I.

INTRODUCCION:

La denominación de fosfatasa ácida comprende un conjunto de enzimas ampliamente

repartidas en el organismo (eritrocitos, suero, plaquetas, leucocitos, bazo, hígado,
osteoclastos y en epitelios glandulares de próstata, mama, estómago y cólon). Mediante
electroforesis se han identificado 5 isoenzimas de la fosfatasa ácida (Díaz et al., 1997).
Las distintas isoenzimas se diferencian entre sí por su pH óptimo, peso molecular y
requerimientos de activadores e inhibidores (Wiener Lab, 2000).

Para el experimento usamos L-tartrato como inhibidor específico de la fosfatasa ácida

prostática; de manera que, podamos calcular su actividad y no la de las isoenzimas
presentes en el suero.

Nuestros objetivos son calcular la actividad enzimática de la fosfatasa ácida prostática

presente en las muestras de suero (una de mujer y dos de varones); y, comparar los
valores entre las muestras, discutiendo sus variaciones.

II. MATERIALES Y METODOS:

EQUIPOS Y MATERIALES

 Espectrofotómetro
 Vórtex
 Baño María
 Pipetas
 Tubos de ensayo
 Gradillas

REACTIVOS

 Buffer citrato 0.09M

 Buffer citrato 4.85, conteniendo tartrato 0.04M
 P-nitrofenilfosfato 0.036M
 NaOH 0.15
 Buffer acetato 5M

B M1 M2 BT MT1 MT2
Buffer citrato 0.5 0.5 0.5 X X X
Buffer citrato con x x x 0.5 0.5 0.5
tartrato 0.04M
p-nitrofenilfosfato 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
0.036M
37°C x 5 min

Suero x 0.1 0.1 x 0.1 0.1

37°C x 30 min
NaOH 0.15M 1.65 1.65 1.65 1.65 1.65 1.65
Suero 0.1 x x 1.0 X X

Tabla 1. Procedimiento a seguir con cada tubo.

III. RESULTADOS
Datos obtenidos en el laboratorio (Absorbancia)

Mesa, B M1 M2 BT MT1 MT2

#Muestra
M1, #1 0.189 0.181 0.171 0.172 0.177 0.178
M2, #2 0.185 0.263 0.264 0.188 0.253 0.254
M3, #3 0.218 0.235 0.246 0.217 0.242 0.226
M4, #1 0.160 0.162 0.161 0.165 0.165 0.163
M5, #2 0.173 0.255 0.254 0.175 0.244 0.240
M6, #3 0.217 0.243 0.247 0.216 0.240 0.243

Calculando la concentración del producto y cambiando las unidades

(M1+M2)/2 B (M1+M2)/2 – B

0.176 0.189 -0.0130 -0.00575

0.2635 0.185 0.0785 0.08

0.2405 0.218 0.0225 0.02525

0.1615 0.160 0.0015 -0.00575

0.2545 0.173 0.0815 0.08

0.2450 0.217 0.0280 0.02525

(MT1+MT2)/2 BT (MT1+MT2)/2 – BT

0.1775 0.172 0.0055 0.00225

0.2535 0.188 0.0655 0.06625

0.234 0.217 0.0170 0.02225

0.164 0.165 -0.001 0.00225

.242 0.175 0.0670 0.06625

0.2415 0.216 0.0275 0.02225

ABSORBANCIAS
 M1yM2 de la mesa 1 y 4 -0.00575
M1yM2 de la mesa 2 y 5 0.0800
M1yM2 de la mesa 3 y 6 0.02525
MT1yMT2 de la mesa 1 y 4 0.00225
MT1yMT2 de la mesa 2 y 5 0.06625
MT1yMT2 de la mesa 3 y 6 0.02225

M1yM2 MT1yMT2
Mesa 1 y 4 -0.00575 0.00225
Mesa 2 y 5 0.0800 0.06625
Mesa 3 y 6 0.02525 0.02225

Calculamos la actividad enzimática en términos del producto (P)

Fosfatasa Ácida Total Fosfatasa ácida con

Prostática
MUJER -0.00575 UL/L - 0.008 UL/L
VARON 0.0800 UL/L 0.01575 UL/L
VARON 0.02525 UL/L 0.00300 UL/L

IV. CÁLCULOS:

De acuerdo a la ecuación:

p-nitrofenilfosfato p-nitrofenol + Pi p-nitrofenolato + H

Debemos calcular, mediante los datos de absorbancia obtenidos, la diferencia entre el
total de p-nitrofenolato (PNF-) producido y la cantidad de PNF- producida gracias a la
fosfatasa ácida no prostática presente en las muestras de suero. De esta manera
obtenemos la cantidad de PNF- catalizado por la fosfatasa ácida protática.

Promediamos M1 y M2, MT1 y MT2, y restamos el Blanco respectivo para cada mesa.
𝑀1+𝑀2 𝑀𝑇1+𝑀𝑇2
2
−𝐵 2
− 𝐵𝑇

Absorbancia = e . C . l ;

Donde -1“e” es el Coeficiente de Extinción molar (mol-1.Lt.cm -1) , “C” es la concentración

(mol.Lt ), y “l” es el diámetro del tubo. Para estándares de laboratorio el diámetro de la
cubeta es 1cm y tenemos como dato el Coeficiente de Extinción molar para el p-nitrofenil
fosfato obtenido por otros laboratorios clínicos. Por lo tanto, la ecuación queda reducida a:

A = C x 18400

1. Sacando el promedio de absorbancia para la mesa 2 y 5

 0.0731= C x 18400

c = 3.97 umoles/L
Como nosotros usamos 2.5mL, se realiza el siguiente cálculo para hallar
la cantidad de micromoles en toda la solución:

3.97 umoles………………1000mL
x …….…………………..……..2.5 mL

x=0.00993 umoles de fosfatasa ácida

La fosfatasa ácida proviene del suero es decir de (0.1mL):

0.00993 umoles ……...0.1mL

y…………………………...1mL

y= 0.0993 umoles en un mililitro

La acción de la fosfatasa ácida fue en 30 min:

0.10993 umoles/mL……… 30min
z…………..……………....1min

Z= 0.00331 umoles /mL en 1 min <> 3.31 umoles/L

Se tiene que a una absorbancia 0.08 de fosfatasa ácida tiene una

actividad enzimática de 3.31 U/L

2. Sacando el promedio de absorbancia para la mesa 3 y 6, los cálculos serían los

siguientes:

0.0475= C x 18400

c = 2.58 umoles /L
Como nosotros usamos 2.5 mL, se realiza el siguiente cálculo para
hallar la cantidad de micromoles en toda la solución:

2.58 umoles………………1000mL
x…………………………2.5 mL

x=0.00645 umoles de fosfatasa ácida

0.00645 umoles ………...0.1mL

y…………………………...1mL

y=0.0645 umoles en un 1 mililitro

La acción de la fosfatasa ácida fue en 30 min:

 0.0645 umoles/mL……… 30min
z………………………1min

Z=0.00215 umoles /mL en 1 min

Se tiene que a una absorbancia 0.00215 de fosfatasa ácida tiene una

actividad enzimática de 2.15 U/L

V. DISCUSIONES

En el laboratorio se obtuvo experimentalmente estos valores para la

Actividad Enzimática de Fosfatasa Ácida Total y prostática

Fosfatasa Ácida Total Fosfatasa ácida con

Prostática
MUJER -0.00575 U/L - 0.008 U/L
VARON 0.0800 U/L 0.01575 U/L
VARON 0.02525 U/L 0.00300 U/L

Cuadro.1. Resultados propios de la actividad enzimática de

FA

Los valores normales de Actividad enzimática de la Fosfatasa Ácida Total y

Prostática se presentan en el siguiente cuadro:

. Cuadro.2. Rango de valores normales de actividad

enzimática de FA según la Temperatura.

La actividad de ACP es muy escasa en el hombre sano y en el caso de la

mujer sale un valor inexistente, (la fosfatasa acida en mujer proviene del
hígado, eritrocitos y plaquetas) de modo que los valores esperados se
encuentran en el límite del error instrumental o muy cercano al límite de
detección del sistema. (Wiener, 2017). El error se puede deber a las
diferentes velocidades y formas que se tuvo al agregar el suero a los
tubos muestra, la reacción se produce instantáneamente y la cuenta del
tiempo estaría viéndose afectada. Para esto se aconsejaría que una
persona sea quien use la micropipeta y lo agregue el suera de la misma
manera en todos los tubos muestra. Otro motivo para que ocurra el error
seria la falla al momento
 Debe sospecharse la presencia de cáncer prostático toda vez que los
valores superen en un 60% el normal superior (Wiener, 2017).
Según los resultados obtenidos el valor de la actividad de fosfatasa
ácida prostática (PAP) en el caso de los hombres las dos muestras son
menores a 3,5 U/L (a 37°C). Por lo tanto, la muestra está dentro del
rango de los valores normales.
Tomando como referencia el Manual de Prácticas de Enzimología: “Los
valores normales en adultos de PAP son 2 a 3 U/L”. No se hace una
clara distinción entre FA de hombre o mujer, sin embargo, los valores
obtenidos estarían fuera del rango citado. En caso de los varones no
se podría concluir que el paciente padece de cáncer de próstata, ya
que estos datos se encuentran en el límite del error instrumental.
(Wiener, 2017). Se necesitaría varias pruebas para llegar a dicha
conclusión.

VI. CONCLUSIONES
 Según los datos los pacientes no poseen ningún malestar, ya que se encuentran
dentro del rango normal de actividad enzimática de FA.
 No se podría considerar que los pacientes tengan una enfermedad ya que hubo
error al realizar la prueba, alterando los datos.
VII. BIBLIOGRAFIA

 Díaz P., Jacobo; Fernández D.B., María T. y Paredes S., Fernando. Aspectos básicos de
Bioquímica Clínica. Ediciones Días de Santos, S.A. Madrid, España. Pág. 108
 Wiener Laboratorios S.A.I.C. Fosfatasa Ácida Total y Prostática Cinética. [Citado el 14
de setiembre de 2017] pp. 3. Internet. 2000. Disponible desde: http://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/fosfatasa_acida_tot
al_y_prostatica_cinetica_sp.pdf
 Lin, M., Lee, C., Wojcieszyn, J., Wang, M., Valenzuela, L., Murphy, G., & Chu, T. (1980).
Fundamental Biochemical and Inmunological Apects of Prostatic Acid Phosphatase
The Prostate, 1(4), 415-425.
 Wiener. (23 de Abril de 2017). Obtenido de: http://www.wiener-
ab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/fosfatasa_acida_total
_y_prostatica_cinetica_sp.pdf