UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

FACULTAD DE INGENIERIA
CURSO BASICO
Semestre I – 2019

LABORATORIO DE QUIMICA ANALITICA

ESPECIAL
PRACTICA Nº 4
NOMBRE: UNIV. HUALDIA CANAZA RONALDO
DOCENTE: ING. JOSE MONTESINOS
GRUPO: A
FECHA: 21 DE MAYO
2019
 1. OBJETIVOS

- Reforzar el aprendizaje del uso del espectrofotómetro.

- Realizar espectro de absorción de sustancias puras: soluciones de
dicromato de potasio.
- Realizar una curva de absorbancia vs concentración.

2. FUNDAMENTO TEORICO
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para
la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad
y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas,
etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos
de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de
energía interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos,
entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La Mecánica Cuántica nos
dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles tiene una
energía:
Efotón = h⋅ν = h⋅c/λ ,
Donde c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia, λ su longitud de onda y h=
6.6 10 -34 J⋅s es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia
química absorbe luz de longitud de onda λ, esto significa que las moléculas de esa
sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.
En esta práctica estudiaremos la absorción de luz en el ultravioleta cercano
(λ≈325-420 nm) y en el visible (λ≈420-900 nm). Cuando una molécula absorbe un
fotón en este intervalo espectral, se excita pasando un electrón de un orbital del
estado fundamental a un orbital excitado de energía superior. De está manera la
molécula almacena la energía del fotón:
A + h⋅ν → A *
E(A * ) = E(A) + Efotón
Como la energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado
fundamental de la molécula (A) y su estado excitado (A * ) debe ser exactamente
igual a la energía del fotón. Es decir, una molécula sólo puede absorber fotones
cuya energía h⋅ν sea igual a la energía de un estado molecular excitado. Cada
molécula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen
de su estructura electrónica y que la distinguen del resto de moléculas. Como
consecuencia, el espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la
longitud de onda, constituye una verdadera seña de identidad de cada sustancia o
molécula.
En una ampliación a esta práctica, se puede detectar una mezcla de dos
colorantes alimentarios, el rojo E-124 y un colorante verde midiendo su espectro
de ultravioleta/visible. Cuando dos o más sustancias aparecen mezcladas en una
misma muestra sus espectros de absorción aparecen superpuestos tal como se
representa en la siguiente figura:

Principios
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética
en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la
radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un
estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante. En esta técnica
se mide la cantidad de luz absorbida como función de la longitud de onda utilizada.
La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las moléculas, y es característica de cada sustancia química.
La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro
electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380
a 780 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la
región ultravioleta y visible del espectro.
Ley de Lambert
La ley de Lambert trata sobre la iluminancia de una superficie situada a una cierta
distancia de una fuente de luz. Determina que la iluminación producida por una
fuente luminosa sobre una superficie es directamente proporcional a la intensidad
de la fuente y al coseno del si ángulo que forma la normal a la superficie con la
dirección de los rayos de luz y es inversamente proporcional al cuadrado de la
distancia a dicha fuente.
Ley de Lambert-Beer
La ley de Lambert-Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
depende de la concentración en la solución.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar disuelta y en otro
vaso tenemos la misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azúcar en
solución. El detector es una celda fotoeléctrica, y lo que se mide es la
concentración de la solución de azúcar.
Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso,
la cantidad de luz que saldría del otro lado sería mayor que si repitiéramos esto en
el segundo, ya que en este último las ondas electromagnéticas chocan contra un
mayor número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos.2
Ley de Bouguer-Beer-Lambert
Una ley muy importante es la de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida
como ley de Lambert Bouguer y Beer), la cual es solo una combinación de las
citadas anteriormente.
Transmitancia y absorción de las radiaciones
Por las leyes mencionadas anteriormente, al hacer pasar una cantidad de fotones
o de radiaciones hay una pérdida que se expresa con la ecuación:
It/Io=T-kdc''
donde It es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda
fotoeléctrica (llamada radiación o intensidad transmitida); Io es la intensidad
con la que sale al atravesar la celda (radiación intensidad incidente), y la
relación entre ambas (T) es la transmitancia.
En el exponente, el signo negativo se debe a que la energía radiante decrece a
medida que el recorrido aumenta. El superíndice k es la capacidad de la muestra
para la captación del haz del campo electromagnético, d es la longitud de
la cubeta de espectrofotometría que recorre la radiación, y c es la concentración
del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.
La ecuación simplificada de la ley de Lambert-Beer
A = ε.d.c
comprende la mínima ecuación que relaciona la concentración (c), la absorbancia
de la muestra (A), el espesor recorrido por la radiación (d) y el factor de calibración
(ε). El factor de calibración relaciona la concentración y la absorbancia de los
estándares.
La absorción (o absorbancia) es igual a A, que es el logaritmo recíproco de la
transmitancia:3
A= log 1/T
también se puede presentar como porcentaje:
A=2 -log T
Las ecuaciones mencionadas de las leyes son válidas solo y solo si:3

 la radiación incidente es monocromática;

 las especies actúan independientemente unas de otras durante la absorción;
 la absorción ocurre en un volumen de sección trasversal uniforme.

Aplicaciones
Las aplicaciones principales son:

 determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto

utilizando las fórmulas ya mencionadas;
 ayudar en la determinación de estructuras moleculares;
 la identificación de unidades estructurales específicas, ya que estas tienen
distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías);
 determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base.

Tipos de espectrofotometría
 Espectrofotometría de absorción molecular VIS-UV. 13,
 Espectrofotometría de absorción molecular IR.15.
 Espectrofotometría de absorción y emisión atómica.
 Espectrofotometría con atomizadores electro térmicos.
 Espectrofotometría de emisión con plasma.
 Espectrofotometría de fluorescencia molecular.

3. PROCEDIMIENTO
Cabe mencionar que el siguiente procedimiento es válido en caso de que haya
datos de concentración para la realización del laboratorio.
- Espectro de absorción de solución de DICROMATO DE POTASIO para
determinar la longitud de onda a la cual presenta su máxima absorción.
Preparar solución 0,5 x10-3 M Llevar a cero con agua antes de realizar
cada lectura. Medir las absorbancias a distintas longitudes de onda, con
intervalos de 20 nm, desde 340 nm hasta 600 nm. Graficar curva de
absorbancia versus longitud de onda. Observar cuál es la longitud de
onda de mayor absorción que se utilizará para realizar la curva de
calibración y determinar la concentración de una muestra problema.

- Confección de la curva absorbancia versus concentración: A partir de la

solución patrón realizar cinco diluciones: 1/2; 1/4; 1/6; 1/8; 1/10; 1/20
Medir sus absorbancias a la longitud de onda determinada
anteriormente y graficar absorbancia versus concentración.

- Determinar con la gráfica anterior la concentración de la muestra

problema.

4. CALCULOS Y GRAFICOS
Ya que no medimos la cantidad de cada solución ni su concentración, solo se
logró realizar sus respectivas gráficas para cada compuesto.
- Del KMnO4

LONGITUD
DE ONDA
ABSORBANCIA
1,626 400
1,413 420
1,283 440
0,729 450
0,586 480
0,488 500
 0,417 520
0,309 540
0,206 560
0,575 580
0,448 600
0,424 620
0,42 640
0,406 660
0,402 680
0,393 700
0,394 720
0,422 740
0,431 760
0,441 780
0,443 800
0,446 820
0,475 840
0,457 860
0,456 880
0,455 900
0,468 920
0,535 940
0,695 960
0,781 980
0,862 1000

- Del KMnO4

LONGITUD
TRANSMITANCIA DE ONDA
2,4 400
3,9 420
5,3 440
18,6 450
26 480
32,52 500
38,1 520
48,7 540
64,7 560
26,6 580
 35,7 600
37,6 620
38 640
39,2 660
39,2 680
39,6 700
40,4 720
40,3 740
38,3 760
37,6 780
36,6 800
36,5 820
34,6 840
33,9 860
35,4 880
35,6 900
35,52 920
34,5 940
29,6 960
20,1 980
16,7 1000

- Del KCrO4:

LONGITUD
ABSORBANCIA DE ONDA
1,657 400
1,433 420
1,299 440
0,716 450
0,533 480
0,373 500
0,25 520
0,14 540
0,92 560
0,531 580
0,431 600
0,409 620
0,409 640
0,396 660
 0,397 680
0,389 700
0,392 720
0,451 740
0,479 760
0,487 780
0,491 800
0,516 820
0,522 840
0,506 860
0,509 880
0,505 900

- Del KCrO4:

LONGITUD
TRANSMITANCIA DE ONDA
2,2 400
3,7 420
5,1 440
19,2 450
29,8 480
42,4 500
56,3 520
71,5 540
75,1 560
29,3 580
37,2 600
39 620
38,9 640
40,1 660
40,1 680
40,8 700
40,5 720
37 740
35,2 760
34,5 780
34,1 800
 32,4 820
31,8 840
33,1 860
33 880
33,2 900

- Del CuSO4

ABSORBANCIA L.ONDA
1,693 400
1,408 420
1,263 440
0,709 450
0,524 480
0,379 500
0,252 520
0,145 540
0,097 560
0,54 580
0,443 600
0,427 620
0,439 640
0,438 660
0,457 680
0,468 700
0,49 720
0,54 740
0,598 760
0,615 780
0,624 800
0,647 820
0,65 840
0,628 860
0,624 880
0,614 900

- Del CuSO4
TRANSMITANCIA L.ONDA
2,9 400

3,9 420
5,4 440
19,5 450
29,6 480
42,5 500
56,3 520
71,2 540
79,7 560
28,9 580
36 600
37,4 620
36,3 640
36,4 660
34,9 680
34,1 700
32,4 720
28,5 740
24,7 760
23,8 780
23,4 800
22,1 820
22 840
23,1 860
23,3 880
23,9 900

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

- Se logró realizar las gráficas de los diferentes compuestos utilizados,

mediante el espectrofotómetro el cual nos permitió brindar datos con
gran exactitud.
- Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un
método analítico indirecto porque se basa en la medición de la
absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la
actualidad para la identificación de un analito en una muestra problema.
 - La espectrofotometría es el método más usado, debido a que es
sencillo, específico y sensible.

6. ANEXOS