Prueba o pruebas bioquímicas: Utilización del citrato

Nombre del medio utilizado: Agar Citrato de Simmons

Sustrato: Citrato

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

pH ácido pH alcalino
2 piruvato → Acetato + CO2 + lactato Piruvato → Acetato + formato
2piruvato → Acetoína + 2CO2
Reactivo revelador o indicador: Azul de bromotimol
Condiciones de inoculación: Estria recta

Condiciones de incubación:
En aerobiosis, a 35-37°C durante 24-48 horas.
Algunos microorganismos pueden requerir una incubación prolongada (hasta 7 días).
Resultado positivo y negativo:
(+): Crecimiento bacteriano con un intenso color azul.
( ̶ ): Ausencia de crecimiento y permanencia de color verde del medio de cultivo.
Prueba o pruebas bioquímicas: Hidrólisis de la gelatina

Nombre del medio utilizado: Gelatina nutritiva

Sustrato: Grenetina

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

Gelatinasas
(1) Gelatina + H2O Proteinasas Polipéptidos
Gelatinasas
(2) Polipéptidos + H2O Proteinasas Aminoácidos individuales

Reactivo revelador o indicador: Estado de agregación del medio

Condiciones de inoculación: Siembra por picadura

Condiciones de incubación: 24-48 h a 37 °C

Resultado positivo y negativo:

(+): Licuefacción del medio.

( ̶ ): Medio permanece sólido.
Prueba o pruebas bioquímicas: Uso de glucosa, lactosa, producción de sulfhídrico

Nombre del medio utilizado: Agar Kligler

Sustrato: Glucosa 1%, lactosa 0.1% y tiosulfato de sodio o grupos –SH de la cisteína.

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

β - Galactosidasa
Lactosa Glucosa + Galactosa
Ciclo de Krebs CO2 + H2O + energía
Glucosa o Galactosa
aerobio

Tiosulfato reductasa H2S gaseoso + iones férricos Sulfuro ferroso↓

Tiosulfato de sodio

2+
Reactivo revelador o indicador: Rojo de fenol y sales de Fe
Condiciones de inoculación: Estria recta y Picadura en fondo
Condiciones de incubación: En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 hrs.
Resultado positivo y negativo:

 Glucosa positiva: color rojo en pico de flauta y color amarillo en el fondo, si se produce H 2S el precipitado negro
puede enmascarar la acidez; se registra como condición ácida.
 Glucosa y lactosa positivos: en pico de flauta y en el fondo presencia de color amarillo.
 No hay fermentación de glucosa ni de lactosa: sin cambio de color -(naranja-rojizo).
 Producción de gas: burbujas, fragmentación o desprendimiento del medio.
 Producción de H2S: precipitado negro en alguna parte del tubo.
Prueba o pruebas bioquímicas: Degradación de fenilalanina
Nombre del medio utilizado: Agar fenilalanina
Sustrato: Fenilalanina
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
-2H Ácido fenilpirúvico + NH3
Fenilalanina + ½ O2 flavoproteína

Reactivo revelador o indicador:

Cloruro férrico o Sulfato de amonio férrico con rojo de fenol

Condiciones de inoculación:
Estria recta
Condiciones de incubación:
En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 h.
Resultado positivo y negativo:
(+): Medio color verde pálido a intenso.
( ̶ ):Medio sin cambios de coloración (permanece amarillo por el cloruro férrico).
Prueba o pruebas bioquímicas: Reducción de nitratos

Nombre del medio utilizado: Caldo nitrato con campana

Sustrato: Nitrato de sodio

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

NO3- + 2e- + 2H+ → NO2- + H2O

2NO3- + 10e- + 2H+ → N2 + 6H2O

Reactivo revelador o indicador: Reactivos de Griess

Condiciones de inoculación: Suspensión

Condiciones de incubación: 37°C durante 24 horas

Resultado positivo y negativo:

Producción de gas: Fase 1: Al agregar reactivos de Griess
(+)Presencia de gas en la campana. (+)Coloración rosa a rojo en 1-2 min
(-)Ausencia de gas. (-)Falta de desarrollo de color

Fase 2: Al agregar Zn
(+)Ausencia de desarrollo de color
(-)Coloración rosa a rojo en 5-10 min
 Prueba o pruebas bioquímicas: Utilización de carbohidratos
Nombre del medio utilizado: Caldo Rojo de fenol + Sacarosa con campana
Sustrato: Sacarosa
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
Rojo de fenol + Sacarosa CO2 + H2 + aldehídos + cambio de color
Glucólisis, etc.
Reactivo revelador o indicador:
Rojo de fenol

Condiciones de inoculación: Suspensión

Condiciones de incubación: 37°C durante 24 horas

Resultado positivo y negativo:

(+): Medio vira a color amarillo con producción de gas variable (una sola burbuja es significativa)
Tardío: Color anaranjado, comparar con un tubo no inoculado y reincubar.
( ̶ ): Color rosa-rojizo; ausencia de burbujas de gas.
Prueba o pruebas bioquímicas: Utilización de carbohidratos
Nombre del medio utilizado: Caldo rojo de fenol + manitol con campana
Sustrato: Manitol

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

Rojo de fenol + manitol CO2 + H2 + aldehídos + cambio de color
Glucólisis, etc.

Reactivo revelador o indicador: Rojo de fenol

Condiciones de inoculación: Suspensión

Condiciones de incubación: 37°C durante 24 horas

Resultado positivo y negativo:

(+): Medio vira a color amarillo con producción de gas variable (una sola burbuja es significativa)
Tardío: Color anaranjado, comparar con un tubo no inoculado y reincubar.
( ̶ ): Color rosa-rojizo; ausencia de burbujas de gas.
Prueba o pruebas bioquímicas: Producción de indol

Nombre del medio utilizado: Caldo Triptona

Sustrato: Triptófano

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

L-Triptófano Triptofanasa Indol

Reactivo revelador o indicador:

Reactivo de Kovacs (p-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA), alcohol isoamílico y HCl).
Condiciones de inoculación:
Suspensión
Condiciones de incubación:
35°C-37°C durante 24-48h
Resultado positivo y negativo:
(+): Anillo rojo en la superficie del medio.
( ̶ ): No se produce color/color naranja en la superficie del medio.
Prueba o pruebas bioquímicas: Producción de sulfhídrico, producción de indol y movilidad
Nombre del medio utilizado: Medio SIM
Sustrato: Tiosulfato o grupos –SH de la cisteína y triptófano. Peptonas.
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
Cisteína H2S / H2S + iones férricos → Sulfuro ferroso ↓ (negro e insoluble)
Cisteína desulfurilasa

L-Triptófano Indol
Triptofanasa

p-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA) + Indol HCl Color rojo/violeta

Reactivo revelador o indicador: alcohol
2+
Sales de Fe y p-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA).
Condiciones de inoculación: Picadura
Condiciones de incubación: 37°C durante 24h (motilidad), y 48h H2S e Indol.
Resultado positivo y negativo:
Ácido sulfúrico Indol Movilidad
Positivo(+): Ennegrecimiento Positivo(+): Anillo rojo en la Positivo(+): Presencia de
del medio por formación de un superficie del medio turbiedad
precipitado Negativo(-): No se produce Negativo(-): Crecimiento
Negativo(-): Sin color/color naranja en la siguiendo la línea de
ennegrecimiento superficie del medio siembra
Prueba o pruebas bioquímicas: Respiración aerobia y anaerobia

Nombre del medio utilizado: Medio de Hugh y Leifson + glucosa

Sustrato: Carbohidratos y peptona de caseína

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

Glucosa Ácido glucónico Gluconato Ácido2-ceto-glucónico
Glucosa Cinasa Ácido 2-ceto-
deshidrogenasa dehidratasa

6-fosfoglucónico (KDPG) >2 ácido pirúvico

𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠 𝐸𝐷

Reactivo revelador o indicador: Azul de bromotimol u otro indicador ácido/base

Condiciones de inoculación: Suspensión
Condiciones de incubación: 37°C durante 24 horas
Resultado positivo y negativo:
Tubo abierto Tubo sellado
 Oxidación: amarillo (+)  Oxidación: verde (-)
 Fermentación: amarillo (-)  Fermentación: amarillo
 Ninguna: azul o verde  Ninguna: verde
 Ambas: amarillo  Ambas: amarillo
Prueba o pruebas bioquímicas: Producción de ácidos orgánicos
Nombre del medio utilizado: Caldo RM/VP
Sustrato: Glucosa

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

2 Glucosa + H2O → ácido láctico + ácido acético + etanol + 2CO2 + 2H2 + ácido succínico + ácido fórmico

3 Glucosa + ½ O2 → 2,3-butanodiol + H2O + 2CO2 (acetoína<-> 2,3- butanodiol)

Reactivo revelador o indicador: Rojo de metilo
Condiciones de inoculación: Suspensión
Condiciones de incubación: En aerobiosis, a 35-37°C durante 48 a 72 hrs.
Resultado positivo y negativo:
(+): Distintivo color rojo brillante en la superficie del medio.
( ̶ ): Color amarillo.
Prueba o pruebas bioquímicas: Producción de acetoína
Nombre del medio utilizado: Caldo RM/VP
Sustrato: Glucosa y polipeptona
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
2,3-butanodiol
Glucosa-> piruvato-> 2,3-butanodiol Acetoína
deshidrogenasa

Reactivo revelador o indicador: Solución de Rojo de Metilo, Alfa Naftol y KOH 40%
Condiciones de inoculación: Suspensión
Condiciones de incubación: En aerobiosis, a 35-37°C durante 48 a 72 hrs.

Resultado positivo y negativo:

(+): Color rosado-rojo.
( ̶ ): Color amarillo.
Prueba o pruebas bioquímicas: Degradación de lisina
Nombre del medio utilizado: Descarboxilasa de Moeller + lisina
Sustrato: L- lisina
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

L- lisina 𝐶𝑂2
Cadaverina (diamina) + CO2
𝑙𝑖𝑠𝑖𝑛𝑎
𝑑𝑒𝑠𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑥𝑖𝑙𝑎𝑠𝑎

Reactivo revelador o indicador: Púrpura de bromocresol o rojo cresol

Condiciones de inoculación: Picadura con y sin aceite mineral estéril.

Condiciones de incubación: En aerobiosis a 35-37°C de 24 hasta 96 hrs

Resultado positivo y negativo:

(+): Color púrpura turbio a amarillo-púrpura apagado (cadaverina).

( ̶ ): Amarillo brillante, claro (sólo glucosa).

Prueba o pruebas bioquímicas: Ureasa
Nombre del medio utilizado: Caldo urea
Sustrato: Urea
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
Urea 2CO2 + NH4+
𝑢𝑟𝑒𝑎𝑠𝑎

Reactivo revelador o indicador: Rojo de fenol

Condiciones de inoculación:
Suspensión abundante

Condiciones de incubación:
En aerobiosis a 35-37°C durante 18-24h, pueden requerir hasta 72h.
Resultado positivo y negativo:
(+): Color rosa-rojo intenso en todo el caldo.

( ̶ ): Sin cambios de color (amarillo-naranja).

Prueba o pruebas bioquímicas: Ureasa y utilización de sacarosa
Nombre del medio utilizado: Caldo sacarosa-urea
Sustrato: Sacarosa y urea
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
Urea 2CO2 + NH4+
𝑢𝑟𝑒𝑎𝑠𝑎

Sacarosa ⇆ Glucosa + Fructosa CO2 + H2 + aldehídos + cambio de color

𝐻2𝑂/𝐻+ 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑙𝑖𝑠𝑖𝑠,
𝑒𝑡𝑐

Reactivo revelador o indicador: Rojo de fenol

Condiciones de inoculación: Suspensión

Condiciones de incubación: En aerobiosis a 35-37°C durante 18-24h, pueden requerir hasta 72 h.

Resultado positivo y negativo:

(+): Color rosa-rojo intenso en todo el caldo.
( ̶ ): Sin cambios de color (amarillo-naranja).
Prueba o pruebas bioquímicas: Hemólisis

Nombre del medio utilizado: Agar sangre

Sustrato: Hemoglobina

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

Lisis de glóbulos rojos para la obtención de Hierro
Reactivo revelador o indicador: Eritrocitos
Condiciones de inoculación: Estría recta sobre la superficie del medio de cultivo
Condiciones de incubación:
 Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis a 35-37°C hasta 48h
 Bacterias exigentes: en atmósfera con 5% de CO2 a 35-37°C durante24-48 h

Resultado positivo y negativo:

Positivo(+):
o Hemólisis total: Colonias rodeadas por un halo incoloro (hemólisis β para estreptococos)
o Hemólisis parcial: Colonias rodeadas de un halo color verdoso (hemólisis α para estreptococos)
Negativo(-):
o Sin hemólisis: No existe un halo alrededor de las colonias (hemólisis gamma en estreptococos)
Prueba o pruebas bioquímicas: Hidrólisis del almidón
Nombre del medio utilizado: Agar almidón
Sustrato: Almidón
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
Almidón (α- amilasa/H2O) → α- amilasa + amilopectina (α- amilasa/H2O) → dextrinas (α- amilasa/H2O)
→ acrodextrinas (α- amilasa/oligo-1.6-glucosidasa H2O) → α- maltosa (maltasa/ H2O) → α-glucosa
Reactivo revelador o indicador: Lugol
Condiciones de inoculación: Estría recta

Condiciones de incubación:
Durante 24-48 h a 37°C
Resultado positivo y negativo:
(+): En caldo, medio incoloro o con una ligera coloración amarilla debida al yodo en el caldo. En pico
de flauta medio de color púrpura/ azul con área incolora alrededor del crecimiento.
( ̶ ): En el caldo se presenta color azul, en pico de flauta medio color púrpura- azul en el crecimiento.
Prueba o pruebas bioquímicas: Desoxirribonucleasa
Nombre del medio utilizado: Agar DNA
Sustrato: DNA
Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:
DNA Nucleótidos (base-azúcar-fosfato) a.a. nucleósidos (base-azúcar) + Pi
𝐷𝑁𝑎𝑠𝑎𝑠 𝐷𝑁𝑎𝑠𝑎𝑠

Reactivo revelador o indicador: HCl 1N

Condiciones de inoculación:
Inóculo denso, ya sea en estría o por la técnica de spot.
Condiciones de incubación: En aerobiosis a 35-37°C durante 18-48h
Resultado positivo y negativo:
(+): Aclaramiento inmediato alrededor de la colonia y adyacente, una zona blanca nublada; sales
precipitadas en el medio.
( ̶ ): Ausencia de aclaramiento alrededor de la colonia y precipitado nebuloso alrededor de la colonia y a
lo largo del medio.
Prueba o pruebas bioquímicas: Hidrólisis de caseína

Nombre del medio utilizado: Agar leche descremada

Sustrato: Caseína

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

Caseína Aminoácidos
𝑐𝑎𝑠𝑒𝑖𝑛𝑎𝑠𝑎

Reactivo revelador o indicador: Caseína

Condiciones de inoculación: Estría recta

Condiciones de incubación: En aerobiosis a 35-37°C durante 18-24h

Resultado positivo y negativo:
(+): Desaparece el color blanco de la leche alrededor del crecimiento bacteriano.
( ̶ ): Permanece la coloración blanca.
Prueba o pruebas bioquímicas: Catalasa

Nombre del medio utilizado: Agar nutritivo

Sustrato: Peróxido de hidrógeno

Reacción de la(s) enzima(s) sobre el sustrato:

2H2O2 2H2O + O2↑
𝑐𝑎𝑡𝑎𝑙𝑎𝑠𝑎

Reactivo revelador o indicador: H2O2

Condiciones de inoculación: Estría recta

Condiciones de incubación:
24-48h a 37°C

Resultado positivo y negativo:

(+): Burbujeo inmediato, formación de O2.

( ̶ ): Ausencia de burbujas y de O2.