CÉLULAS RETINALES DEL PROGENITOR, CÉLULAS RETINALES Y RETINOBLASTOMA

RESUMEN

La investigación sobre la retina ha llevado a varios descubrimientos históricos en los campos de la

neurobiología del desarrollo y la biología del cáncer. Con los recientes avances en nuestra comprensión
de las células con propiedades de auto renovación en tejidos y tumores adultos, los estudios sobre
células madre de la retina y el retinoblastoma pueden proporcionar información valiosa sobre el campo
en rápido crecimiento de la biología de las células madre. En esta revisión, exploraremos la relación
entre las células progenitoras de la retina en la retina neural y las células formadoras de esfera en el
epitelio ciliar, que se conocen como células madre de la retina. Se hará especial hincapié en su
proliferación, auto renovación, cambios en la competencia y diferenciación. También se discutirá el
potencial para la intervención terapéutica de la degeneración de la retina mediante el uso de estas
células derivadas del epitelio ciliar. Además, el concepto de células madre de retinoblastoma se
explorará en términos de su proliferación, diferenciación y cambio en la competencia que resulta en el
inicio del tumor retiniano. Al mejorar nuestra comprensión de la expansión iniciática y el desarrollo de
tumores de la retina, es posible que podamos dirigirnos más eficazmente a la quimioterapia para este
cáncer infantil debilitante.

INTRODUCCIÓN .

Los estudios sobre la retina en desarrollo han llevado a varios hallazgos históricos en el campo de la
neurobiología del desarrollo. Una serie de estudios de fecha de nacimiento llevados a cabo por Young en
la década de 1980 demostraron que las 7 clases principales de tipos de células retinianas se generan en
una "orden de nacimiento" característico durante la retinogénesis (Young, 1985a, b). Los estudios
subsiguientes de linaje realizados por Cepko y colegas que utilizan retrovirus incompetentes con la
replicación extendieron estos hallazgos y revelaron que las células progenitoras de la retina son
multipotentes (Turner y Cepko 1987, Turner, Snyder et al. 1990), es decir, una sola célula progenitora de
la retina puede dar lugar prácticamente a cada tipo de célula en la retina de los mamíferos. Estos y otros
estudios condujeron a un modelo en el que las células progenitoras de la retina experimentan cambios
unidireccionales en la competencia (Cepko, Austin et al. 1996) en el curso del desarrollo de la retina para
generar cada tipo de célula retiniana en el orquestado bien orden de nacimiento inicialmente descrito
por Young. Este modelo ha servido como un marco importante para una variedad de estudios sobre el
desarrollo de la retina y ha mejorado significativamente nuestra comprensión de las enfermedades de la
retina como el retinoblastoma (Zhang, Gray et al 2004, Zhang Schweers et al. 2004; Dyer y Bremner
2005, Donovan , Schweers et al. 2006)

El retinoblastoma es un raro cáncer infantil de la retina que se inicia en el útero y generalmente se

diagnostica durante los primeros años de vida (Dyer y Harbour 2006). Los estudios de familias con
retinoblastoma identificaron el primer supresor de tumores genc, RBI (Friend, Bernards et al. 1986), y el
análisis genético de los tumores retinianos reveló que la inactivación de RBI es la lesión genctic iniciadora
en esta enfermedad. Es importante destacar que los estudios subsiguientes en varios tipos de tumores
reveló que la ruta de Rb está interrumpida en la mayoría, si no en todas, de ellas (Hahn y Weinberg 2002,
Vogelstein y Kinzler 2004). Varios años después de la clonación de RBI, se generaron ratones con una
eliminación dirigida del gen RbI (Clarke, Maandag et al 1992; Jacks Fazeli et al. 1992; Lcc, Chang et al.
1992) se esperaba que los ratones desarrollaran retinoblastomu similar a los niños que heredan un alelo
RBI defectuoso. Sorprendentemente, los ratones Rb nunca desarrollaron retinoblastoma, el desarrollo de
la retina normalmente se desarrolla en estos animales . Este resultado inesperado fue un retroceso
significativo para los esfuerzos por modelar el retinoblastoma humano en el ratón. No solo retrasó el
progreso en los estudios de biología del retinoblastoma, sino que también obstaculizó los estudios
preclínicos para mejorar el tratamiento de este cáncer infantil debilitante. Los recientes esfuerzos
diseñados para aprovechar nuestra comprensión del desarrollo retiniano y aplicar los principios de este
campo al retinoblastoma han llevado a Avances rápidos en el modelado de retinoblastomas humanos en
ratones. El Rbleté no solo regula la proliferación de células progenitoras de la retina en la retina en
desarrollo, sino que también desempeña un papel clave en la regulación del desarrollo del fotorreceptor
de varilla (Zhang, Gray et al. 2004). Además, la compensación por pl07 en ausencia de Rbl en la retina
mousc en desarrollo previene el retinoblastoma (Donovar, Schweers et al 2006). Este hallazgo fue la
consecuencia directa de un concepto clave inherente al modelo de competencia del desarrollo retiniano
propuesto por Cepko. Específicamente, la salida de una célula del ciclo celular debe regularse con
precisión para garantizar que cada uno de los tipos de células retinianas se genere en la proporción
correcta (Dyer y Cepko 2001b) Por ejemplo, si demasiadas células progenitoras retinianas salen del ciclo
celular durante las etapas tempranas del desarrollo de la retina, la proporción de los tipos de células de
los primeros gusanos aumentaría a expensas de los tipos de células de los últimos nacimientos, y si
demasiadas salidas durante las últimas etapas, la proporción de las células de los últimos tardíos
aumentaría a expensas de las primeras células del parto. Los estudios exhaustivos de los reguladores del
ciclo celular durante el desarrollo de la retina demostraron que los mecanismos de compensación
múltiples ayudan a prevenir la proliferación desregulada de las células progenitoras de la retina durante
el desarrollo (Dyer y Cepko 2000; Dyer y Cepko 200lab). El principio de la compensación genética
intrínseca se aplicó más tarde al retinoblastoma y se dirigió al primer modelo de ratón knockout del
retinoblastoma (Zhang, Gray et al 2004, Zhang, Schweers et al 2004, Donovan, Schweers et al. 2006).
Estos y otros modelos han servido como la piedra angular para una serie de estudios preclínicos sobre
nuevos tratamientos para retinoblastoma (Dyer, Rodriguez-Galindo et al. 2005, Knudson 2005; Lauric,
Gruy et al 2005, Laune, Donovan et al 2006, Livingston, Lavery et al 2005), que han influido directamente
o han influido en los estudios clínicos de este cáncer infantil debilitante Hospital de investigación infantil
St. Jude. La investigación en el campo de la neurobiología del desarrollo no solo tuvo un impacto
importante en el tratamiento del retinoblastoma, sino que también estos avances pueden jugar un papel
central en la identificación de la célula de origen del retinoblastoma (Dyer y Bremner 2005) y determinar
si existe una célula madre del retinoblastoma. En la última década, la investigación sobre células madre
embrionarias y adultas del SNC ha aumentado dramáticamente. Este interés proviene de la esperanza de
que las células madre se utilicen algún día para reemplazar las células perdidas por lesiones o
degeneración neural. Muchos investigadores también están interesados en el papel de las células madre
adultas en la homeostasis del tejido y en enfermedades como el cáncer. El concepto de célula madre del
cáncer es importante para comprender el origen y el crecimiento de los sintonizadores. Muchos
mecanismos celulares que subyacen en nuestro modelo actual de desarrollo de la retina pueden
ayudarnos a comprender mejor los tallos en la retina y en el retinoblastoma. Así como la combinación de
hallazgos en los campos de la neurobiología del desarrollo y la biología del cáncer mejoró nuestra
comprensión y el tratamiento del retinoblastoma, proponemos que se pueda aplicar un enfoque similar
a la investigación de células madre de la retina. Específicamente, al estudiar la competencia de las
células madre de la retina, sus relaciones de linaje con células hijas más diferenciadas y la regulación de
la salida de las células madre de la retina del ciclo celular, mejoraremos nuestra comprensión de estas
células y posiblemente desarrollaremos métodos para su uso. en el tratamiento de la enfermedad o
lesión de la retina

Células madre procedentes de tejidos adultos

Los estudios pioneros de Till y McCulloch (1961) demostraron que las células derivadas de la médula
ósea podrían repoblar todo el sistema hematopoyético de animales letalmente irradiados (McCulloch
1960) aunque el tipo de célula que repoblaba la sangre En ese momento se desconocía, McCulloch y Till
especularon que estas células eran células madre y no progenie diferenciada (McCulloch y Till 1960). Los
celils aislados formaron colonias clonales en los bazos de ratones receptores irradiados (Till y McCulloch
1961, Siminovitch, McCulloch et al. 1963). El trabajo adicional con estas células hematopoyéticas
denominadas "unidades formadoras de colonias" indicó que efectivamente eran células madre capaces
de auto - renovación (Siminoviteh, McCulloch et al. 1963) Las células madre hematopoyéticas se podrían
trasplantar a un animal irradiado y luego tomarse de ese animal y pasar en serie a otros animales
letalmente irradiados (Siminovitch y Till 1964). Esta capacidad remarcable de auto-renovación sirvió
como el estándar de oro para la definición de una célula madre durante décadas En los últimos años, la
definición de una célula madre ha cambiado a medida que se han ido introduciendo nuevos datos en el
campo. Para los fines de este capítulo, usaremos la definición más amplia en la literatura: Una célula
madre debe tener la capacidad de auto-renovarse y generar tipos de células diferenciadas posmitóticas
características del tejido donde reside. Nos gustaría enfatizar que la proliferación per se no significa
necesariamente que una célula se auto renueve. Por supuesto, la división celular es necesaria para la
auto renovación, pero una amplia variedad de células, incluidas las células progenitoras de la retina,
proliferan sin auto renovación Las células progenitoras de la retina proliferan durante el desarrollo renal,
pero en lugar de la auto renovación, se someten a Cambios unidireccionales en la competencia con
rondas sucesivas de división celular (Cepko, Austin et al. 1996). Los tipos celulares diferenciados
producidos por una célula progenitora de la retina en etapa temprana son muy diferentes de los tipos
celulares producidos por una célula progenitora que ha sufrido varias rondas de división celular. En
contraste, de acuerdo con la definición prevaleciente de una célula madre y la que usamos aquí, la
proliferación debe estar acompañada por la capacidad de generar la misma cohorte de células no
diferenciadas (Ge, células madre) y tipos de células diferenciadas con cada ronda sucesiva. de la división
celular para cumplir con los criterios de autorrenovación. Se han identificado células con la capacidad de
auto renovarse y generar tipos celulares diferenciados en una variedad de tejidos y órganos
embrionarios y adultos. Una característica común de las células madre adultas, además de la auto-
renovación, es que son raras. Por ejemplo, se cree que aproximadamente el 0,2% de las células en el
epitelio ciliar ocular (CE) son células madre de la retina (Tropepe, Coles et al. 2000; Coles, Angenieux et
al, 2004), y aproximadamente el 0,04% de las células en la glándula mamaria tiene propiedades de
células madre (Kordon y Smith 1998).
 Existen 3 funciones posibles de estas raras células madre adultas: en primer lugar, las células madre
adultas pueden contribuir a la homeostasis normal. En tejidos que se renuevan a sí mismos, como los
epitelios intestinales, las células madre forman belen progenitores epiteliales (es decir, células
amplificadoras de tránsito) que posteriormente se diferencian en los 4 tipos de células encontradas en
las vellosidades intestinales de los mamíferos (Crosnier y Lewis 2006). Este papel es similar al de las
células madre hematopoyéticas, que generan todos los linajes hematopoyéticos a lo largo de la vida del
organismo. En segundo lugar, las células madre adultas pueden ser células quiescente que no
contribuyen de manera nominal a la homeostasis del tejido, pero las células están preparadas para
responder a lesiones o estrés. Las terceras células madre adultas pueden funcionar como células
diferencias normales en ese tejido. Las células madre de la retina pueden tener este último tipo de
papel.

Las células pigmentadas de la CE forman esferas en el cultivo, y cuando se estimulan con suero, estas
células formadoras de esfera se diferencian en un subconjunto de tipos de células retinianas. Se ha
sugerido que la célula de origen para las esferas retinianas derivadas de CE es una célula normal
diferenciada de la CE porque las esferas están formadas por células pigmentadas (Tropepe, Coles et al.
2000), y se crea un subconjunto de la CE De células pigmentadas (figura 1). Las células madre retinales
en reposo pueden residir en El CE, pero no siempre lleva a cabo la función de las células pigmentadas. Es
difícil distinguir directamente entre estos 2 imodeles, pero la caracterización de las características
morfológicas de la CE normal y la de las células de la célula madre de la retina a continuación sugiere
que este es un mecanismo importante de activación de las células madre que debe considerarse. I
esferas (discutidas con más detalle) Independientemente de los roles de las células madre en los tejidos
adultos normales, el potencial para su uso en la intervención terapéutica dependerá de mejorar nuestra
comprensión de sus papeles normales en su tejido de origen y los cambios en la proliferación y
competencia que puede ocurrir in vitro durante su expansión Una de las características más interesantes
e importantes de las células madre adultas es que se expanden in vitro cuando se cultivan en presencia
de factores de crecimiento. Por lo tanto, las señales extrínsecas pueden ser importantes para mantener
las células madre adultas inactivas in vivo. conservando su estado inmaduro. Cuando estas células se
colocan en cultivo con factores de crecimiento, se eliminan las señales extrínsecas y las células se
expanden clonalmente y generan más células madre. La mayoría de las células madre proliferan cuando
se tratan con FGF-2 exógeno, y en muchos casos , se someten a una auto renovación (Vescovi, Reynolds
et al, 1993, Griti, Parati et al. 1996, Tropepe, Coles et al. 2000). De hecho, la mayoría de los protocolos de
cultivo de células madre en Se incluyen factores de crecimiento para lograr dicha expansión clonal.
Cuando las señales exógenas cambian, ya sea agregando suero a las células o trasplantándolas en un
tejido huésped, las células madre pasan de la auto-renovación a la diferenciación. Se cree que las señales
locales no solo indican a las células madre que experimenten una diferenciación terminal, sino que
también brindan señales instructivas sobre el linaje celular específico o el sublinaje. Sobre la base de
este razonamiento, los investigadores trasplantaron células madre del hipocampo adulto al vítreo de
crías de ratones de 2 días para probar la capacidad de las células para diferenciarse a lo largo de la carilla
retiniana (Takahashi, Palmer et al 1998). Las células derivadas de supuestas células madre del hipocampo
se integraron en la retina y adoptaron características morfológicas de células amacrinas, horizontales,
gliales de Müller, bipolares y fotorreceptoras. Las implicaciones terapéuticas de este tipo de abordaje
son significativas. Uno podría potencialmente rescatar tejido lesionado o curar trastornos degenerativos
simplemente trasplantando células madre competentes para generar el linaje celular particular
necesario en el tejido huésped comprometido o liberado. Nuevamente, la razón es que las señales
locales dirigirán la diferenciación de estas células madre hacia los tipos de células apropiados. Las
señales extrínsecas son importantes para regular el comportamiento de las células madre adultas, y
existe evidencia clara de que las señales intrínsecas también son importantes. Específicamente, las
mutaciones en los factores de transcripción pueden cambiar el desarrollo y la proliferación de las células
madre. En el ratón con retraso del desarrollo ocular (Cg), el número de células progenitoras de la retina
disminuye mientras que el de las células madre de la retina aumenta (Coles, Horsford et al 2006;
Dhomen Balaggan et al 2006). Al igual que con las células progenitoras de la retina, la interacción
intrincada entre señales intrínsecas y extrínsecas permite que las células madre de la retina mantengan
su identidad y su capacidad de auto-renovación y expansión clonal. Idealmente, los investigadores
podrán manipular farmacológicamente las señales extrínsecas e intrínsecas de las células madre adultas
en el cultivo para aumentar la expansión clonal a través de la auto-renovación y luego eliminarlas
después del trasplante para inducir la diferenciación de las células en el órgano o tejido objetivo.

Células madre embrionaria

Las células madre embrionarias (ES) han prestado mucha atención por parte de los científicos y los
medios de comunicación principales, en parte, a su ongin y totipotencia. que es la capacidad de
diferenciarse en todos los linajes celulares en el organismo adulto. Las células ES humanas se separan de
la masa celular interna del blastocisto de 5 a 8 días de edad (Bongso, Fong et al 1994, Thomson, Iskovitz-
Eldor et al 1998, Reubinoff, Pera et al 2000, Stojkovic, Lako et al 2004 ). Las células ES tienen un potencial
real para muchos campos de la ciencia biológica, y su toipotencia podría ayudar a dilucidar los
mecanismos embrionarios y de desarrollo, permitir estudios de axia de diferenciación y trasplante, y
posiblemente contribuir al tratamiento de trastornos humanos como la telangicctasia (Ben-Nun y
Benvenisty 2006) Las células ES pueden auto renovarse finamente en el cultivo, cuando se les
proporcionan las señales extrínsecas apropiadas. El desafío de las líneas celulares funcionales es
identificar las señales extrínicas e intrínsecas apropiadas para inducir la diferenciación a lo largo de
ciertos linajes, como las neuronas de la retina, sin formar tumores o otros tipos de células ES Muchos
investigadores estudian células primarias aisladas de órganos particulares durante el desarrollo
embrionario. Estas son células madre embrionarias y no células ES que se toman de una etapa de
desarrollo mucho más temprana. A diferencia de las células ES totipotentes, estas células son
multipotentes y pueden producir células del tipo que se encuentra en el órgano en el que residen. Por
ejemplo, los ratones embrionarios se usan ampliamente para aislar las llamadas células madre neurales
embrionarias (NSC) de la zona subventricular (SVZ) del cerebro anterior en desarrollo. Estas células, que
a menudo se llaman glina nial (Noctor, Flint et al. 2001; Noctor , Flint et al 2002; Anthony, Klein et al.
2004 Merikle, Tramontin et al. 2004), se cree que tienen la capacidad de auto-renovación en el cultivo y
son mulupotentes, es decir, pueden diferenciarse en neuronas o glía. Este tipo de células gliales radiales
que se asemejan mucho a un subtipo de células progenitoras neurales no deben confundirse con células
gliales radiales diferenciadas en el SNC adulto (por ejemplo, Maller glia o Bergmann glia). Aunque
muchos grupos utilizan somática derivada de embriones y somática derivada de adultos. Células madre
intercambiables, nos centraremos en las células recubiertas con CE Se ha informado que las células
derivadas de la CE son las células madre retinianas del ojo adulo, y su potencial es claramente diferente
del de las células progenitoras retinianas embrionarias.

Células madre neurales

las células dan origen a células hijas postmitóticas, que luego se comprometen con un destino celular
neuronal particular, migran a su capa apropiada, extienden neuntes y forman conexiones sinópticas A
diferencia de las células en órganos que requieren renovación constante (cg, epitelio o el sistema
hematopoyético), la mayoría Las neuronas deben sobrevivir durante toda la vida del organismo. Esto se
debe, en parte, a la inmensa complejidad de la arquitectura y las funciones del SNC. Durante más de un
siglo, se creía que la neurogénesis no se produce en el adulto. Sin embargo, en el último pantalón del
siglo XX, una pequeña población de células fue descubierta en ciertas áreas del SNC que proliferaron
durante la vida útil del organismo Altman 1963) En los últimos años, muchos estudios han demostrado
que las células en proliferación son NSC que Generar nuevas neuronas y someterse a la renovación de
sclf.

Reynolds y colegas han demostrado que las células madre se pueden aislar del embrión Reyn triata del
cerebro del ratón (Reynolds, Tetzlaff et al. 1992; Reynolds y Weiss 1996). Cuando se mantienen en
cultivo en presencia de factores de crecimiento, estas células forman neuroesferas y retienen la
multipotencialidad en 10 pases (Reynolds y Weiss 1996). El trabajo posterior de varios grupos basó la
identificación de más regiones del SNC adulto que contienen actividad de NSC (Doetsch, Garcia-
Verdugo). et al. 1997, Garcia-Verdugo, Doetsch et al. 1998; Doetsch, Caille et al. 1999; Kirschenbaum,
Doetsch et al. 1999, Alvarez-Buylla, Seri et al. 2002, Doetsch, Petreanu et al. 2002, Gritti , Bonfanti et al.
2002). Por ejemplo, las células de la SVZ adulta se expanden en cultivo por auto renovación y mantienen
su competencia multipotencial en varios pasajes Gritti, Parati et al. 1996). Normalmente, las células SVZ
adultas contribuyen a la acumulación de células progenitoras neurales que ingresan en la corriente
migratoria rostral y eventualmente se diferencian como neuronas en el bulbo olfativo durante toda la
vida del organismo (Gritti, Bonfanti et al. 2002). Similarmente, en el hipocampo, las células madre de la
circunvolución dentada (Gage, Kempernann et al. 1998; Palmer, Markakis et al. 1999) pueden expandirse
en cultivo por auto renovación y diferenciarse a lo largo de los linajes neuronales y gliales, aunque las
células con propiedades que se consideran compatibles con las células madre se han identificado en una
variedad de regiones cerebrales adultas, su competencia para generar diversos subtipos neuronales no
se ha analizado exhaustivamente. La mayoría de los estudios se han centrado en las 3 clases principales
de células dentro del cerebro; neuronas, astroglia y oligodendrocitos, pero no han analizado distintos
subtipos neuronales. Esto se debe, en parte, a la falta de marcadores bien caracterizados de diferentes
subtipos neuronales del SNC adulto. En algunas regiones, como la corteza en desarrollo, los marcadores
específicos de ayer se están desarrollando rápidamente, y ahora se pueden delinear todas las capas
(Bulfone, Smiga et al. 1995; Bulfone, Martinez et al 1999, Nakagawa 2003). Usando estos marcadores
uew, los investigadores ahora pueden estimar la potencialidad de las NSC aisladas. En lugar de la
disponibilidad de marcadores claros, se pueden realizar estudios de trasplante para aclarar el potencial
de las NSC. Este enfoque se ve obstaculizado por muchas variables, tales como diversas señales
extrínsecas. No obstante, la investigación con células madre neurales se está llevando a cabo
enérgicamente para las aplicaciones terapéuticas potenciales de estas células en la neurodegeneración y
el trauma neural.

Células madre retenidas

Tropape y sus colegas (2000) han propuesto que la CE del ratón contiene una población de células con
propiedades de células madre. El CE ocular se encuentra entre la retina y el iris (figura 1). Esta estructura
es distinta del epitelio pigmentado de la retina (RPE), que es apical a la retina. El RPE absorbe el asiento
de la luz y digiere los residuos de los fotorreceptores. Las células CE se pueden aislar y cultivar in vitro en
presencia de factores de crecimiento (Ahmad, Tanget et al. 2000; Tropepe, Coles et al 2000; Inoue,
Yanagi et al. 2005; Yanagi, Inoue et al. 2006) donde se derivan las CE Las células proliferan y forman
esferas a partir de la expansión clonal de células individuales. En el ratón, las esferas derivadas de CE
pueden pasarse hasta 6 veces y cuando se exponen al suero, se diferencian en barras, Müller glis y
células retinianas bipolares (Tropepe, Coles et al. 2000) células CE aisladas de humanos (Coles,
Angenicux et al 2004), conejos (inoue, Yanagi ct al 2005) y ratas (Engelhardt, Wachs et al. 2004, Yanagi,
Inoue et al. 2006) han producido resultados similares. Las células que se aislaron de la CE estaban
pigmentadas y retenidas en la esfera, algunas incluso retuvieron su pigmentación bajo diferenciación
Condiciones (Tropepe, Coles et al 2000). La observación de que las fracturas que surgen de células
derivadas de CE individuales están pigmentadas ha llevado a la propuesta de que las células CE
pigmentadas son las células madre de la retina en los mamíferos. Además, las células aisladas de la
retina neural, el ins y el RPE no formaron esferas en el cultivo que podrían pasarse en serie (Tropepe,
Coles et al 2000).

Es importante señalar que la retina neural no contiene células madre que puedan Se puede expandir
utilizando condiciones estándar de crecimiento de células madre. También es poco probable que la
retina embrionaria o posnatal temprana contenga células madre. Aunque varios grupos han usado la
retina posmatal carly para desarrollar neuroesferas, las células que contienen no producen todos los
tipos de células de la retina cuando se diferencian, y no se ha demostrado que se renueven (Angenieux
Schorderet et al. 2005). De hecho, la mayoría de las neuroesferas producen tipos de células tardías, lo
que sugiere que son simplemente células progenitoras de la retina que formaron esferas por agregación
o en respuesta a factores de crecimiento in vitro (Engelhardt, Wachs et al. 2004, Klassen, Ng et al. 2004)

Las células adultas de formación de esfera derivadas de CE y las células de formación de esfera
retinianas postnatales tempranas cumplen con los criterios mínimos para una célula madre, como la
mayoría de los investigadores ahora definen el término. Sin embargo, no se ha demostrado que estas
células se renueven en el cultivo. Aunque pueden proliferar, su capacidad para generar los diferentes
tipos de células de la retina no se ha analizado en cada pasaje. Este es un criterio importante para las
células madre de la retina, porque si su competencia cambia, entonces se parecen más a una célula
progenitora de la retina que a una célula madre. Además, si su competencia cambia con el tiempo, esta
característica tendría una influencia dramática en su uso terapéutico, por ejemplo, el número de pasaje
utilizado para los estudios de trasplante dependería del tipo de célula neuronal específica que esté
degenerando en la retina.
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN DEL EPITELIO CILIAR ESFERAS DIVIDIDAS

Si las células de células retinianas presuntas que residen en la CE contribuyen a la función normal del ojo
o si simplemente son células inmaduras inmaduras, se empieza a distinguir entre estas 2 posibilidades y
se estudia esta pregunta con más detalle. (TEM) análisis en CE de ratón normal y esferas generadas in
vitro fr om esta región. La CE, donde se cree que residen las células madre de la retina presuntivas, se
deriva de la región neurogénica en la que se forman las retinas. Napier y Kidson (2005) han mostrado
con elegancia la progresión del desarrollo de los mamíferos. El cuerpo ciliar contiene la CE pigmentada,
el músculo ciliar y las fibras de la zónula. Esta área se forma entre la retina y el iris (figura IA). El CE tiene
2 capas de células de espesor, contiene células epiteliales pigmentadas (PB) que son continuas con el
EPR y células epiteliales pseudoestratificadas no pigmentadas (NPE) que segregan bumor acuoso (figura
1B). En el ratón, al igual que en otros animales, hay una pequeña urea del epitelio bistratificado contiguo
llamado pars plana, que se encuentra entre la retina y la corona ciliar (pars plicata) (Napier y Kidson
2005). La ora serrata está inmediatamente adyacente a la retina y posterior a la pars plana (igures IB y
2A). La pars plana es un área latente del cuerpo ciliar que está compuesta únicamente de CE y vasos
sanguíneos (igur El pars plicata contiene el epitelio de doble capa, los vasos sanguíneos, el músculo ciliar
y las fibras zonulares (figura 2C) El músculo ciliar , que se encuentra debajo del epitelio y es unido a la
esclerótica, regula la forma de la lente. Las fibras zonulares unen el CE a la lente y actúan como
ligamentos suspensores para la lente.

Los análisis de microscopía óptica y TEM de la pars plana y CE muestran claramente la morfología
epitelial de las células PE y NPE en esta región (figura 3). Las capas de PE y NPE de la CE entran en
contacto entre sí en sus extremos apicales en una imagen de espejo con amplias especializaciones de
membrana que se encuentran básicamente en la ora serrata, pars plana y pars plicata (figuras 3A-C).
Tenga en cuenta que los términos "apical" y "basal" se refieren a la polaridad de las células epiteliales
individuales, no a la orientación apical-basal de la retina y el EPR. La superficie basal de las células NPE
en la CE entra en contacto con el vítreo, mientras que la de las células PE entra en contacto con la
esclerótica (igura 3A), las invaginaciones de la membrana basal intensiva (hacia el vítreo) y las células PE
apicales contienen esos orgánulos y numerosos melanosomas ( figura 3C). Las células PE y NPE forman
uniones entre sí (figura 3D). En las paredes laterales de la CE, las células epiteliales de las células
pigmentadas (las células 3D y NPE de la figura tienen núcleos e (figura 3B) y contienen lisosomas y
mitocondrias (figura 3B), y contactamos entre sí mediante adherencias y uniones estrechas típicas de los
datos no mostrados. Para comparar las distintas características morfológicas de las células CE con las de
las células de las heres, aislamos las células del CE del ratón y las cultivamos en condiciones sp derivadas
de CE similares a las publicadas anteriormente (Tropepe, Coles et al. 2000; Wachs, Couillard-De et al.
2003). La pigmentación de la mayoría de las células que aislamos en una suspensión unicelular estaba
pigmentada (figura 4A), pero no una pequeña proporción (figura 4B). Pudimos cultivar esferas a partir de
células CE disociadas a una frecuencia de 0.04% (figura 4C). sugirió que los progenitores pigmentados
que se encuentran en las esferas derivadas de CE, que luego tienen el potencial de convertirse en
neuronas de la retina cuando se agrega suero al medio de cultivo. Prácticamente todos los que estaban
pigmentados en las esferas derivadas de CE contenían melanosomas (figura 4D, E) que se parecían a los
encontrados en las células PE. El análisis de TEM de 19 esferas derivadas de CE confirmó que la mayoría
de las células dentro de las esferas, los lisosomas, muchas mitocondrias y la membrana similar a los
microvilos Tropepe y sus colegas (2000) del borde ciliar dan origen a las esferas no pigmentadas en
nuestros cultivos (figura 4C) . De acuerdo con esta observación, la mayoría de las células (si no todas) de
melanosomas contenidos, abundante retículo endoplásmico rugoso, especializaciones similares a las

¿Son las células formadoras de esfera derivadas de CE verdaderas células madre, o simplemente están
proliferando células CE que pueden transdiferenciarse en un subconjunto de neuronas de la retina? El
trabajo reciente de Kohno y sus colegas (2006) apoya esta última posibilidad y, de hecho, puede dar
lugar a respuestas que han sido buscadas durante mucho tiempo en este campo. Mostraron que las
células CE son inicialmente inmunopositivas para los marcadores epiteliales como la citoqueratina y no
para los marcadores progenitores neuronales como la nestina. Las esferas, cultivadas en condiciones de
baja o alta densidad, tienen uniones célula-célula que clasifican su origen como epitelial en lugar de
neuronal (Kohno, Ikeda et al. 2006). El crecimiento clónico de los cultivos de baja densidad es idéntico al
de las esferas derivadas de CE, originales (Tropepe, Coles et al. 2000; Coles, Angenieux et al. 2004). Los
cultivos de alta densidad desarrollados por Kohno y sus colegas indicaron que las células eran
originalmente células epiteliales negativas a nestina que recién habían comenzado a expresar nestina,
una proteína de filamento neural intermedia, después de la expansión en condiciones de alta densidad
durante un período de tiempo. Estos datos plantean la posibilidad de transdiferenciación.
Específicamente, las células PE de la CE pueden expandirse in vitro cuando se cultivan como células
individuales en presencia de factores de crecimiento. Nuestro análisis TEM de las esferas derivadas de CE
es consistente con esta hipótesis. Una vez que las células PE de la CE se transfieren a condiciones de
diferenciación (por ejemplo, mantenimiento en cultivo en presencia de suero o trasplante en el ojo), se
someten a transdiferenciación. Este hallazgo explica la presencia de células pigmentadas en solo algunas
de las células diferenciadas informadas por Tropepe y colegas (2000)

La transdiferenciación de las células madre, en general, es un tema muy debatido (Bjornson, Rietze y
otros, 1999; Galli, Borello y otros 2000; Morshead, Beaveniste et al. 2002; Vescovi, Rietze et al 2002).
Hay una escasez de datos que sugieren que las células madre de la retina se transdiferencian. El trabajo
con urodeles ha demostrado que el RPE puede transdiferenciarse directamente en la retina neural
durante la generación. Otro trabajo ha demostrado que la retina de los mamíferos puede
transdiferenciarse en células (Rowan, Chen et al. 2004). La hipótesis alternativa es que CE La
transdiferenciación no disminuye el potencial terapéutico del tratamiento con retinopatías de células
madre de la retina, si las células derivadas de CE pueden reprogramarse adecuadamente. Sin embargo,
estos estudios plantean algunas preguntas interesantes sobre el origen de las células madre de la retina
y su mecanismo de expansión in vitro.

TERAPIAS DE Células madre retinianas

Más allá de las preguntas biológicas interesantes sobre las células madre de la retina, se están
abordando preguntas importantes sobre su posible uso terapéutico en retinopatías como la
degeneración macular y la Amaurosis congénita de Leber. Sin embargo, antes de que estas células
derivadas de CE puedan usarse para tratar de manera eficiente tales enfermedades debilitantes, deben
superarse varios desafíos sustanciales. Primero, las células derivadas de CE deben generar los tipos de
células específicos necesarios en la retina degenerativa individual, en la proporción específica requerida
para mantener la proporción adecuada para el procesamiento de la señal visual. En estudios iniciales de
NSC con trasplante heterólogo, las células se integraron en el ojo en desarrollo, pero no expresaron
marcadores de tipos de células retinales completamente diferenciadas (Takahashi, Palmer et al. 1998).
Otro trabajo ha demostrado que en los ratones NOD-SCID postnatal del día 0, las células CE humanas
marcadas con EGFP migraron, se integraron en la capa de fotorreceptor y expresaron marcadores
específicos para varilla y Muller glia en el 75% de los ratones trasplantados (Coles, Angenieux et al.
2004). Se espera que las células madre de la retina, NSCS, o El nuevo portafolio Samantha A. Cicero y
Michael A. Dyer, quienes tienen la capacidad de diferenciarse en el linaje de la retina, las células también
pueden responder a las señales dentro de la retina y generar neuronas y glía en la retina. Incluso si esto
es posible, no sabemos cómo se generarán las proporciones correctas de cada tipo neuronal necesario,
por ejemplo, algunas formas de degeneración retiniana se restringen a los fotorreceptores de barra,
mientras que otras se limitan a los fotorreceptores de cono durante las etapas tempranas de la
enfermedad. Es posible que se requiera un enfoque personalizado, caso por caso, para tratar estas
enfermedades. Sus conexiones sinápticas en el tejido retiniano restante. Incluso si el plexo sináptico
existente de la retina es correcto. Mediante el trasplante de células progenitoras de la retina El segundo
desafío que debe superarse es que las neuronas deben integrar eficientemente las neuronas de la retina,
las nuevas neuronas no serán útiles a menos que se integren en los ratones transgénicos postnatales que
expresan GFP en ratones con degeneración de la retina (rd) , Klassen y sus colegas mostraron cambios en
el comportamiento mediado por la luz de los receptores (Klassen, Ng et al. 2004). Sin embargo, estos
estudios no demostraron que las células trasplantadas son funcionales. Solo indicaron que pudo haber
ocurrido un cambio en la cinética de la degeneración de los fotorreceptores (Klassen, derivado de Ng et
al. 2004)

En tercer lugar, debemos superar los efectos autónomos no celulares asociados con muchos síndromes
de degeneración retiniana. Por ejemplo, si uno pudiera estimular las células derivadas de CE para
producir fotorreceptores de cono en una retina degenerativa, se deben eliminar simultáneamente las
señales no celulares autónomas que propagan la muerte de los fotorreceptores en muchas retinopatías.
Sin embargo, se ha propuesto la posibilidad de que las células madre no se diferencien, sino que
contribuyan a disminuir la pérdida de células como espectador. Este modelo indica que las células madre
pueden permanecer indiferenciadas e indicar a otras células que cambien el ambiente degenerativo
(Martino y Pluchino 2006).

El desafío que debemos superar es que las células derivadas de CE, especialmente las células formadoras
de esfera derivadas de CE, deben expandirse significativamente en cultivo. A diferencia de las NSC que
dan lugar a un número creciente de neuroesferas con cada paso sucesivo, hasta un aumento de 10 veces
más 10 pasajes (Reynolds y Weiss 1996), las esferas derivadas de CE se expandieron solo durante los
primeros pasajes (figura 7) (Tropepe, Coles et al. 2000; Coles, Angenieux et al. 2004; Inoue, Yanagi et al.
2005; Yanagi , Inoue et al. 2006). Inoue y sus colegas demostraron que en conejos, la senescencia
replicativa ocurre después del tercer pase. Se detectó un ratón en cada una de las 3 primeras pasadas. Se
observó un aumento de H en los pasajes subsiguientes (Cole s, Angenieux et al. 2004)

aproximadamente 10.000 células madre por CE Las células madre derivadas de CE podrían ser pasadas 6
veces, y un aumento de 25 veces en el número de esferas derivadas de células madre derivadas de CE en
forma in vitro incrementó 91 veces el número en primer pasaje, pero solo un promedio de 1.3 veces En
términos de números reales para la intervención terapéutica, el material de partida es de un solo ojo
humano postmortem (comunicación personal, BLK Coles); así, después de 13 pasajes, habría un
aumento de aproximadamente 2 órdenes de magnitud a 16 millones de células madre. Aunque estos
números podrían ser suficientes para algunos trabajos de trasplante, son significativamente más
pequeños que los miles de millones de células que se pueden obtener de otras regiones del SNC
embrionario y adulto o del suministro ilimitado de células de las líneas celulares ES.

Ressarch en células formadoras de esfera derivadas de CE y la retina neural normal puede permitirnos
mejorar la expansión de celis in vatro y ur vinvo con fines terapéuticos. La falta de Chx10 en el ratón con
retraso ocular disminuye la población de células progenitoras y aumenta la población de células madre,
según se evaluó mediante ensayos de neurosfera in vitro (Coles, Horsford et al 2006). Además, el factor
de transcripción Mitf también puede desempeñar un papel en la génesis de las células madre en el
margen ciliar del ratón. Los ratones igmutant exhiben un fenotipo de óvulo pequeño debido a la pérdida
y Anomalías de la población progenitora del EPR. En el mismo estudio, Coles y sus colegas informaron un
aumento de 6 veces en el número de esferas generadas por ojo en el mutante Mif adulto. En el futuro, la
modulación farmacológica de la actividad de Chx10 y Mitf en células derivadas de CE puede permitir a
los investigadores mejorar la expansión de estas células en cultivo antes del trasplante. Los esfuerzos en
curso para identificar pequeñas moléculas que modulan las rutas involucradas en el crecimiento del
tumor pueden contribuir eventualmente a mejorar La eficiencia de la formación de esferas derivadas de
CE en la cultura. En general, los objetivos suelen ser los opuestos para los quimioterapéuticos de
molécula pequeña para el cáncer (detención del crecimiento) y la biología de las células madre
(expansión proliferativa), pero los estudios sobre agentes anticancerosos demuestran una prueba de
principios para modular estas importantes vías de señalización in vitro. Por ejemplo, en ausencia de
FGF2, la señalización de Hedgehog activa la proliferación del margen ciliar en la retina de regeneración
de pollos embrionarios (Spence, Madhavan et al. 2004). La pérdida de un alelo de ptc, un receptor de
Shh, aumentó el número de células en proliferación en el margen ciliar de ratones mutantes (Moshini y
Reh 2004). De manera similar, la activación de la ruta Wnt aumentó el tamaño de esfera derivado de CE y
la expresión de Ki67, un marcador de células en proliferación (Inoue, Kagawa et al. 2006). Estos datos
sugieren que al modular las vías de señalización de Hedgehog y Wnt, podemos mejorar la expansión de
las células derivadas de CE in vitro y controlar mejor la salida del ciclo celular terminal después del
trasplante en la retina enferma.

Células madre de CANCER

En los últimos años, muchos de los conceptos tradicionalmente asociados con la biología del desarrollo
se han aplicado a la biología del cáncer. Uno de los mejores ejemplos es la idea de una célula madre del
cáncer (CSC). En la leucemia linfoblástica aguda, el tumor surge de una célula madre. Otros estudios
revelaron que muchos tipos de cáncer tienen propiedades de las células madre, como la auto renovación
y la capacidad de expandirse indefinidamente. El concepto de CSC es un marco útil para estudiar el
mecanismo de la expansión del giro (Lapidot, Sirard et al. 1994; Pardal, Clarke et al. 2003). Un tumor
puede expandirse desde una pequeña población de CSC, incluso si el tumor no surgió inicialmente de
una célula madre normal. Por ejemplo, un tumor puede surgir de una célula progenitora o una célula
más comprometida durante el desarrollo, y las mutaciones que conducen a un tumor. la iniciación
podría generar un CSC con el potencial de auto-renovación. Esto es de particular importancia para las
consideraciones de la célula de origen del retinoblastoma, porque las células madre de la retina no están
presentes en la retina neural donde surgen los tumores (Tropepe, Coles et al. 2000, Coles, Angenieux et
al 2004). Una de las características de la El modelo de CSC es que los tumores se componen de una
mezcla de CSC que se renuevan automáticamente y células más diferenciadas. El concepto de
diferenciación en una población de células tumorales en proliferación contradice al inquilino
ampliamente aceptado de la biología del desarrollo de que la proliferación y la diferenciación son
mutuamente excluyentes. Esto es particularmente relevante en el CNS en desarrollo, donde las células
deben salir del ciclo celular, someterse a una especificación del destino celular, migrar a sus capas
apropiadas, ejecutar un programa de diferenciación, extender neuritas y luego formar sinapsis. Esta serie
compleja, precisamente orquestada de pasos involucrados hace que sea difícil imaginar cómo una
neurona diferenciada también puede ser una célula cancerosa en proliferación. Una posible explicación
es que la diferenciación de las células tumorales es incompleta, en comparación con la de su Las
neuronas circundantes, ic, una célula tumoral pueden expresar genes normalmente asociados con la
diferenciación de un tipo de célula neuroual particular, pero no imigran, no se extienden a las neuritas,
sino que forman sinapsis. De acuerdo con esta idea, la sinaptogénesis nunca se ha detectado en tumores
del SNC o en cs. En forma alternativa, la diferenciación de las células tumorales puede ser una de las
etapas iniciales de la rumorigénesis, y en el momento en que se diagnostica el cáncer, la mayoría de las
células tumorales han progresado a un estado menos diferenciado, que es más compatible con un
fenotipo tumoral agresivo e invasivo De hecho, en el momento en que se diagnostican la mayoría de los
cánceres humanos, tienen miles de millones de células que están muy alejadas de la lesión
preneoplásica iniciadora. Además, muchos tumores humanos están Clonal y se origina a partir de una
sola célula que sufrió una lesión genética iniciadora. Por lo tanto, incluso si un puñado de células se
diferenciaran cuando el tumor tenía solo unos pocos cientos o unos pocos miles de células, estas células
tunecinas diferenciadas se perderían a medida que el tumor se expandiera hasta el punto en que podría
diagnosticarse clínicamente de y. Aunque la idea de CSC es muy atractiva, no está claro si existen en
tumores sólidos. Teóricamente, una célula madre puede obtener una lesión genética que causa su
proliferación incontrolable, independientemente de su nicho. La progenie de dicha proliferación serían
células madre y progenitoras por división asimétrica, 2 progenitores por división simétrica donde se
pierden células madre o más. Células por auto-renovación de la división simétrica. Las células madre
producidas por una división auto-renovadora asimétrica o simétrica podrían, a su vez, producir
progenitores. Los progenitores producidos a partir de dichas células madre podrían intentar
diferenciarse en las células de ese órgano en particular. Estos progenitores y la progenie difterentiada
aún retendrían la lesión genética que causa la mitosis incontrolada. En un órgano completamente
desarrollado, se podría formar un tumor si las células retenían una segunda lesión. Estas células deben
poder escapar de la apoptosis e ser independientes de la inhibición por contacto para que el crecimiento
celular induzca completamente la formación de un tumor. En un órgano que aún está desarrollando y
recibiendo señales de E-elopmental, la proliferación descontrolada de progenitores o células madre
podría conducir a la formación de tumores si las células retenían una segunda lesión. En la retina, el
proliferativo no controlado de los progenitores al inicio del desarrollo cambiaría la proporción de los
tipos de células debido a la sincronización de la competencia del progenitor. Podría haber más células
comprometidas con un destino anterior que con un destino posterior, cambiando así el patrón general
de desarrollo de la formación de la retina. No está claro si las células sin una segunda lesión pueden
formar directamente un enfoque para aislar CSC es purificar células tumorales con propiedades de
células madre, el tejido normal Singh et al (2004) aislaron células de tumores de meduloblastoma y
glioblastoma y las clasificaron en la base de su expresión del marcador de células madre somáticas
CD133 (prominina). CD133 es una proteína de membrana pentaspan que se expresa en células madre
hematopoyéticas y progenitoras (Dimitriou, Vorgia et al, 2003, Kuci, Wessels et al 2003, Toren, Bielorat et
al, 2005), células de mycloid y leucemia (Bodo, Baroni et al. 2006 Florian, Sonneck et al 2006) y células
madre musculares (Alessandri, Pagano et al. 2004). La fracción de células CD133 'que Singh y sus colegas
(2004) aislaron de tumores primarios produjo tumores que, a un número bajo de células en ratones
NOD-SCID, podían ser transmitidos por el cuerpo y reproducían todas las características histopatológicas
de las células CD133 trasplantadas en el tumor original. No se produjeron rumores. Estos datos son
convincentes, pero al igual que con todos los marcadores de tipos de células particulares, se debe tener
cuidado al interpretar estos hallazgos. Esta e fue abordada recientemente en el embrión humano y en
los cultivos de neuroesferas derivadas de médula espinal (Piao, Odeberg et al, 2006) Piao y sus colegas
descubrieron que a lo largo de múltiples pases en el cultivo, neuroesferas del cerebro anterior o
derivadas de médula espinal mostraron proporciones crecientes de células CD133 'También hubo más
células CD33 en las neuroesferas que en las células disociadas del tejido. Estos datos demuestran que las
células stam están experimentando una auto-renovación simétrica. Sin embargo, esto es muy
desagradable, ya que los datos informados fueron proporciones de células en lugar de números de
células totales. Es más probable que estas células cambien las características a lo largo del tiempo en el
cultivo. Es interesante que en cualquier pasaje en condiciones de diferenciación, las neuroesferas
produjeron proporciones similares de neuronas y glía Lo que estos datos muestran claramente es que la
fiabilidad de los marcadores para aislar células madre y CSC potenciales puede cambiar con el tiempo. Lo
que no se ha explorado es la expresión de marcadores de células madre en tumores a medida que
avanza la enfermedad.

RETINOBLASTOMA Y CÉLULAS MÁSTICAS DEL CÁNCER

Como se mencionó anteriormente, el retinoblastoma probablemente no es original de una célula

madre. pero puede expandirse a través de un mecanismo de células madre. Específicamente, una célula
madre de retinoblastoma podría auto renovarse y generar células tumorales diferenciadas en apoyo de
esta hipótesis, una pequeña población de células madre potenciales en las líneas celulares de
retinoblastoma Weril e Y79 se informó recientemente (Seigel, Campbell et al. 2005). Las células dieron
positivo para marcadores de células madre como ABCG2, que es un transportador de casete de unión a
ATP que es un marcador de resistencia a fármacos en una variedad de tumores malignos, incluido el
cáncer de mama (Doyle y Ross 2003). Las células Weril y Y79 que excluyen el colorante Hoescht expresan
el transportador ABCG2 Para confirmar que estas células no fueron causadas por artefactos de cultivo a
largo plazo, los investigadores también examinaron los tumores transgénicos del ratón T40 con antígeno
T y las muestras de archivo del retinoblastoma humano. Estas muestras mostraron una pequeña
población (<1%) de células que eran positivas para aldehído deshidrogenasa 1 (ALDH1) y ABCG2. Será
interesante probar la expresión de marcadores de células madre en modelos de ratón de retinoblastoma
que recapitulen más fielmente la enfermedad humana En un estudio más amplio de retinoblastomas
humanos de archivo, Mohan y sus colegas (2006) demostraron que MCM2 y ABCG2. Las células se
encuentran en más del 50% de las muestras de tumores estudiadas. Curiosamente, tanto Seigel como
sus colegas, al igual que Mohan y sus colegas informaron sobre células esporádicas dentro de la retina
normal que también fueron positivas para los marcadores de células madre. Debido a que estos
informes solo pueden correlacionar la expresión de los marcadores de células madre con el
retinoblastoma, se necesita mucho trabajo para determinar si existe un mecanismo de células madre
inherente a la enfermedad, el aislamiento prospectivo de las células madre potenciales y su
caracterización a través del pasaje in vivo e in vitro proporcionarán una imagen más clara del papel, si lo
hay, de las células madre en el retinoblastoma En particular, los modelos de ratón del retinoblastoma
serán esenciales para estos estudios, porque los modelos de cáncer humano en ratones nos permiten
estudiar las etapas iniciales de la formación del tumor y determinar si la célula tumoral La diferenciación
es una característica de la carcinogénesis. Sin embargo, es muy importante que los modelos de ratón
recapitulen las características histopatológicas y genéticas de la enfermedad humana. Hemos generado
el primer modelo de ratón de eliminación de retinoblastoma inactivando los genes Rb y p / 07 en la
retina de ratón en desarrollo de Chxl0-Cre. Ratones Rb107 (Zhang, Schweers et al 2004, Dyer, Rodriguez-
Galindo et al. 2005). Sin embargo, creímos que la penetrancia limitada, la capacidad de proliferación
restringida y la invasión mínima de estos tumores no recapitularon el retinoblastoma humano (Dyer y
Harbour 2006). Cuando inactivamos simultáneamente Rb, pl07 y p53 en el desarrollo de la retina
Chrl0Cre: Rp07, se formó un retinoblastoma bilateral agresivo e invasivo en el 100% de los ratones en
unos pocos Células proyenitoras de la retina, Células madre retinianas y Retinoblastoma 181 meses.
También recapitulamos la pérdida de heterocigosidad en el locus Rb en Chso. Para usarlo bajo el tD o
10mce (Dyer y Harbour 2006), este es el único modelo de ratón del retinoblastoma que presenta estas
características. Una limitación de los ratones Chel 0Cp0 es que p53 se inactiva en las células progenitoras
de la retina durante el desarrollo. En el retinoblastoma humano, p53 no está mutado (Kato, Shimizu et al.
1996; Nork, Poulsen et al. 1997) Estos datos sugieren que la vía p53 está inactivado en el retinoblastoma
humano por una lesión genética que no involucra el locus p33, recientemente hemos encontrado que la
vía de p53 se suprime en el 75% de los retinoblastomas humanos mediante la amplificación de los genes
MD VOX y MDM2 (Laurie, Donovan, et al. 2006). MDMX se expresa ectópicamente en la retina del ratón
que carece de Rb y pl07 (Chally Ils yf stem Rl07), recapitula el torbellino humano y fenocopía los tumores
Chr10-CreRb0. Estos datos se combinaron con la extensa caracterización del papel de la familia Rb en el
desarrollo de la retina (Chen, Livne-Bar et al 2004; Donovan y Dyer 2004; MacPherson, Sage et al 2004;
Zhang, Gray et al. 2004, Donovan, Schweers et al 2006) sugieren que los ratones Chxirp3pl0 recapitulan
fielmente el retinoblastoma humano, y los ratones Chx! 0-Cr p0 tienen una forma más leve de
retinoblastoma característica de las primeras etapas de la tumongénesis. Los estudios preliminares que
utilizan retinoblastomas de ratones Chr10-Cpl0 y Chxl00.CreRploT han demostrado que la diferenciación
de células de umacrina y células horizontales es una característica de las etapas iniciales de la
carcinogénesis del retinoblastoma. Los tumores pierden sus características diferenciadas a medida que
progresan e invaden el tejido circundante. (Johnson, Dyer, hallazgos inéditos) pero sí. S1Ba cently ich
como célula fue genérica DHI) estudio OLLS y ambos Aunque actualmente no hay datos disponibles que
sugieran que una célula madre retiniana es la célula de origen del retinoblastoma, las células formadoras
de esfera derivadas de CE pueden contribuir al melanoma ocular. El melanoma uveal es un tumor
maligno en el adulto que afecta a las células pigmentadas del cuerpo ciliar, el iris y la coroides. El
melanoma uveal es poco frecuente y la probabilidad de supervivencia a 5 años es relativamente baja
(Singb y Topham 2003b). El melanoma uveal tiene una alta tendencia a metastatizarse en el hígado y
otros sitios extraoculares y es extremadamente agresivo (Gragoudas Seddon et al. 1991). Con la
metástasis, la tasa general de supervivencia de un año de supervivencia se reduce a aproximadamente el
13% con tratamiento (Gragoudas 1991). Sin tratamiento, la mediana de supervivencia cum fue de 2
meses. Aunque se conocen las células que están afectadas, no hay conocimiento en un metanálisis de
casos de melanoma uveal, Singh y sus colegas informaron que la infestación de melanoma uveal es más
alta entre las poblaciones caucásicas en aproximadamente el 93% de los casos, posiblemente debido a
disminución de la pignentación y mayor susceptibilidad al daño del ADN inducido por la luz UV (Singh y
Topham 2003; Singh, Reanie et al. 2004). A diferencia del retinoblastoma, la úvea es una neoplasia
maligna que se origina en las células adultas en la región de la supuesta inflamación del cáncer, y es un
candidato más probable para un cáncer que se desarrolla como resultado de la proliferación
incontrolada de progenitores epiteliales o células madre. Ctive A. En oise nueve que sc.

CONCLUSIÓN

Al construir sobre nuestra sólida base en la neurobiología del desarrollo de la retina, hemos logrado un
progreso significativo en el desarrollo de modelos preclínicos de retinoblastoma en los últimos 2 años
que han influido en los ensayos clínicos para tratar esta enfermedad infantil debilitadora cáncer.
Proponemos que muchos de los conceptos informados en los estudios sobre el desarrollo de la retina
neural se pueden aplicar de manera efectiva a los estudios sobre las presuntas células madre de la retina
en la CE. En particular, el concepto de cambio de competencia no se ha aplicado a las células formadoras
de esferas de la CE. CE en cualquiera de las especies estudiadas hasta la fecha. Esto es absolutamente
crítico para la definición de una célula madre, porque una competencia inmutable es una característica
clave de uno mismo. renovación y es fundamental incluso para la definición más amplia de una célula
madre adulta. Además, se requiere una caracterización detallada de la proliferación y diferenciación de
las células formadoras de esfera derivadas de CE para permitirnos manipular estas células in vitro para
obtener el máximo beneficio terapéutico. También es importante identificar la célula de origen para las
esferas derivadas de CE y determinar si estas células son una célula quiescente rara en la CE o una célula
epitelial diferenciada en proliferación que conserva su capacidad de transdiferenciar en neuronas
retinianas. Finalmente, el potencial de la terapia basada en RSC con células madre de la retina enfrenta
varios obstáculos importantes que incluyen la integración de las neuronas de la retina, la protección
contra la muerte celular y la regulación de la generación de diferentes proporciones de tipos de células
de la retina. Todos estos procesos se han caracterizado ampliamente en la retina en desarrollo. Varios
grupos han establecido que las células madre de la retina probablemente no están ubicadas en la retina
neural en desarrollo donde se forma el retinoblastoma (revisado en Dyer y Bremner 2005). El
retinoblastoma probablemente no se origina en una célula madre de la retina, pero el tumor puede
expandirse a través de una célula madre mecanismo. Por lo tanto, las terapias para este cáncer infantil
debilitante deben centrarse en eliminar dichas células, si existen. Curiosamente, el melanoma uveal se
deriva de las células pigmentadas en la región donde residen las células formadoras de esfera derivadas
de CE. Por lo tanto, este tipo de cáncer puede surgir de las células madre de la retina presuntivas.