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Resumen
La amiloidosis se diagnosticó en 26 leones marinos adultos de California varados entre 1983 y 2006 por
retrospectiva analisis de CASO. Los riñones (92.3% de los animales), los vasos sanguíneos (80.7%) y las
glándulas tiroides (65.4%) fueron los más afectados.
comúnmente afectado Macroscópicamente, los riñones afectados estaban inflamados, con cortezas de color
canela pálido y pérdida de la diferenciación corticomedular. Los depósitos de amiloide en el riñón estaban
localizados en los glomérulos, vasos sanguíneos e intersticio peritubular, principalmente en la franja externa
de la médula. Se identificaron los depósitos de amiloide.
como tipo amiloide A (AA) por tinción con permanganato de potasio e inmunomarcaje con anticuerpos contra
Proteína AA. Las enfermedades concurrentes, incluidos los procesos inflamatorios y el carcinoma genital,
fueron comunes en animales afectados Las concentraciones séricas de amiloide A fueron altas (> 1200 mg /
ml) en seis de los siete leones marinos afectados,
mientras que el valor medio en animales clínicamente sanos fue <10 mg / ml. Estos hallazgos sugieren que la
amiloidosis renal contribuye a la morbilidad y la mortalidad en los leones marinos de California adultos
varados.
Introducción
El término amiloidosis se refiere a un grupo de enfermedades.
Se caracteriza por la deposición extracelular de anomalías o plegado incorrectamente, proteína fibrilar en
diversos tejidos. Depósitos de amiloide, que aparecen como amorfos.
El material hialino en secciones teñidas con hematoxilina y eosina (HE) muestra una afinidad por el rojo
Congo y exhiben característicos birrefringencia verde manzana.
bajo luz polarizada después de la tinción con rojo Congo. Ultraestructuralmente, el amiloide está compuesto
de ramas no ramificadas.
Fibrillas que van desde 5.7 hasta 10 nm de diámetro. radiografía
Espectáculo de cristalografía y espectroscopia infrarroja.
Que las fibrillas estén dispuestas en láminas cruzadas.
(DiBartola y Benson, 1989; Abbas 2005).
El amiloide se puede clasificar en función de sus fibrillas químicas constituyentes (por ejemplo, AL, AA, Ab),
su patrón de distribución (sistémico frente a localizado), o su asociación con
Otras enfermedades (primaria vs secundaria) (Merlini y Bellotti, 2003). Las formas familiares de amiloidosis
han sido descritos en los perros Shar Pei y los gatos abisinios (Boyce
et al., 1984; DiBartola y Benson, 1989). La amiloidosis sistémica reactiva (amiloidosis "secundaria") se
asocia con enfermedades inflamatorias crónicas, infecciones,
o algunas formas de cáncer. Resultados de amiloidosis secundaria
a partir de la deposición tisular de un fragmento N-terminal de proteína amiloide A sérica (SAA). El suero
amiloide A es un Apolipoproteína reactiva de fase aguda sintetizada por hepatocitos y células histiocíticas
bajo la influencia de citoquinas inflamatorias como la interleucina (IL) -1, IL-6.
y el factor de necrosis tumoral a (DiBartola y Benson, 1989; O’Hara et al., 2000). Altas concentraciones de
SAA, consistente con una respuesta de proteína de fase aguda,
Se han reportado en seres humanos y animales. con inflamación sistémica
La amiloidosis AA ha sido reportada en una serie de Especies de animales domésticos y silvestres, incluyendo
lácteos. vacas, guepardos (Acinonyx jubatus), tigres siberianos (Panthera tigris altaica), gacelas dorcas
(Gazella dorcas) y monos rhesus (Macaca mulatta) (Johnson y Jamison, 1984; Blanchard et al., 1986; Maneja
afuera et al., 1989; Papendick et al., 1997; Schulze et al. 1998). En especies de mamíferos marinos la
amiloidosis ha Anteriormente ha sido reportado sólo en delfines mulares.
(Tursiops truncatus) y las ballenas picudas de Stejnerger
(Mesoplodon stejnegeri) (Cowan, 1995; Tajima et al.,
2007). Los objetivos de la presente investigación fueron
(1) para describir las características patológicas de la amiloidosis en leones marinos varados de California
(Zalophus californianus), (2) para determinar la composición química de los depósitos de amiloide, y (3) para
identificar cualquier Condiciones predisponentes asociadas al amiloide. declaración.
Materiales y métodos
Los animales
Se identificaron veintiséis casos de amiloidosis mediante examen retrospectivo de tejidos fijados con
formalina o portaobjetos histológicos de 712 leones marinos de California (364 de
animales adultos), sometidos a necropsia entre 1983 y 2006. No se identificaron casos antes
1993. Uno de los 26 animales con amiloidosis se incluyó en una investigación previa sobre el carcinoma
metastásico de león marino (Gulland et al., 1996b). Caso
el material fue recolectado de los archivos del Servicio de Patología del Hospital de Enseñanza Médica
Veterinaria,
Universidad de California, Davis. Todos los leones marinos tenían
sido varado vivo a lo largo de la costa central de California
(37 420
N, 123 050
De 35 a 590
N, 121 300
W) y
Transportado al Centro de Mamíferos Marinos.
(TMMC), Sausalito, California, un centro de rehabilitación. Todos los animales eran adultos, según lo
determinado por la longitud estándar, el tamaño del diente, los anillos de crecimiento de dentina dental
(Oosthuizen et al., 1998), y etapa de desarrollo de la cresta sagital. Había 24 hembras y dos machos.
La información clínica se obtuvo de los registros médicos de TMMC.
Patología
Se realizó un examen post mortem en todos los animales. Las muestras de tejido seleccionadas se
fijaron por inmersión en formalina tamponada neutra al 10%. Los tejidos eran Procesado por
métodos rutinarios, seccionado a 4e6 mm. y teñidas con hematoxilina y eosina (HE) o Rojo Congo
(CR). Se vieron todas las secciones teñidas con CR bajo luz polarizada cruzada. Secciones de 10
afectados. Los animales fueron tratados con permanganato de potasio. 2,5% en 0,15% de ácido
sulfúrico y luego con 2% de ácido oxálico antes de teñir con CR (Wright et al., 1977). La cantidad
de depósito de amiloide en el riñón se clasificó subjetivamente como leve (+), moderada (++), o
grave (+++).
Inmunohistoquímica (IHC)
Esto se realizó en secciones (4 mm) de riñón incrustado con cera de parafina infiltrada (n ¼ 3) e hígado
(n ¼ 1). Después de desparafinar, las diapositivas fueron bloqueadas con
Suero normal de cabra al 10% durante 30 minutos, drenado e incubado con una dilución de 1 en 100 del ratón
primario.
Anticuerpo monoclonal anti-amiloide A (CM 125; Biocare Medical, Concord, CA, EE. UU.) en una cámara
húmeda durante la noche a 4ºC. Los portaobjetos se enjuagaron con
Solución salina tamponada con fosfato (PBS) e incubada con
un reactivo biotinilado anti-enlace de ratón (Biocare Medical) durante 10 min. Luego se enjuagaron
nuevamente con
PBS e incubado con estreptavidina peroxidasa de rábano picante (Biocare Medical) durante 10 min. El
etiquetado positivo se "visualizó" con 3-amino-9-etilcarbazol
(AEC) cromógeno (Zymed Laboratories, San Francisco, CA, EE. UU.). Se prepararon controles negativos.
Sustituyendo el anticuerpo primario con mieloma de ratón IgG. Una sección de macaco rhesus (M. mulatta)
El bazo con depósitos de amiloide A se usó como positivo
controlar.
IHC para Leptospira spp. se realizó en riñón
secciones de 13 animales, como las anteriores pero con un anticuerpo policlonal específico de Leptospira
(Laboratorio de Servicios Veterinarios Nacionales, Ames, Iowa) dirigido
contra L. interrogans serovars bratislava, canicola,
hardjo, icterohaemorrhagiae y pomona, y L.
kirschneri grippotyphosa.
Resultados
Hallazgos clínicos
Dentro de los 3 días de encallamiento, 21 de los 26 leones marinos con
La amiloidosis murió o fue asesinada humanamente, debido a una enfermedad clínica grave y un mal
pronóstico. El tiempo de rehabilitación varió de 7 a 30 días para el resto.
cinco animales Los signos clínicos en los lobos marinos afectados fueron
Generalmente no específico e incluyó letargo severo,
Depresión, deshidratación y anorexia. Adicionalmente,
Algunos animales presentaron paresia posterior, perineal.
Odema y dolor abdominal, signos que sugieren cáncer metastásico (Gulland et al., 1996b). Ante mortem
Las muestras de sangre obtenidas de 10 de los 26 animales revelaron hipoalbuminemia en todos ellos,
panhipoproteinemia en dos e hiperglobulinemia leve en
dos; ocho animales tenían valores bioquímicos en suero indicativos de enfermedad renal, incluido el aumento
de las concentraciones de nitrógeno ureico en sangre (8/8), creatinina (6/8),
y fósforo (7/8) (Bossart et al., 2001). Un hemograma completo (CBC) en siete de los 10 animales reveló
leucocitosis y neutrofilia en cinco, y
Leucopenia con un giro a la izquierda en dos.
Lesiones macroscópicas
Veintitrés de los 26 leones marinos afectados tenían riñones anormales. Estas se agrandaron e hincharon, y
En la sección cortada las cortezas aparecían pálidas de color canela.
y finamente corrugado. Había pérdida de renicular y
diferenciación corticomedular, y ocasional
Los quistes, de 0,1 cm a 1,0 cm de diámetro, se dispersaron irregularmente en la corteza (Fig. 1). Trece
animales habian
carcinoma genital metastásico, con lesiones similares a
los descritos anteriormente (Gulland et al., 1996b;
Lipscomb et al., 2000).
Fig. 1. Riñón de un león marino de California con amiloidosis. Nota
las cortezas difusamente pálidas y corrugadas, la pérdida de la distinción corticomedular y renicular, y los
quistes dispersos en el
parénquima. Barra, 2 cm.
Histopatología
Los depósitos de amiloide de diferentes grados de severidad fueron
Presente en diversos sitios renales en 24 de los 26 afectados.
Leones marinos (tabla 1). En 12 de estos 24 animales, los riñones mostraron una banda gruesa de amiloide en
el intersticio peritubular de la médula externa, adyacente a
La unión corticomedular (fig. 2). En las secciones conservadas, el amiloide apareció como material
extracelular homogéneo, eosinófilo pálido.
(Fig. 3). En cortes teñidos con CR, apareció amiloide.
Rojo pálido y con característico birrefringencia verde manzana bajo luz polarizada cruzada (Fig. 2).
Pretratamiento con permanganato de potasio abolido.
Tinción CR, lo que sugiere que las fibrillas amiloides
fueron de tipo AA (Wright et al., 1977). Los túbulos adyacentes a los depósitos de amiloide se atrofiaron de
forma variable,
ectáticos o quísticos, y ocasionalmente se les deniega
epitelio. Los depósitos de amiloide dentro de los glomérulos consistían en depósitos segmentarios o nodulares
en expansión
El mesangio y las membranas basales capilares.
(Fig. 4). Glomeruloesclerosis tubular proteica.
cilindros, fibrosis intersticial y linfoplasmocíticos
nefritis intersticial concurrentemente presente en
riñones afectados.
Veintitrés de los 26 leones marinos afectados mostraron un depósito de amiloide extra-renal con la siguiente
distribución: arteriolas de tamaño pequeño y mediano (21
animales), la glándula tiroides (17), el hígado (3), las glándulas de Bartholin vaginales (2), el bazo (1) y las
enfermedades gástricas e intestinales.
Mucosa (3 de los 23 animales examinados). Los afectados
Las arteriolas estaban localizadas en el bazo (12 animales),
cerebro (10), páncreas (9), glándula suprarrenal (6), corazón
(6), pared del tracto gastrointestinal (6), amígdala (3),
tracto genital (3) y vesícula biliar (2), y ocasionalmente en la tráquea, la lengua y la glándula pituitaria (en
cada caso, en uno de los 23 animales examinados). En
El cerebro, las arteriolas en el plexo coroideo y el hipocampo fueron los más afectados. En la tiroides
glándula, grandes depósitos de amiloide estaban presentes en el
intersticio que separa los folículos tiroideos. Folículos
fueron encogidos o colapsados de forma variable. La amiloidosis hepática se caracterizó por depósitos dentro
de la
Espacio de Disse, principalmente en la región media zonal. En
Áreas severamente afectadas, los cordones hepáticos fueron comprimidos.
y atrofiado. En tres casos, mural gástrico vascular.
Los depósitos de amiloide estaban localizados en áreas de úlceras asociadas a parásitos. En un león marino,
deposición de amiloide.
Estaba restringido a los vasos sanguíneos adyacentes a una región.
de la balanopostitis severa.
Fig. 2. Depósito de amiloide marcado en la médula externa del riñón adyacente a la unión corticomedular.
Congo rojo.
Barra, 1 mm.
Inmunohistoquimica
El inmunomarcaje se realizó en tres casos de amiloidosis renal y un caso de amiloidosis hepática.
En todos los casos, los depósitos de amiloide exhibieron moderada.
Etiquetado rojo marrón con anticuerpos contra el amiloide.
A (Fig. 5)
Enfermedades asociadas
Las enfermedades inflamatorias crónicas, a menudo múltiples, fueron
comunes en los leones marinos con amiloidosis (tabla 2),
como lo son en la mayoría de los leones marinos varados. Trece
(50%) de los 26 leones marinos tuvieron metástasis concurrentes
carcinoma, típico de carcinoma metastásico endémico
en los leones marinos de California (Gulland et al., 1996b), recientemente
determinado de origen genital (Lipscomb et al.,
2000). Todos los animales con carcinoma genital eran hembras. Tumores originados en la vagina o cérvix.
y metástasis estaban presentes en varios sitios que incluían ganglios linfáticos regionales, y abdomen
y vísceras torácicas. En el epitelio genital afectado estaba presente una inflamación linfocítica intensa.
Las metástasis tumorales a menudo contenían áreas del centro Necrosis e inflamación
generalizada. Multifocal inflamación linfoplasmocitaria estaba presente en algunos riñones
afectados; sin embargo, el inmunomarcaje Leptospirosis demostrada en solo uno de los
13 leones marinos. Con amiloidosis y linfoplasmocítica concurrente. Nefritis intersticial. Se
observó hiperplasia cortical suprarrenal leve a moderada en 13 (50%) de 26 afectados
Leones marinos.
Discusión
En este estudio, el 7% de los adultos viven lobos marinos varados.
Tenía depósitos de amiloide en uno o más tejidos. Aunque los mamíferos marinos varados representan un
sesgo
muestra de la población de vida libre y la prevalencia de enfermedades no es la misma que en toda la
población, este estudio sugiere que la amiloidosis puede
Contribuye a la morbilidad y mortalidad en leones marinos adultos de California. En vista de la frecuente
participación.
De los riñones, la amiloidosis debe considerarse en
El diagnóstico diferencial de la enfermedad renal en adultos.
Leones marinos, especialmente en animales con hipoalbuminemia concurrente.
Las técnicas inmunohistoquímicas e histoquímicas revelaron que los depósitos de amiloide eran
formado a partir de proteína derivada de SAA y podría clasificarse como amiloide AA. La amiloidosis AA
reactiva sistémica suele ser secundaria a una inflamación sistémica o
neoplasia, o ambas, y la mayoría de los leones marinos afectados
Tenía enfermedades inflamatorias concurrentes. El más frecuente de estos fue el carcinoma genital
metastásico,
que es una causa común de mortalidad en personas mayores
león marino de California varado, que afecta aproximadamente
18% de tales animales. A menudo hay una inflamación severa en el tejido adyacente y dentro de los tumores,
y
infección bacteriana secundaria es común (Gulland
et al., 1996b; Lipscomb et al., 2000). Genital del león marino
los carcinomas se han asociado con un gammaherpesvirus (otarine herpesvirus-1 [OtHV-1]), y
ocasionalmente se pueden encontrar inclusiones virales intranucleares
en el epitelio neoplásico (Lipscomb et al., 2000;
King et al., 2002). Se ha informado deposición de amiloide asociada a tumor en carcinomas de células
escamosas
del cuello uterino y la vagina humana, que están asociadas
con infección por el virus del papiloma humano (VPH) (Hsueh
y Kuo, 1986; Tsang y Chan, 1993). Localizado
La deposición de amiloide también se ha observado en carcinomas nasofaríngeos humanos, que están
asociados con
un gammaherpesvirus, Epstein Barr-virus (Prathap
et al., 1984). Las concentraciones de SAA a veces aumentan en pacientes con esta enfermedad (Cho, 2007).
Solo una de las mujeres leones marinos con carcinoma genital concurrente tenía depósito de amiloide en el
tracto genital. Estos depósitos se ubicaron en pequeñas arteriolas submucosas adyacentes al epitelio afectado;
amiloide
Nunca fue localizado dentro del intersticio del tumor, en
En contraste con los carcinomas genitales productores de amiloide en
Las mujeres y los carcinomas nasofaríngeos. Las lesiones inflamatorias secundarias en los leones marinos con
carcinoma genital pueden haber representado el amiloide.
declaración. La relación potencial entre la infección por herpesvirus y la amiloidosis no está clara. La
leptospirosis es una causa frecuente de nefritis intersticial en
Leones marinos libres y estos animales son sospechosos
para ser crónicos shedders de la bacteria (Gulland
et al., 1996a); Sin embargo, la inflamación intersticial renal.
no se debió generalmente a la infección por leptospiras. Muchos de
las otras enfermedades inflamatorias concurrentes identificadas, tales como colecistitis, gastritis y
enterocolitis,
son hallazgos comunes en los leones marinos salvajes y suelen ser
Asociado al parasitismo (Diario, 2001). Tales condiciones inflamatorias, aunque generalmente se consideran
clínicamente insignificante en el mar varado de California
Los leones, en teoría, podrían causar la liberación de citoquinas amiloidogénicas.