UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN CAMPO 1

​ BIOQUÍMICA DIAGNÓSTICA

MICROBIOLOGÍA GENERAL

GRUPO: 2401

REPORTE DE LA PRÁCTICA NÚMERO 5: CUENTA VIABLE

EQUIPO: 9

I​NTEGRANTES:
Hernández Durán Joseline
León Rodríguez Liliana Isabel
Martinez Gomez Frida Yolcalli

PROFESORES
María Guadalupe Aviles Robles
Guadalupe Hernández Torres
Erik Gonzalez Ballesteros

Fecha de entrega :06/Marzo/2019.

INTRODUCCIÓN
Realizar el conteo de diversos grupos microbianos viables mediante la preparación
de diluciones decimales para conocer las unidades formadoras de colonias (UFC)
por ml de la muestra empleada
El conteo de microorganismo es un procedimiento básico en el laboratorio de
microbiología , y un procedimiento de carácter cotidiano , la necesidad de cuantificar
no solo microorganismo presentes en una muestra es importante, si no también
determinar los microorganismos que permanecen vivos ya que pueden ser de
utilidad en el estudio de la microbiología .Para ello existen técnicas que se
fundamentan en el hecho de que una célula viable inoculada en un medio se
multiplica y produce datos para la cuantificación de estas .como lo es la unidad de
formación de colonias .La técnica se basa en contar las “unidades formadoras de
colonias” o UFC presentes en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que
cada colonia que desarrolla en el medio de cultivo de elección después de un cierto
tiempo de incubación a la temperatura adecuada, proviene de un microorganismo o
de un agregado de ellos, de la muestra bajo estudio; este microorganismo o
microorganismos son capaces de formar la colonia, es decir una UFC. Para que las
colonias puedan contarse de manera confiable, se hacen las diluciones decimales
necesarias de la muestra, antes de ponerla en el medio de cultivo; la técnica para
realizar este procedimiento se describe en “Preparación y dilución de muestras de
alimentos para su análisis microbiológico”.
Escalas o patrones de McFarland​. Técnica basada en turbidimetría; La escala se
basa en la capacidad de precipitación del Cloruro de Bario en presencia de Ácido
Sulfúrico y su utilidad, es la poder elaborar suspensiones bacterianas ajustadas a un
patrón y valorando su concentración; para esto, se toma una alícuota de la muestra
de bacterias y se inocula en un tubo conteniendo solución salina fisiológica (0,85%).
El objetivo es lograr ajustar una concentración de bacterias para determinar la
concentración de una muestra.
Los patrones de McFarland, permiten establecer una relación entre una
precipitación química y una suspensión de bacterias. Se elaboran 10 estándares, y
por espectrofotometría se crea una recta patrón con la cual se va a poder
determinar la concentración de las diluciones bacterianas elaboradas. La
información arrojada es aproximada, ya que la lectura depende de factores como el
tamaño de la bacteria y la formación de agrupaciones.
Asa calibrada
La utilización de agujas o asas calibradas permite tomar volúmenes pequeños, que
son inoculados en la superficie del agar mediante la técnica de siembra masiva. Las
colonias son contadas y se multiplican por el factor de dilución del asa empleada. El
uso más frecuente de este método es en el urocultivo. Se determinan las UFC/g o
mL de muestra.
OBJETIVO

Realizar el conteo en placa de diversos grupos microbianos viables mediante la

preparación de diluciones decimales para conocer las unidades formadoras de
colonias (UFC) por ml de la muestra empleada.

MATERIAL
● 1 Pipeta de 2ml
● 1 Gradilla
● 4 Cajas Petri con agar
● 1 Asa calibrada (0.001 ó 0.01)
● 1 Cepa de ​E.coli
● 5 tubos de ensaye con solución fisiológica(4.5ml)
● 1 Mechero
● 1 tubo 0.5 de referencia de escala McFarland
DIAGRAMA DE FLUJO
 RESULTADOS
Dilución 1 Dilución 2 Dilución 3

Caja petri que contiene muestra
E.coli al 10^-1. Las colonias
fueron incontables, debido a que
no se distinguían
Caja petri que contiene muestra
E.coli al 10^-2, no se obtuvieron
UFC, ya que las colonias fueron
incontables, ya que no se
distinguían
Caja petri que contiene muestra ​E.coli
al 10^-3, aquí se logró realizar el
conteo de UFC debido a que las
colonias se encontraban en menor
cantidad y se podían distinguir.

Dilución 4

Caja petri con muestras ​E.coli​ al 10^-4, fue

posible el conteo de UFC, debido a que las
colonias se encontraban en menor cantidad
y se distinguían de mejor manera para su
conteo.

CÁLCULOS
Datos:
Asa bacteriológica calibrada 0.001
Conteo de UFC
10​-1​= INCONTABLES
10​-2​=INCONTABLES
10​-3​=567
10​-4​=42
FÓRMULA
UFC=(#Colonias)(inverso de la concentración)/Vol. ocupado (Vol. del asa)
UFC= (567)(10^3)/ 0.001= ​567 x 10^6
UFC= (42)(10^4)/ 0.001= ​4.2 x 10^8
ANÁLISIS DE RESULTADOS
El conteo de la bacteria proporcionada (E.coli) se llevó a cabo de mediante la toma
de muestra de la bacteria e inocular en SSF estéril de tal manera que se comparó
visualmente con un tubo patrón 0.5 de Mcfarland , este se utiliza como patrones de
turbidez para la preparaciones de suspensiones de microorganismos, en donde se
tiene una UFC de 1.5x10​8 posteriormente se llevaron a cabo diluciones, el
aislamiento de microorganismos mediante banco de diluciones es un método tanto
cualitativo como cuantitativo. Es cualitativo porque permite diferenciar las diferentes
morfologías coloniales y también es cuantitativo porque permite conocer el número
de microorganismos que hay en una suspensión. Consiste en realizar diluciones
sucesivas de la muestra en condiciones de esterilidad, de manera que se va
reduciendo el número de microorganismos de la suspensión inicial, con el objeto de
sembrar después cantidades conocidas de las diluciones en placas de Petri.
Evidentemente, el número de microorganismos en algunas de las diluciones será tal
que al distribuir una parte de ella en una placa originará colonias separadas en un
número óptimo para su recuento. (García.2010). Por esta razón se tomaron 0.5 mL
de la primera muestra y fueron diluyéndose en el tubo siguiente realizándose esto
cuatro veces, en donde de esta se esperaba una concentración 1.5x10-​4 un
aproximado de 150 UFC pero al hacer el conteo en cada caja , las primeras dos
resultaron incontables por los grandes cúmulos amontonados de bacterias , las
siguientes dos fueron 10​-3​:567 y 10​-4​:42 ,datos que no correspondieron con la
secuencia de las diluciones y pudieron deberse a diversos factores como la mala
preparación de las diluciones , o el no homogeneizar correctamente estas , el no
tomar la muestra correctamente con el asa o no sembrar correctamente.

CONCLUSIONES

La cuantificación de microorganismos totales es una prueba que se requiere

conocer y realizar de manera habitual en el laboratorio de microbiología, es por ello
que la realización de esta práctica es importante para saber cómo contar
correctamente los microorganismos. En conclusión, se efectuó la determinación de
la cuantificación de los distintos microorganismos, para conocer el número de
UFC’S aunque los resultados no coincidieron por algunos errores experimentales.
REFERENCIAS
● García ,E.(2010).PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA, obtenido de
https://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf​(revisado:
04/03/19).
● Food and Drug Administration (2003) “Bacteriological Analytical Manual”. 9th
ed. Arlington, VA: AOAC.
● International Commission on Microbial Specifications of Foods (2005)
“Microorganisms in Foods 6” Chapman & Hall 2nd ed.
● Swanson K.M., Petran R.L., Hanlin J.H. (2001) “Culture Methods for
Enumeration of Microorganisms”. In: Compendium of Methods for the
Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.)
APHA. Washington. 53-67.