CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

2.3.5.1 Aceite Esencial

- Una vez que se ha concentrado el extracto de molle se aplica 10uL del concentrado en una placa
cromatográfica de sílica gel 60 F254 con la ayuda de un capilar.

- Dejar secar después de cada aplicación

- Se introduce la placa en la cuba cromatográfica, hasta que el solvente recorra las ¾ partes de la
placa.

- Retirar de la cuba y dejar secar para luego observar en la lámpara UV 365 nm

- Revelar la placa, dejar secar, y anotar los Rf.

Adsorbentes: Sílica gel 60 F254

Sistema de solventes: Tolueno –Acetato de etilo (93:7)

Revelado: Vainillina caliente

Cálculo

Distancia recorrida del solvente

Distancia recorrida de la muestra Rf

FÓRMULA No.10

2.3.5.2 Flavonoides

- Mezclar 1 g de droga en polvo con 10 mL de metanol por 5 min en un baño de agua

(60ᵒC)

- Tomar 5mL de la solución metanólica y concentrar hasta obtener 2 mL.

- Colocar 1 mL de agua y 10 mL de acetato de etilo, agitar por 10 min.

- Separar la fase de etil acetato y concentrar hasta obtener un volumen de 1mL.

- Usar el concentrado para la cromatografía.

- Se aplica 10µL del concentrado en una placa cromatográfica de sílica gel 60 F254 con

la ayuda de un capilar.

- Dejar secar después de cada aplicación

- Se introduce la placa en la cuba cromatográfica, hasta que el solvente recorra las ¾

partes de la placa.

- Retirar de la cuba y dejar secar para luego observar en la lámpara UV 365 nm

- Revelar la placa, dejar secar, y anotar los Rf.

Adsorbentes: Sílica gel 60 F254

Sistema de solventes: Tolueno – Acetato de etilo –Ácido acético (36:12:5)

Revelado: sulfato de Cerio

Cálculo

Distancia recorrida del solvente

Distancia recorrida de la muestra

CUANTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES TOTALES EXPRESADOS POR EL

POCENTAJE DE QUERCETINA

Análisis espectrofotométrico del marcador químico: flavonoides totales expresados como

porcentaje de quercetina de la droga seca, y del producto final (gel).

Para droga seca

Pesar 1g de muestra comprimir y colocar en un balón redondo de 250 mL

Añadir 20 mL de etanol al 50% y 8 mL de ácido sulfúrico concentrado.

Reflujar por dos horas en baño de agua

Dejar enfriar y filtrar a través de filtro Buchner, utilizando papel de filtración

Lavar el residuo con 10 mL de etanol al 50% para desecharlo finalmente.

El filtrado se evapora en baño de agua hasta la mitad del volumen inicial

Enfriar sobre un baño de agua fría durante 30 min

Filtrar, el papel con residuo se lava con 70 mL de etanol al 96% caliente a 50 ᵒC

Se trasvasa a un balón volumétrico de 100 mL y se afora con etanol al 96%

Tomar una alícuota de 2mL y llevar a un balón de 25 mL aforar con etanol al 96 %

Determinar la absorbancia a 258 nm

Como patrón se emplea 0.04 g de quercetina, los cuales se deben disolver con etanol

al 96% hasta completar un volumen de 50 mL., de esta solución tomar 1 mL y se

diluye a 100 mL con etanol al 50 %

El blanco consistió en una solución de etanol al 50 %

Curva de calibración

Según el método de cuantificación de flavonoides de espectroscopia UV, se realizó una

curva de calibración empleando concentraciones crecientes de quercetina: 4, 8, 16 y 20

mg/L. Los datos obtenidos se someten a un análisis de regresión lineal, obteniéndose la

ecuación que vincula la concentración con la lectura de densidad óptica a 258 nm.

La expresión empleada para el cálculo es la siguiente:

A a bC

Para el producto terminado (gel):

En un balón volumétrico de 100 mL, colocar 1 de muestra, aforar con etanol al 50%,

y filtrar.

Determinar la absorbancia a 258 nm y calcular la concentración