Estudios moleculares y celulares sobre la absorción, función y seguridad de los componentes de

los alimentos en las células epiteliales intestinales.

Resumen

El tracto intestinal entra en contacto directo con el entorno externo a pesar de estar dentro del
cuerpo. Las células epiteliales intestinales, que recubren la cara interna del tracto intestinal,
tienen varias funciones importantes, incluida la absorción de sustancias alimenticias, funciones
inmunes como la secreción de citocinas y la función de barrera contra los xenobióticos por
medio de enzimas de desintoxicación. Es probable que las funciones de las células epiteliales
intestinales estén reguladas o moduladas por estos componentes porque con frecuencia están
expuestos a componentes alimenticios en altas concentraciones. Esta revisión resume nuestra
investigación sobre la interacción entre las células epiteliales intestinales y los componentes de
los alimentos a nivel celular y molecular. La influencia de la contaminación xenobiótica en los
alimentos sobre la función celular de las células epiteliales intestinales también se describe en
esta revisión.

Relación entre diversos componentes alimentarios y células epiteliales intestinales.

Palabras clave: células epiteliales intestinales , transportador , inflamación , desintoxicación ,

xenobiótico.

El tracto intestinal es un órgano con una gran superficie que entra en contacto directo con el
entorno externo a pesar de estar dentro del cuerpo. En los humanos, el intestino delgado, el sitio
de absorción de los componentes de los alimentos tiene aproximadamente 6 m de largo y tiene
vellosidades de 0.5–1.5 mm de largo en su pared interna. Cada vellosidad está cubierta por una
lámina de células epiteliales intestinales, y hay microvellosidades de aproximadamente 1 μm de
largo en la superficie luminal de las células epiteliales absorbentes, que constituyen la mayoría
de las células epiteliales intestinales. Por lo tanto, el área total de la pared interna del tracto
intestinal puede ser tan grande como 200 m 2(casi equivalente al área de una cancha de tenis),
lo que permite una absorción eficiente de los componentes de los alimentos, que comprenden
nutrientes y no nutrientes. Las células epiteliales intestinales ubicadas en el revestimiento
interno del tracto intestinal proporcionan un borde importante que separa el ambiente externo
del interior del cuerpo y se sabe que poseen las siguientes tres funciones fisiológicas centrales:
(1) absorber los componentes de los alimentos (función de absorción); (2) proteger el cuerpo de
la invasión de sustancias extrañas a través de alimentos contaminados (función de barrera); y (3)
actuar como factores ambientales de los sensores, incluidos los componentes de los alimentos,
para la transmisión de señales (función del sensor) (Fig. 1 ). 1,2 )Se cree que las células
epiteliales intestinales están expuestas con frecuencia a altas concentraciones de componentes
alimenticios o contaminantes xenobióticos. Por lo tanto, las funciones de las células epiteliales
intestinales están muy posiblemente reguladas o moduladas por diversos componentes
alimentarios.

Fig. 1. Funciones principales de las células epiteliales intestinales.

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Aquí, revisamos nuestro trabajo sobre las características y el mecanismo de absorción y

permeación de varios componentes alimentarios en el epitelio intestinal y los efectos fisiológicos
de los factores alimentarios sobre las funciones de las células epiteliales intestinales,
principalmente utilizando modelos in vitro de células epiteliales intestinales humanas. También
informamos la influencia de los xenobióticos de los alimentos contaminados en la función de las
células epiteliales intestinales.

I. Características y mecanismos de absorción o permeación de los componentes alimentarios a

través de las células epiteliales intestinales.

Las vías de permeación de los componentes alimenticios a través de la monocapa epitelial

intestinal se clasifican en términos generales de la siguiente manera: (1) la vía mediada por el
transportador; (2) vía de transporte intracelular dependiente de energía a través de transcitosis,
etc .; (3) vía de transporte paracelular a través del espacio intercelular; y (4) vía de difusión
pasiva intracelular. 3 ) Analizamos los mecanismos por los cuales varios factores funcionales de
los alimentos son absorbidos por el epitelio intestinal utilizando células Caco-2 similares a
epiteliales intestinales humanas, frecuentemente utilizadas como modelo de células epiteliales
intestinales in vitro . 4 )

Primero, investigamos las características de la absorción de taurina en las células epiteliales

intestinales. La taurina es un aminoácido β que contiene azufre con muchas funciones
fisiológicas, que incluyen antioxidación, osmorregulación, conjugación con ácidos biliares y
modulación del neurotransmisor. 5,6 ) Nuestros resultados revelaron que la taurina se incorpora
por las células epiteliales intestinales a través de un Na + - y Cl - dependiente de transportador
de taurina (TAUT; SLC6A6) que es específico para ß-aminoácidos en células Caco-2. 7 ) Además,
la actividad TAUT se reguló en respuesta a la concentración de sustrato extracelular. 7 )La
absorción y expresión de TAUT también aumentaron en condiciones hiperosmóticas a través de
la proteína quinasa II dependiente de calmodulina. 8,9 ) Aclaramos que TAUT está regulado por
el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), una citocina inflamatoria, 10 ) y que la regulación
implica la activación del factor de transcripción nuclear factor kappa B (NFκB). 11 ) También
caracterizamos la absorción de aminoácidos neutros, básicos y ácidos por las células Caco-2 a
través de transportadores de aminoácidos. Específicamente, el tratamiento con cicloheximida,
un inhibidor de la síntesis de proteínas, mejoró la incorporación de leucina y lisina a través de la
activación del sistema de transporte de aminoácidos neutro / básico (sistema b 0, + ). 12)

En segundo lugar, nos centramos en el ácido α-lipoico, originalmente un agente terapéutico para
la diabetes. 13,14 ) Dado que su uso como alimento fue permitido después de una revisión de
las pautas para la distinción entre medicamentos y alimentos en 2004, el ácido α-lipoico se ha
convertido en el centro de atención como un componente de alimentos funcionales y
suplementos dietéticos, similar a la coenzima Q10 . Sin embargo, los mecanismos de absorción
del ácido α-lipoico en el tracto intestinal no se habían dilucidado. Por lo tanto, examinamos las
características y el mecanismo por el cual el ácido α-lipoico impregna el epitelio intestinal
analizando las células Caco-2 cultivadas en una membrana permeable y descubrimos que el
ácido α-lipoico penetraba rápidamente a través de las células epiteliales intestinales. 15 )La
penetración dependía de protones y fue notablemente suprimida por la azida de sodio, un
inhibidor metabólico. Además, la permeación del ácido α-lipoico fue inhibida competitivamente
por el ácido octanoico, un ácido graso de cadena media, lo que sugiere que el transporte del
ácido α-lipoico es facilitado por un transportador de ácido graso de cadena media no
identificado. Además, determinamos que el ácido α-lipoico fue convertido por la glutatión
reductasa en ácido dihidrolipoico, la forma reducida con mayor actividad antioxidante, en las
células epiteliales intestinales. 15 )Además, se examinó la permeabilidad epitelial intestinal de
los componentes alimentarios funcionales utilizados en los últimos años, como el ácido
hialurónico y el sulfato de condroitina. Después de su conversión en moléculas más pequeñas, se
descubrió que estas sustancias alimenticias penetran el epitelio intestinal a través de la vía
paracelular de la monocapa Caco-2. 16,17 ) Tomados en conjunto, estos resultados demuestran
que los componentes funcionales de los alimentos son absorbidos y penetran a través de las
células epiteliales intestinales a través de diversas vías de transporte (Fig. 2 ).

Fig. 2. Permeación intestinal y metabolismo de varios componentes alimenticios a través de las

células Caco-2.
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II Regulación de los transportadores intestinales por componentes alimenticios.

Como se describe en la sección anterior, varios transportadores se expresan en las células

epiteliales intestinales y están involucrados en la absorción de sustancias alimenticias. Sin
embargo, se espera que los componentes de los alimentos no solo sean absorbidos por los
transportadores como sustratos en el epitelio intestinal, sino también para regular o modular
otras actividades del transportador. Por lo tanto, realizamos análisis de componentes
alimenticios que regulan y modulan las actividades de los transportadores epiteliales
intestinales. La actividad del transportador de glucosa dependiente de sodio 1 (SGLT1), un
importante transportador de glucosa en el epitelio intestinal, fue inhibida por el extracto de té
verde, que contiene galato de epicatequina (ECg). 18 )Además, se confirmó que el ECg inhibe la
actividad SGLT1, mientras que las catequinas que carecen de un grupo galato, como la catequina
y la epicatequina, no mostraron actividad inhibitoria contra SGLT1, lo que implica que la
inhibición de la actividad SGLT1 por las catequinas requiere un grupo galato además de la
estructura básica de catequina (Fig. 3 ). Además, el ECg se une a la membrana plasmática, pero
el ECg en sí no es un sustrato para SGLT1, lo que sugiere un efecto antagonista de ECg en SGLT1.
18 ) Además, una búsqueda de componentes alimentarios que regulan la actividad TAUT
determinó que la actividad en el extracto de sésamo negro inhibía específicamente la actividad
TAUT. 19 ) Se determinó que uno de los inhibidores era lisofosfatidilcolina. 20 )

Fig. 3. Efecto de las catequinas sobre la actividad de absorción de glucosa mediada por SGLT1.

Notas: (A) Estructura química de las catequinas del té verde. (B) Efecto de las catequinas sobre la
actividad de absorción de glucosa mediada por SGLT1 por la vesícula de membrana de borde de
cepillo de conejo. Cada valor de datos se expresa como porcentaje del control y se representa
como la media ± SE ( n = 6). Un asterisco (*) indica una diferencia significativa con respecto al
control ( p <0,005) mediante la prueba t de Student.

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Dos tipos de transportadores se expresan en el epitelio intestinal: uno incluye transportadores

involucrados en la absorción desde el lado luminal, y el otro incluye transportadores de eflujo
que excretan las sustancias una vez incorporadas por las células en el lado luminal. Estos
incluyen la resistencia a múltiples fármacos 1 (MDR1, también llamada P-glucoproteína), que
excreta xenobióticos hidrófobos como sustrato, y la proteína 2 asociada a la resistencia a
múltiples fármacos, que excreta conjugados de ácido glucurónico como sustrato. 21 ) Luego,
buscamos componentes alimenticios que regulen la actividad de MDR1 en extractos de etanol al
40% de aproximadamente 60 especies de vegetales y frutas. El extracto de melón amargo inhibió
notablemente la actividad de MDR1, y la 1-monopalmitina se identificó posteriormente como un
componente inhibidor. 22 )La 1-monopalmitina inhibió la actividad de transporte de MDR1 al
inhibir la actividad ATPasa de MDR1, pero no funcionó como el sustrato de MDR1. Estos
resultados sugieren que los transportadores epiteliales intestinales están sujetos a una variedad
de regulaciones y modulaciones por factores alimentarios a través de diversos mecanismos.

III. Efecto preventivo y de mejora de los factores alimentarios sobre la inflamación intestinal.

La reciente popularidad creciente de la comida occidental ha resultado en un aumento

concomitante en la incidencia de enfermedades del tracto digestivo. En particular, los pacientes
diagnosticados con inflamación intestinal, incluida la enfermedad inflamatoria intestinal (EII),
han aumentado rápidamente en varios pliegues en los últimos 20 años y es probable que
aumenten más en el futuro. La EII, que comprende colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn, es
una enfermedad intratable, cuya causa es desconocida, pero se cree que se debe a un fallo del
sistema inmunitario intestinal. 23 )Los macrófagos activados anormalmente secretan citocinas
inflamatorias excesivas que causan daño a las células epiteliales intestinales. Por lo tanto,
intentamos desarrollar un sistema de cocultivo (sistema de cultivo complejo) de células modelo
epiteliales intestinales (Caco-2) y células modelo de macrófagos activados (THP-1) para buscar y
analizar componentes de alimentos que pueden prevenir o mejorar la EII. Las células Caco-2 se
cultivaron en una membrana permeable durante 2 semanas para diferenciarlas en células de
tipo epitelial intestinal. Las células THP-1 se activaron con acetato de miristato de forbol para
diferenciarlas en células similares a macrófagos activadas y se cultivaron conjuntamente con
células Caco-2. Se descubrió que las células Caco-2 estaban dañadas, lo que demuestra la
apoptosis y la necrosis típicas principalmente por TNF-α secretado por THP-1. 24 )Se confirmó
que la adición de un anticuerpo neutralizante de TNF-α (infliximab) o ácido 5-aminosalicílico, un
agente terapéutico de la EII, a este sistema de cocultivo suprimió notablemente la lesión celular
de Caco-2 en ambas condiciones. Por lo tanto, utilizamos el sistema de cocultivo como modelo
de EII in vitro y analizamos los componentes de los alimentos que podrían suprimir el daño
celular de Caco-2 inducido por las células THP-1. 25 ) Se demostró que la cafeína y la taurina
tienen un efecto supresor. La cafeína redujo el daño de las células Caco-2 al suprimir la
producción de TNF-α por THP-1. En contraste, la taurina suprimió el daño de las células Caco-2 al
actuar del lado de las células epiteliales intestinales, sin afectar la producción de TNF-α (Fig. 4 ).
Además, examinamos el efecto de la taurina in vivo.mediante el uso de un modelo de colitis de
ratón inducida por sulfato de dextrano sódico (DSS) (DSS proporcionado en agua a voluntad ).
Por lo tanto, se observó que la administración previa de taurina redujo el síntoma de colitis
inducida por DSS. 26 ) Este resultado reveló una nueva función fisiológica de la taurina: prevenir
y mejorar la colitis. Actualmente se están realizando intentos para revelar el mecanismo
regulador de la prevención de la colitis por la taurina mediante el análisis de microarrays de
ADN. 27 ) Además, este sistema de cocultivo se estableció como un sistema útil de búsqueda y
evaluación in vitro de factores alimentarios que podrían prevenir o mejorar la enteritis (Fig. 4 ).
Fig. 4. Sistema modelo de EII in vitro que utiliza el cocultivo de monocapas de Caco-2 de tipo
epitelial intestinal y células THP-1 de tipo macrófago activadas.

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Las células epiteliales intestinales secretan factores humorales, incluida la interleucina-8 (IL-8),
en respuesta a la estimulación inflamatoria, como el estrés oxidativo y las citocinas inflamatorias.
La IL-8 secretada quimioatrae y activa las células inmunes, incluidos los neutrófilos, debajo de la
capa de células epiteliales intestinales, agravando aún más la enteritis (llamada asa inflamatoria).
Co-estimulación de células Caco-2 por H 2 O 2 y TNF-α resultó en un aumento notable en la
producción de IL-8. 28 ) Por lo tanto, los factores alimentarios que suprimen la producción de IL-
8 fueron analizados por el sistema de coestimulación, y se descubrió que el ácido clorogénico
(un polifenol), el ácido cafeico (un metabolito del ácido clorogénico), la isoflavona de soja y la
histidina suprimen significativamente la IL -8 producción.29-31 )Además, elefecto
antiinflamatorioin vitrodel ácido clorogénico se confirmóin vivopor su importante prevención de
la colitis inducida por DSS en ratones. 32 )

IV. Efecto de los componentes de los alimentos sobre la expresión de enzimas de desintoxicación
en el epitelio intestinal.

Diversas enzimas de desintoxicación o metabolización de fármacos se expresan en las células

epiteliales intestinales, similares al hígado. Estas enzimas están involucradas en la
desintoxicación metabólica de contaminantes xenobióticos en los alimentos. Por lo tanto,
buscamos componentes alimenticios que mejoren la expresión y activación de enzimas de
desintoxicación que mejoren la función de barrera contra la invasión de xenobióticos. El sistema
de desintoxicación consta de tres fases. Los xenobióticos son oxidados por enzimas de fase I
como el citocromo P (CYP), conjugados por enzimas de fase II y luego excretados de las células
por transportadores de flujo (fase III). Se sabe que la expresión de muchas enzimas de
desintoxicación de fase I, II y III está regulada por receptores nucleares. 33 )Uno de los
receptores nucleares, el receptor de pregnane X (PXR), se expresa altamente en el hígado y el
epitelio intestinal, y funciona como el regulador maestro de la expresión de las enzimas de
desintoxicación. 34 )Por lo tanto, nos centramos en PXR y en los componentes de alimentos
seleccionados que podrían activar PXR mediante la construcción de un sistema de análisis de
reportero para la búsqueda y evaluación de componentes activadores. Brevemente, un vector de
expresión PXR humano y un vector indicador en el que la secuencia de respuesta PXR se integró
corriente arriba del gen de la luciferasa se introdujeron en células LS180, un modelo de células
epiteliales intestinales humanas. Las células fueron incubadas con fitoquímicos de varios tipos
de alimentos para investigar la influencia de cada fitoquímico en la actividad de transcripción
dependiente de PXR. Descubrimos que la tangeretina (un flavonoide) y los ginkgólidos A y B
(terpenoides del extracto de hoja de ginkgo) aumentaron la actividad de transcripción
dependiente de PXR y la expresión y activación de genes diana de PXR como MDR1 (Fig. 5 ). 35)
Además, la actividad transcripcional y el nivel de expresión de UDP-glucuronosiltransferasa 1A1,
una de las enzimas de desintoxicación de fase II, aumentan por la baicaleína (un flavonoide) a
través de la activación de PXR. 36 ) También nos centramos en las quinonas que se sabe que
están presentes en los alimentos y los gases de escape y que generan especies reactivas de
oxígeno in vivo , y buscamos factores alimentarios que mejoren la expresión de NAD (P) H:
quinona oxidorreductasa 1 (NQO1) , una enzima de desintoxicación de fase II que puede
metabolizar las quinonas para facilitar su desintoxicación. Encontramos que la cisteína mejoró
notablemente la expresión y activación de NQO1. 37 )También revelamos que el factor 2
relacionado con Nf-E2 (Nrf-2), un factor de transcripción, está involucrado en la regulación de la
expresión de NQO1. Además confirmamos la mejora de la expresión de NQO1 in vivo . Estos
resultados indican que ciertos tipos de factores alimentarios pueden mejorar la función de
barrera contra la invasión de xenobióticos a través de la activación de enzimas de
desintoxicación por factores de transcripción como PXR expresados en el epitelio intestinal.

Fig. 5. Activación del receptor de pregnane X por fitoquímicos.

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V. Influencia de los xenobióticos de los alimentos contaminados en la función de las células

epiteliales intestinales.

Además de los nutrientes vitales, los alimentos pueden contener xenobióticos como
contaminantes, como los disruptores endocrinos (hormonas ambientales). La contaminación de
los alimentos con estos agentes perjudiciales se ha convertido en una preocupación pública
urgente. Por lo tanto, analizamos la influencia tóxica de los xenobióticos en las células epiteliales
intestinales. Usando un microarray de ADN, examinamos los efectos del cadmio, un metal
pesado que puede contaminar alimentos como el arroz, en la expresión génica de las células
epiteliales intestinales y encontramos un aumento significativo en la expresión del ARNm de IL-8.
38 ) Por lo tanto, el cadmio aumenta la expresión de IL-8 a nivel transcripcional activando NFκB,
después de su incorporación a las células por DMT-1, un transportador de hierro divalente (Fig. 6
). Este fenómeno también se observó in vivo.. 39 ) Además, encontramos que la hormona
ambiental tributilestaño impregna la capa de células epiteliales intestinales por simple difusión
intracelular y que inhibe la formación de la monocapa celular al suprimir la formación de
uniones estrechas. 40 ) Además, examinamos las dioxinas, que también se han convertido en un
motivo de preocupación para la salud pública. Las dioxinas desarrollan su toxicidad mediante la
activación del factor de transcripción del receptor de hidrocarburos de arilo (AhR).
Desarrollamos la línea celular HepG2 sensible a dioxina estable mediante la introducción de un
plásmido que incorpora el promotor CYP1A1 humano que contiene elementos sensibles a AhR
aguas arriba del gen de la luciferasa. 41 )Usando esta línea celular, buscamos fitoquímicos que
suprimen la actividad del promotor CYP1A1 mediada por AhR. Encontramos que algunos
flavonoides, incluida la tangeretina, suprimieron la actividad del promotor CYP1A1, así como la
expresión de proteínas y ARNm de CYP1A1. 42 ) Además, observamos un fenómeno en el que las
dioxinas interrumpían el sistema metabólico flavonoide en el epitelio intestinal, lo que incluía
facilitar el metabolismo de galangin a kaempferol al mejorar la expresión y activación de CYP1A1
en las células Caco-2. 43 ) Por lo tanto, podríamos aclarar en parte los mecanismos por los cuales
ciertos xenobióticos en los alimentos contaminados son absorbidos por el epitelio intestinal o
desarrollan acciones tóxicas en el mismo.

Fig. 6. Mecanismo regulador putativo de inducción de la expresión de IL-8 por cadmio en células
epiteliales intestinales.

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VI. Conclusión

Este artículo describe nuestros análisis del mecanismo molecular y celular por el cual los
componentes de los alimentos penetran en las células epiteliales intestinales. También
presentamos los resultados de nuestros estudios moleculares y celulares sobre las funciones
fisiológicas de ciertos componentes alimentarios en las funciones celulares del epitelio intestinal,
que incluyen la absorción (a través de transportadores), la inmunidad (a través de la regulación
de la producción de citocinas) y la función de barrera (a través de El sistema de desintoxicación).
Además, nuestros estudios podrían proporcionar nuevos conocimientos sobre la influencia de
los xenobióticos en las células epiteliales intestinales. Comprender la interacción molecular y
celular entre el epitelio intestinal y los componentes alimentarios es importante para
comprender los mecanismos de absorción y las funciones fisiológicas de los factores
alimentarios en el tracto intestinal. En el futuro,