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Unidad de Estudios de Chlamydia y Otras Infecciones del Tracto Genital

Manual de procedimientos
Recoleccin de muestras de orina de primera miccin para la deteccin de Chlamydia
trachomatis por tcnicas de amplificacin gnica (PCR y REAL TIME PCR).

Definicin
Una muestra de orina de primera miccin es el resultado de la recoleccin de la primera fraccin
(de muy poco volumen) del chorro de orina en un contenedor estril.
No comparte las caractersticas de recoleccin con la muestra tpica de chorro medio para
urocultivo.

Caractersitcas de la recoleccin
La muestra ideal es la obtenida en la primera miccin de la maana. En caso de no ser posible, la
retencin urinaria mnima para la recoleccin de la muestra es de tres horas.
NO se deben higienizar los genitales antes de la obtencin de la muestra, ni realizar
tamponamiento vaginal.
NO se debe descartar el primer chorro, como en los casos de muestra para urocultivo.
El volumen de la muestra de orina de primera miccin no debe superar los diez mililitros totales.
(altura mxima en el contenedor como se muestra en la figura).
NO ES VALIDO colocar ms volumen de orina en el contenedor y luego descartar el sobrante para
dejar el volumen solicitado de muestra.

OBSERVACIONES: En caso de requerirse al mismo tiempo una muestra de orina para urocultivo,
sta muestra debe tomarse LUEGO de obtenida la muestra de primera miccin.

Requisitos del paciente


No debe estar bajo tratamiento antibitico al momento de la obtencin de la muestra, ni al
menos hasta tres semanas antes.
Debe tener una retencin urinaria mnima de tres horas.
No es necesario que se encuentre en ayunas al momento de obtener la muestra.

Conservacin y pre-procesamiento de la muestra


1. La muestra ser pre-procesada en la institucin donde fue recibida, debe conservarse
refrigerada (4C) hasta la realizacin del procedimiento, el cual debe tener lugar en el da
de recibida la muestra.
NOTA: En caso de no poder realizar ninguno de los pasos enumerados a continuacin
como pre-procesamiento de las muestras, trasvasar el total de la muestra a un tubo cnico
de 15ml y conservar en freezer a -20C. Remitir al centro de procesamiento dentro de los
5 das hbiles de obtenida la muestra
2. Pre-procesamiento de las muestras:

a) Extraccin de ADN mediante equipos comerciales


1.- Seguir las instrucciones del fabricante
2.- conservar a -20C hasta remitir al centro de procesamiento.

b) Extraccin de ADN mediante sistema in house


1.- En el da de recepcin de las muestras, debe centrifugarse todo el volumen durante 5
minutos a 3500rpm y luego descartarse el sobrenadante.
2.- Agregar 5ml de solucin fisiolgica o buffer PBS y agitar en vortex unos segundos.
3.- Repetir el centrifugado de 5 minutos a 3500rpm y descartar nuevamente el
sobrenadante.
4.- Agregar 1ml de buffer PBS, transferir a un tubo tipo eppendorf o con tapa a rosca.
NOTA: En caso de imposibilidad de continuar con la extraccin segn se enumera
a continuacin, conservar a -20C hasta remitir al centro de procesamiento, con
la aclaracin de hasta qu paso de la extraccin fue realizado.
5.- En caso de completar el procedimiento de extraccin, congelar a -20C el tubo con la
muestra con el PBS agregado. Luego descongelar, agitar en vortex unos segundos, y
centrifugar a 11000 rpm durante 3 min.
6.- Descartar el sobrenadante y agregar 100ul de buffer TRIS o PBS. Agitar en vortex y
luego hervir a bao mara durante 10min.
7.- Enfriar rpidamente a -20C, durante 2 o 3 min.
8.- centrifugar a 11000 rpm durante 3 min.
9.- tomar el sobrenadante y transferirlo a un tubo tipo eppendorf o con tapa a rosca.
Conservar a -20C hasta remitirlo al centro de procesamiento.

Listado de materiales e insumos para procesamiento y conservacin de muestras de orina de


primer chorro
Infraestructura:

Heladera (Temp: 0C a 4C)


Freezer "comn" (Temp: -18C/-20C)
Centrfuga para tubos cnicos de 15 ml (Velocidad requerida: hasta 3500 rpm)
Centrfuga para tubos tipo Eppendorf (Velocidad requerida: hasta 11000 rpm)
Micropipetas con volumen 20 a 200 ul.
Pipetas pasteur o de vidrio
Agitador tipo vortex.
Bao termostatizado o mechero como para hervir a bao mara.

INSUMOS:

Tubos cnicos de 15ml con tapa a rosca


Tubos tipo Eppendorf de 1,5ml
Solucin fisiolgica o buffer PBS
Equipo comercial para extraccin de ADN (opcional)
Tips para micropipetas 20-200ul.
gradilla o criocaja para conservacin final de las muestras.

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