia de este fármaco en
cautiverio suelen aceptar bien como el entorno. Se ha logrado la eliminación
alimento, a la artemia salina, los adultos de ibuprofeno de las aguas residuales por
son muy voraces, suelen barrer la ultrasonidos, y mediante la degradación
superficie y el fondo de los estanques en fotocatalítica del ibuprofeno mediante
búsqueda de insectos, crustáceos, dióxido de titanio. (F. Méndez-Arriaga y
ocasionalmente podrían llegar a ingerir otros).
larvas de anfibios pequeñas y peces
pequeños, que captan mediante la La hematología se utiliza para el
filtración del agua que llega a sus bocas análisis de las alteraciones de los
y es expulsada a través de sus branquias. componentes sanguíneos y sus posibles
( Del Prado, y otros, 2004) alteraciones, en los glóbulos blancos
pueden ser de su forma (tamaño y
forma) o de su funcionamiento, sobre
todo los neutrófilos y los linfocitos. En (DIBICO, 2017) El empleo de este
muchos casos, se trata de enfermedades medio es de acuerdo al tipo de estudio
hereditarias que se sospechan en por realizar. Las unidades formadoras
pacientes con infecciones repetidas.
de colonias (UFC) es una unidad de
También se producen en algunas
infecciones, como la mononucleosis medida que se emplea para la
infecciosa, en reacciones ante algunos cuantificación de microorganismos, es
medicamentos, y en anemias y decir, para contabilizar el número
neoplasias. de bacterias o
células fúngicas (levaduras)1 viables en
La alteración por aumento en el número una muestra líquida o sólida. La
de leucocitos, se denomina leucocitosis,
viabilidad se define como la habilidad de
y según el tipo que está aumentado, se
habla de neutrofilia, de linfocitosis y de multiplicarse por fisión binaria en
eosinofilia. Se denomina leucopenia a condiciones controladas.
la disminución en el recuento de (Benington,1999)
glóbulos blancos. (Fisterra, 2019)
El presente trabajo determinara el grado
La tinción de May-Grünwald mínimo de toxicidad de ibuprofeno en
Giemsa (MGG) es una técnica distintas concentraciones en tilapia
de tinción derivada del método de (Oreochromis sp) y realizara una
Romanowsky que se utiliza comparación de afectación en órganos
principalmente para el coloreo de diana mediante diagnóstico de
muestras de frotis sanguíneos o observación, patología en fresco: donde
extendidos de médula ósea. se demostró el estado fisiológico de los
organismos, cultivos microbiológicos:
Una cámara de en el cual se demostró los
Neubauer o hemocitómetro es un microrganismos presentes en los órganos
instrumento utilizado para realizar el diana, y hematología: se realizó el conteo
recuento de esporas y células en un de células para la identificación del
medio líquido, que puede ser; un cultivo efecto de los tratamientos a nivel
celular, sangre, orina, líquido sistémico, obtenido de cada una de las
cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc. peceras control, tratamientos y replicas,
En microbiología, un cultivo es un para la comprobación del objetivo
método para la multiplicación planteado mediante los resultados
de microorganismos, tales como lo obtenidos.
son bacterias en el que se prepara MATERIALES Y MÉTODOS:
un medio óptimo para favorecer el
proceso de estudio de las bacterias y Tipo y lugar de estudio:
otros microorganismos. (Restrepo, 2002)
El estudio fue de tipo observacional.
El agar nutritivo contiene extracto de
Los organismos de estudio fueron
carne, peptona y agar, siendo una
capturados de un cultivo extensivo tipo
formulación suficiente para el desarrollo
estanque en la comuna de Olón en la
de los microorganismos. El extracto de
villa San Vicente de Loja, provincia de
carne proporciona al medio fuente de
Santa Elena, se recolectaron un total de
carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas.
70 organismos aparentemente en buen Se evaluó a cada uno de los organismos
estado y fueron trasladados hacia el por observación básica donde
laboratorio de prácticas experimentales constatamos el estado fisiológico de
de la Universidad Estatal Península de ojos, branquias, aletas, escamas,
Santa Elena en bolsas plásticas del mucosidad, tamaño, peso, y conducta de
mismo lugar con suficiente oxígeno, el estos estando en cautiverio, así como
tiempo de transportación fue de 2 horas también se examinó a los organismos
y media. durante y después de aplicado el
tratamiento.
Al llegar fueron trasladados a un tanque
de 500L con agua previamente Patología en fresco
declorada y fueron liberados
paulatinamente, se encontraron 3 Se realizó un corte en la parte superior de
organismos muertos producto del estrés la cabeza de pez para evitarles el dolor y
generado por el viaje, se les suministró sufrimiento, se hizo un pequeño corte a
oxígeno de la toma de aire proveniente la altura del ano, con una tijera se cortó
del blower y se les alimentó hasta las branquias en forma redonda,
provisionalmente con una mezcla de luego se realizó otro corte en línea recta
harina de avena y arroz. del ano hacia la parte inferior del
opérculo y otro alrededor de las
Por último, fueron trasladados posterior branquias, esto ayudó a la óptima
al período de aclimatación a peceras con observación de los órganos, se realizó un
capacidad de 10L siendo separados por corte en los órganos diana, se colocó en
tamaños, se les suministró oxígeno y el portaobjetos y con el cubreobjetos se
alimento balanceado para tilapia según hizo el squash, para proceder a la
el factor de conversión alimenticio a observación en el microscopio.( OIE,
partir de un promedio la biomasa 2012)
obtenida por pecera respecto a la
siguiente tabla: Análisis hematológico por tinción de
GIEMSA
Conteo de hemocitos
Técnica HE
Hígado:
Intestino:
Fig. 15. Fotomicrografía de un corte histológico del intestino Fig. 16 Muestra de intestino de
de C. ensiferus. Se observa un tejido normal, compuesto por organismo de pecera control. Presencia
Branquias
las células caliciformes (CG), los enterocitos (ENT), vasos de microplásticos 10x
capilares (CAP) la capa muscularis (M), la mucosa (MC) y
la submucosa (SM). HE, 40x. (Bautista, 2014)
Fig. 17 Muestra de intestino de Fig. 18 Muestra de intestino de
organismo de pecera T1 . 10x organismo de pecera T1’ . 10x
Branquias
Contenido estomacal
Fig. 33 Cultivo de contenido del hígado de Fig. 34 Cultivo de contenido del hígado de
organismo de pecera T1’ UFC= 10 organismo de pecera T2 UFC= 28
• Los cultivos con menor incidencia de bacterias fueron siempre los del ejemplar
tomado de la pecera de control
ANEXOS
26 11 2019
alimentación
27 11 2019
alimentación
28 11 2019
alimentación y limpieza de
tanque
29 11 2019
alimentación
30 11 2019
alimentación y limpieza
5 12 2019
alimentación, limpieza y toma de se tomó un pez de cada
6 12 2019 muestras diagnósticos pecera
alimentación
7 12 2019