MÉTODOS EFECTIVOS PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN EN CÉLULAS

VEGETALES

SALOMMÉ FABIANA DUITAMA MOJICA cód. 1611702

MARIA CAMILA RODRIGUEZ ALVAREZ cód. 1611703
YULEISY KATHERINE GALVAN ROBLES cód. 1611704

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
INGENIERIA BIOTECNOLOGICA
CÚCUTA
2019
 INTRODUCCION
En el presente anteproyecto se darán a conocer métodos para la extracción de ADN vegetal y así
mismo los más efectivos. Mediante pruebas realizadas en los laboratorios de la Universidad
Francisco de Paula Santander (UFPS) en compañía de docentes especializadas en el área
 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
 Identificación de parentesco.
 Será efectivo la embriogénesis vegetal.
 Complicaciones en la identificación de la cadena de Ácido desoxirribonucleico.
 Que tan puro es el ADN que se extrae.
 JUSTIFICACIÓN
Es importante conocer y entender el tema ácido desoxirribonucleico, su tarea principal es ser la
molécula de la vida, y mantener a través del código genético la información necesaria para crear
un ser vivo. En ella podemos encontrar los genes 99% de información genética. Este trabajo se
hace con el fin de reconocer y aprender a extraer ADN sino también de frutas vegetales entre
otras, identificar la calidad de extracción de ADN de un vegetal y los métodos más efectivos para
este proceso. Este trabajo nos puede ayudar en el futuro ya que esto nos deja una enseñanza de
las diferentes maneras de extraer el ADN de un producto, alimento.
 OBJETIVOS DE LA ESTRACCIÓN DE ADN EN PLANTAS
 Generales
 Evaluar los métodos más efectivos para la extracción de ADN contenido en el núcleo de
las células vegetales.
 Específicos
 Categorizar las etapas necesarias para extracción del ADN.
 Determinar datos cuantitativos y biológicos de los procesos desarrollados, en la
extracción del ADN vegetal.

PARA TENER EN CUENTA

 El tipo de muestra o fuente de la que se quiere obtener el ADN.
 La pureza con la que se quiere obtener el ADN extraído.
 El tiempo que consume cada método, su costo y el rendimiento esperado.
 MARCO TEORICO

Friedrich Miescher aisló el ADN por primera vez, durante el invierno de 1869, mientras
trabajaba en la Universidad de Tubinga.
A la edad de 17 años, empezó en Basilea sus estudios de medicina, que terminó, con 23 años, en
1867. En 1872 se hizo profesor en la Universidad de Basilea.
En la primavera de 1868 se trasladó a Tubinga para trabajar con dos de los científicos de más
prestigio de la época: Adolf Strecker, especialista en química orgánica, en cuyo laboratorio
permaneció durante un semestre, y Félix Hoppe-Seyler, bioquímico y uno de los pioneros de la
recién aparecida “química fisiológica”.
El 26 de febrero de 1869, en el laboratorio de Félix Hoppe-Seyler, en el castillo de Tuebingen.
Miescher realizaba experimentos acerca de la composición química del pus de vendas
quirúrgicas desechadas cuando notó un precipitado de una sustancia desconocida que caracterizó
químicamente más tarde. Lo llamó nucleína, debido a que lo había extraído a partir de núcleos
celulares.

Las características fisiológicas y bioquímicas de todo ser vivo están contenidas en su respectivo
genoma. Los genomas de bacterias, hongos, plantas, animales y algunos virus están compuestos
por moléculas de ácido desoxirribonucleico (comúnmente llamado ADN). El ADN es una
estructura química cuyos elementos fundamentales (nucleótidos) se organizan de manera lineal
generando enormes secuencias de información, La información que define y codifica un carácter
determinado se denomina gen (Lewin 1995). Los genes se organizan linealmente y se agrupan
formando estructuras llamadas cromosomas, los cuales pueden ser vistos bajo el microscopio
durante ciertas etapas del ciclo de vida de la célula.
Después de tratar las células con soluciones salinas, alcohol, soluciones ácidas y soluciones
alcalinas, vio que las células tratadas con una solución salina daban un precipitado gelatinoso
cuando se acidificaba la solución. Miescher supuso que el precipitado podría estar asociado con
el núcleo celular. Para ensayar esta posibilidad se dedicó a aislar núcleos. Cuando trató los
núcleos aislados con una solución alcalina y luego la acidifico, observó un precipitado. El
análisis de este precipitado mostró que se trataba de un material complejo que contenía entre
otras cosas, nitrógeno y fósforo. Las proporciones eran diferentes a cualquier otro material
biológico estudiado por lo que concluyó que había aislado un componente biológico no descrito
previamente, asociado casi exclusivamente con el núcleo.
En 1874, Miescher, que se había trasladado a Basilea, comenzó sus investigaciones con el
esperma de los salmones, y descubrió la presencia de una serie de sustancias, una ácida (ácido
nucleico o “nucleína”) y una fuertemente básica, a la que denominó “protamina” y que se
identifica con las histonas.
Se necesitaron casi 70 años de investigación para poder identificar los componentes y la
estructura de los ácidos nucleicos.
Los genes que posee un individuo en su genoma definen su genotipo. La expresión del genotipo
es afectada en gran medida por el medio ambiente, determinando así la apariencia o rendimiento
de un individuo (fenotipo). La genética estudia cómo el genotipo y el fenotipo son transmitidos
de padres a hijos y junto con la biología molecular han desarrollado técnicas de análisis de
poblaciones y de individuos que permiten ubicar, caracterizar y explicar la heredabilidad de
genes u otros fragmentos de ADN (Lewin 1995).
La linealidad de la molécula de ADN y la consecuente disposición de los genes en cromosomas
hacen posible que genes vecinos se hereden juntos. Este hecho, junto con las herramientas
experimentales y de análisis, han permitido generar "mapas", en los cuales cualquier fragmento
de ADN (marcador molecular) puede ser utilizado como una vía indirecta para seguir el patrón
de herencia de una característica. Los marcadores moleculares establecen relaciones de vecindad
con genes de interés, determinando su localización dentro del genoma del organismo estudiado.
En Arabidopsis thaliana, la primera planta cuyo genoma fue secuenciado completamente, existen
alrededor de 25.500 genes (The Arabidopsis Genome Imitativa 2000). Cada uno de ellos varía en
longitud, teniendo la mayoría de ellos entre 500 hasta varios miles de nucleótidos. Sin embargo,
con base en la información obtenida para A. thaliana y las estimaciones para otras plantas, se
calcula que sólo del 15 al 30% del genoma contiene secuencias codificantes (genes). El restante
85 a 70% se distribuye en secuencias reguladoras indispensables para la expresión de los genes y
en secuencias repetidas que varían entre una y miles de copias por célula (The Arabidopsis
Genome Initative 2000). Estas secuencias repetidas se pueden encontrar agrupadas en regiones
particulares del cromosoma (centrómeros y telómeros) o dispersas a lo largo del genoma (Flavell
y Twell 1996). A la determinación de la posición de genes particulares, secuencias reguladoras y
repetidas dentro del genoma se le denomina mapeo genético Para mapear genes, es decir, para
determinar la ubicación de una característica (gen) en el genoma, se hace necesario realizar
cruzamientos y analizar sus progenies con procedimientos estadísticos relativamente sencillos. El
Fito mejoramiento tradicional ha dado las herramientas conceptuales para analizar la herencia de
caracteres fenotípicos evidentes, tales como tamaño, color, productividad, forma de frutos, etc.
(Griffiths et al 1993). Por su parte, el área de marcadores moleculares ha permitido generar y
analizar múltiples puntos de información independientemente de su funcionalidad. Y es la
integración de las dos disciplinas la que permite acelerar el proceso de mejoramiento genético de
poblaciones e individuos por correlación entre la información fenotípica y la molecular.
A continuación, se describen algunas de las técnicas empleadas para manipular el ADN de
plantas. En la actualidad, la aplicación de esas técnicas es de especial interés para la exitosa
ejecución de programas de mejoramiento genético.
 DISEÑO METODOLÓGICO PRELIMINAR
PREGUNTA DE ENFOQUE POBLACIÓN INSTRUMENTOS Y TECNICAS
INVESTIGACIÓN Y METODO Y CONTEXTO

Población:
¿Cuáles son los diversidad de Entrevista
métodos más efectivos Investigación plantas. semiestructurada Preguntas,
para la extracción de cuantitativa (encargados de los consultas, toma
ADN en células descriptiva Contexto: laboratorios en la de datos
vegetales? Cúcuta (Norte de Universidad
Santander) Francisco de Paula
Colombia. Santander)
 RECURSOS DISPONIBLES
 Visitas a los laboratorios de la Universidad Francisco de Paula Santander
 Instrumentos adecuados
 Vestimenta adecuada
 Visitas a la biblioteca de la Universidad Francisco de Paula Santander
 Asesorías de la docente Jayda Pabón
 CRONOGRAMA

Duración de la investigación
22 agosto 2019 – 24 septiembre 2019
Fecha Actividad realizada Se realizo No se realizo
22 Agosto 2019 Formulación de problema x
y titulo
29 Agosto 2019 Marco referencial (teórico, x
geográfico, histórico,
conceptual)
4 Septiembre 2019 Objetivos generales y x
específicos
11 Septiembre 2019 Diseño metodológico x
preliminar
18 Septiembre 2019 Recursos disponibles, x
bibliografía justificación
25 Septiembre 2019 Entrega x

PROCEDIMIENTO
 Primer método de extracción de ADN

1. Colocamos la mora en un recipiente y maceramos para obtener un soluto con mayor

concentración.

Figura 1
2. Adicionamos la sal y ablandador, jugo de piña.
3. Colocamos Jabón liquido 90 ml y alcohol isopropilico frío 95% v/v

Figura 2 figura 3

4. Dejamos actuar los reactivos y observamos el precipitado del ADN

Figura 4 Figura 5
 Segundo método de extracción de ADN

 PREPARACIÓN DEL TAMPÓN DE LISIS

En un frasco con tapa adicionar 250 mL del agua de la botella. Luego adicionar el
bicarbonato y la sal. Agitar bien hasta obtener una muestra homogénea.

Adicionar el detergente líquido y agitar hasta homogenizar, suavemente para que no se

forme espuma.

 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Adicionar la muestra al vaso de la batidora y agua hasta taparla. Triturar con la batidora
de cuchillas la muestra hasta que no se observen trozos. Colar este batido y recuperar
solo la porción líquida.

 SOLUBILIZACIÓN DE LAS MEMBRANAS

Tomar 10 mL del líquido obtenido y llevarlo a un erlenmeyer de 125 mL. Adicional 20

mL del tampón de lisis. Tapar con una porción de parafilm y agitar por dos minutos.
Filtrar la mezcla obtenida

 EXTRACCIÓN DEL ADN

Tomar 5 mL de la muestra y adicionarla en tubos falcon de 15 mL. Luego adicionar 10

mL de alcohol muy frío por las paredes del tubo.

El ADN migrará a la interfase de los dos líquidos de donde podrá ser extraída con la
ayuda de una aguja o un asa recta para depositarla en una caja de petri para su
observación
 .
Figura 6

DISCUSIÓN
En este estudio se compararon 2 protocolos de métodos de extracción de ADN de de células
vegetales de la mora Rubus ulmifolius y lenteja Lens culinaris, respecto a la eficiencia de
ruptura, cantidad y pureza de ADN. Se realizó, además, un análisis de tiempos y costos de
procesamiento de los métodos empleados.
RESULTADOS
 En la calificación de métodos más efectivos de extracción de ADN, encontramos una
eficiencia mínima del segundo proceso de extracción, el cual utilizamos más reactivos y
la extracción y su cantidad de pureza es mayor.
 Categorizamos las etapas para la extracción de ADN, las cuales son: preparación de la
sustancia tampón, preparación de la muestra, solubilización de las membranas, extracción
del ADN con los reactivos de alcohol isopropilico, reposar la muestra.
 Los costos de la extracción son mínimas ya que se contó con procesos caseros y
económicos para la elaboración.
BIBLIOGRAFIA
https://es.slideshare.net/JosMaita/enfoque-cuantitativo-59914564
https://www.youtube.com/watch?v=P6-4fnNAZvU
http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/laex/patino_b_ma/capitulo1.pdf
http://www.eumed.net/tesis-doctorales/2012/mirm/cualitativo_cuantitativo_mixto.html
https://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/post/10-metodos-de-extraccion-de-adn/
https://www.academia.edu/17371866/TECNICA_DE_EXTRACCION_DE_ADN_VEGETAL
https://www.academia.edu/34330140/Extracci%C3%B3n_de_ADN_en_un_organismo_vegetal
https://www.academia.edu/24529167/extraccion_de_adn
https://www.academia.edu/9782512/EXTRACCION_DE_ADN
https://www.academia.edu/36582548/EXTRACCI%C3%93N_DE_ADN
https://www.academia.edu/34330140/Extracci%C3%B3n_de_ADN_en_un_organismo_vegetal
https://sites.google.com/site/biologia2adn/justificacion
https://es.slideshare.net/19920902/proyecto-del-adn-2
https://ahombrosdegigantescienciaytecnologia.wordpress.com/2015/08/26/el-descubridor-y-
la-primera-persona-en-aislar-el-adn-miescher-2/
TAYLOR, B.H.; MANHAR I, J.R.; AMAS1NO, R.M. 1993. Isolation and characterisation of plant
DNAs. In: B.R. Glick; J.E. Thompson. (Eds.). Methods in Plant Molecular Biology and
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