Manual de Prácticas de Microbiología Blgo. Luis Cartagena S.

Práctica:
Aislamiento e identificación de microorganismos
de Infecciones del Tracto Urinario
La infección urinaria es una afección muy frecuente en mujeres y en menor grado en
hombres. Las enterobacterias son las principales causantes de estas infecciones, y entre
ellas principalmente la Escherichia coli.

Se emplean medios selectivos y diferenciales para el aislamiento de enterobacterias, pero

se recomienda se incluya un medio de cultivo general o básico para detectar cualquier
otro tipo de flora que exista en la muestra.

Para lograr resultados útiles para el clínico, el urocultivo debe ser cuantitativo, para lo
cual se hace diluciones de orina, para facilitar el recuento bacteriano. También se debe
describir minuciosamente el examen microscópico de la orina y la ejecución obligatoria
del antibiograma para las cepas aisladas.

Objetivo: Entrenar al estudiante en el aislamiento e identificación de microorganismos

de infecciones del Tracto Urinario.

Muestra Biológica:
• Muestra de orina.

Material y Medio de cultivo:

• Guantes, mascarilla, gorro y protector visual.
• Mechero con ron de quemar y fósforo
• Asas bacteriológicas
• Batería de coloración GRAM
• Placas con Agar Sangre
• Placas con Agar Mac Con Key
• Placas con Agar Sabouraud
• Placas con Agar Manitol Hipertónico
• Tubos con 9 mL de solución salina fisiológica
• Tubos de centrífuga estériles
• Matraz con Agar Nutritivo
• Placas Petri estériles
• Medios para pruebas metabólicas bioquímicas TSI, LIA, VP-RM, Citrato, Indol,
Úrea, etc.
• Reactivo para la Prueba de Catalasa: agua oxigenada (H2O2) y Prueba de Coagulasa.
• Pipetas
• Portaobjetos y cubreobjetos, etc.

Procedimiento:
EXAMEN MICROCOPICO
• Encender el mechero y tener los materiales en el área de trabajo, estando
debidamente protegido
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• Centrifugar unos 6 mL de orina y coloque una gota del sedimento entre lámina y
laminilla y observe al microscopio a menor y mayor aumento, la presencia de
hematíes, leucocitos, células epiteliales, cilindros, cristales, etc.
• Realice con el asa bacteriológica un frotis del sedimento y colorearlo por el método
de Gram. Observe el preparado con el objetivo de inmersión.

UROCULTIVO
• Realizar la siembra por estrías y agotamiento en los medios Agar Sangre, Mac Con
Key, Sabouraud y Manitol Hipertónico directamente de la muestra original
• Llevar a incubación a 37ºC por 18 – 24 hr los medios de cultivo sembrado
(Urocultivo Cualitativo)
• Realice diluciones de la orina hasta 10-3 y deposite 1 mL de cada una de las
diluciones por el método de incorporación e incube a 37ºC por 24 hr. (Urocultivo
Cuantitativo)
• Luego del periodo de incubación realizar la lectura e interpretación del crecimiento
en los medios de cultivo y realizar coloración Gram de las colonias diferentes; realice
el recuento de ufc/mL del paso previo y pruebas complementarias como pruebas
bioquímicas, prueba de Catalasa, Coagulasa en el Agar Mac Con Key, Sangre y
Manitol Hipertónico, verifique las características de las colonias que desarrollan en el
Agar Sabouraud mediante un preparado directo con azul de lactofenol.

LECTURA E INTERPRETACIÓN
1. Observar el desarrollo de las colonias bacterianas en Agar Mac Con Key y en el Agar
Sangre. Seleccione colonias en Mac Con Key y replique en los medios de
diferenciación bioquímica (TSI, LIA, Citrato Simona, caldo peptonado, urea, VP-
RM, etc.). Si se apreciara desarrollo de Staphylococcus aureus realice la prueba de
coagulasa.
2. En urocultivo cuantitativo elegir una placa donde se puede realizar el recuento del
número de colonias y luego multiplicarlo por la dilución y el resultado será el número
de unidades formadoras de colonias por mL de orina teniendo en cuenta que:

UROCULTIVO NEGATIVO: menos de 10 000 ufc/mL de orina (contaminación)

UROCULTIVO DUDOSO: entre 10 000 y 100 000 ufc/mL de orina (repetir)
UROCULTIVO PATOLÓGICO: más de 100 000 ufc/mL de orina (infección)

Resultados:
Registre los resultados de lo observado:
EXAMEN MICROSCOPICO
SEDIMENTO MUESTRA
Hematíes
Leucocitos
Células epiteliales
Cilindros
Cristales
otros
GRAM
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UROCULTIVO MUESTRA
AISLAMIENTO
Agar Mac Con Key
Agar Sangre
Agar Sabouraud
Agar Manitol Hipertónico
IDENTIFICACIÓN
TSI
LIA
Caldo Peptonado
Citrato
RM
VP
Úrea
Otros: catalasa, coagulasa
GRAM
Haga la representación gráfica de lo observado.

Cuestionario:
1. ¿En que porcentaje aproximado las enterobacterias producen infecciones urinarias?
2. ¿Hay hongos y virus que causan infecciones en el sistema genitourinario?. Si es así
mencione algunos de ellos.