INMUNOFLORESCENCIA: La Inmunofluorescencia es una técnica de biología molecular que

consiste en incubar una muestra con un anticuerpo que detecte la molécula o componente que
queramos detectar. Dicho anticuerpo lleva unida una molécula fluorescente
(inmunofluorescencia directa) o bien es reconocido por un segundo anticuerpo marcado
fluorescentemente (inmunofluorescencia indirecta). (Lamparkie, 2010)

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA: Esta técnica requiere sólo 2-4hs, y se ha reportado una

sensibilidad del 70-80 %. Se puede utilizar para una identificación rápida del virus directamente
sobre la muestra, o se la puede emplear para la confirmación del efecto citopático observado
en cultivos celulares. (Sandin, 2007) (Lamparkie, 2010)

El principio básico consiste en recolectar muestras clínicas apropiadas y colocarlas sobre

portaobjetos donde se dejan secar y fijar. Luego se agregan anticuerpos específicos marcados
con isotiocianato de fluoresceína que difunden a través de la membrana celular y se combinan
con los antígenos víricos en el interior de las células. La reacción antígeno anticuerpo se visualiza
con el microscopio de fluorescencia, por la aparición de fluorescencia de color verde manzana.
(Sandin, 2007)

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: Es un método rápido y confiable. Se basa en la unión de

anticuerpos antivirales presentes en el suero del paciente a los antígenos virales expresados en
la superficie y citoplasma de células infectadas, que han sido fijadas a un portaobjeto de vidrio.
Como control de especificidad se usan células no infectadas. (Sandin, 2007) (Lamparkie, 2010)

El principio básico consiste en incubar el suero del paciente con las células infectadas y no
infectadas. Luego se realiza un lavado con PBS (Buffer Fosfato Salino) y se agrega posteriormente
anticuerpo anti IgG humana conjugada con isotiocianato de fluoresceína. El isotiocianato de
fluoresceína es una sustancia que se vuelve fluorescente a la exposición de la luz ultravioleta y
emite una luz verde característica. El conjugado se unirá a los anticuerpos del paciente si la
reacción es positiva, leyéndose la prueba en un microscopio de fluorescencia. (Sandin, 2007)

AGLUTINACIÓN: Es un método simple, de un solo paso, que a veces se usa para la detección de
antígenos virales en muestras clínicas. Los ensayos de aglutinación, dependen de la fijación
inicial de anticuerpos antivirales específicos sobre eritrocitos o partículas de látex. Luego este
reactivo se incuba con la muestra clínica en la cual se investiga el antígeno y las partículas se
aglutinan si el antígeno adecuado se encuentra presente (Sandin, 2007)

El test de aglutinación ha sido usado para detectar antígeno de Rotavirus en heces mostrando
una buena sensibilidad cuando se lo compara con el EIA para Rotavirus. Además, es una técnica
rápida y barata. También se la ha usado para detectar antígenos de Adenovirus. (Sandin, 2007)