Trabajo Práctico Nº2: Determinación

del coeficiente volumétrico de

Transferencia de Oxígeno: Kla
Resumen:
En el siguiente trabajo se buscó determinar de forma experimental el coeficiente volumétrico
de transferencia de oxígeno conocido como kLa mediante dos métodos: método de balance
gaseoso en biorreactor y método iodométrico en erlenmeyer. En el primer método se
midieron en tres velocidades de agitación: 200, 400 y 800 rpm, y con el uso de tensioactivo
y antiespumante, obteniéndose los valores de 47,337 h-1, 241,204 h-1, 397,407 h-1, 65,254 h-
1
y 39,745 h-1, respectivamente. En el segundo método se compararon 75 ml sin bafles, 75
ml con bafles y 150 ml sin bafles cuyos valores fueron 46,211 h-1, 82,671 h-1 y 22,516 h-1.
Los resultados fueron acorde a lo esperado en las diferentes condiciones.

Introducción:
La transferencia de Oxígeno llevada a cabo en los biorreactores donde se realiza el
crecimiento de cierto microorganismo se basa en el Modelo de la Película donde se
establece que, adyacente a cada una de las fases existe una película donde reside la
principal resistencia de transferencia de materia. Por lo que no existe acumulación de
materia en la interfase, eliminando su resistencia. Este modelo permite evaluar la
resistencia más importante que debe pasar la burbuja de gas para entrar en contacto con el
medio y ser transferida hacia la célula para su consumo. Basado en esto, se plantea que las
velocidades en las películas son iguales a 0, por lo que el oxígeno debe moverse mediante
difusión. Esta difusión genera un gradiente de concentración, donde la difusión va a ser
mayor, cuanto menor sea la concentración de oxígeno en la fase líquida. Esto a su vez, se
ve afectado por la biomasa presente en ese medio, ya que los microorganismos generan la
demanda y el consecuente consumo de oxígeno. A partir de una serie de deducciones a
partir de la Ley de Fick y la Ley de Henry, se obtiene la ecuación de Transferencia de
Oxígeno siendo la siguiente:
OTR= Kla (C*-CL).

Donde se establece que OTR es la transferencia de oxígeno. Esta se ve definida por un

coeficiente de transferencia de materia (Kl) que es la capacidad del fermentador de
transferir oxígeno. A su vez, este Kl se ve afectado por el área (a); el conjunto de Kl y a
define la “huella dactilar” del fermentador utilizado, que es esencial para saber la capacidad
de transferir oxígeno del reactor en una determinada área. Luego se encuentra el gradiente
de concentración definido por un C*, que representa la solubilidad máxima del oxígeno en
las condiciones de trabajo (tales como la temperatura), y el CL que es la cantidad de
oxígeno disuelto en la fase líquida en cierta etapa del cultivo en esas condiciones.
Esta transferencia de Oxígeno es afectada por factores físicos y químicos que varían el
valor de kL, el de a (área), o el de la fuerza impulsora de la transferencia de materia (C*- C).
Dentro de los factores que afectan directamente el valor de Kla se encuentran la geometría
del reactor, ya que otorga una relación altura-diámetro, la cantidad y diámetro de paletas y
la presencia o ausencia de bafles, a las cuales poder modificar para aumentar o disminuir la
transferencia de oxígeno. Por otro lado, la velocidad de agitación genera burbujas más
pequeñas lo que genera que la relación área-volumen sea mayor y, a su vez, esto
disminuye el grosor de la película, generando un aumento del Kla. También se incluye la
velocidad de aireación, que, debido a que baja la densidad aparente del sistema, el
coeficiente de difusión se ve favorecido, generando el aumento de Kl. Finalmente, la
presencia de tensioactivos, tales como los detergentes, generan burbujas más chicas, pero
también cambia las propiedades de la película ya que modifica la naturaleza de la misma.
Esto genera una disminución del coeficiente de difusión, por lo que disminuye el Kl. A su
vez, la presencia de espuma en el fermentador no es beneficioso ya que podría generar
problemas en el correcto funcionamiento del mismo, por lo que, en general, se recurre al
uso de antiespumantes. Éstos últimos cambian la viscosidad del medio aumentando el
espesor de la película ya que el antiespumante aumenta la densidad del medio, de modo
que modifican el coeficiente de difusión. Además aumenta el tamaño de las burbujas,
disminuyendo el valor de a. A pesar de que el uso de antiespumantes no sea el ideal porque
disminuye el kla, su uso es necesario para no generar problemas en el correcto
funcionamiento del fermentador.
Otras modificaciones que se pueden hacer para mejorar la transferencia de oxígeno son las
modificaciones en el gradiente de concentración de oxígeno. Por lo que para poder variar
C*, una de las técnicas es la modificación de la temperatura. Para las temperaturas entre
10ºC y 40ºC, un aumento en la temperatura supone un aumento en la velocidad de
transferencia de oxígeno (aumenta la difusividad del oxígeno en la película líquida,
disminuye el kL). Por encima de los 40ºC, la solubilidad del oxígeno disminuye de manera
apreciable (disminución drástica de C*) y, por lo tanto, de la fuerza impulsora de la
transferencia de materia (C*-C). Otra de las técnicas a utilizar es variar el aire con el que se
airea el medio. Ya que se puede utilizar aire (con la composición normal de oxígeno de
alrededor del 21%), o se puede utilizar oxígeno puro, de esta manera se estaría
aumentando la presión parcial del oxígeno, y por ende, aumentando su valor de C*.
El objetivo principal de este trabajo es el estudio de cómo varía el valor de Kla en diferentes
condiciones, tales como la presencia o ausencia de bafles, menor superficie de contacto,
aumento de la velocidad de agitación, la presencia de detergente y de antiespumante.

Materiales y Métodos:
a) Determinación de la velocidad de transferencia de O2 en biorreactor por el
método de balance gaseoso.
1.- Se prepararon 3 litros de solución 0.5 N de Na 2SO3, se ajustó el pH a un valor
alrededor de 8 y se colocó la solución en el biorreactor.
2.- Se agregó el catalizador (SO4Cu, 1M), hasta alcanzar una concentración final de
10-3 M.
3.- Se seleccionó el caudal de aire F = 60 l.h -1, y se ajusta la agitación al valor
previamente
establecido.
4.- Se aguardó hasta que la lectura del sensor de O2 se estabilizara (10-15 min.) y
se registró el valor leído.
5.- Se modificó la agitación a un nuevo valor y se procedió como en el punto 4. El
procedimiento se repitió con tres condiciones de agitación distintas (200, 400 y 800
rpm).
Luego de determinadas las tres velocidades de transferencia se agregó en el
biorreactor un tensioactivo (detergente) y, posteriormente, un antiespumante para
determinar cualitativamente el efecto de estas sustancias sobre la transferencia de
O2 a una condición de agitación dada (200 rpm). Con los datos obtenidos se
pudieron determinar las velocidades de consumo de O 2, realizando el balance de
materia en fase gaseosa mediante la siguiente expresión:

(1)
El valor de kLa se calcula a partir de la ecuación:

(2)
Cabe destacar que el valor de 7.5mg/L dado para C* vale sólo cuando el gas que
está en equilibrio con el líquido es aire (presión parcial de O 2 de 0.21 Atm). En el
caso del TP la presión parcial de O2 estará dada por la composición del gas de
salida por lo que en el cálculo de kLa debe corregirse dicho valor. El valor corregido
resulta ser:

(3)
Con estos datos se construyó un gráfico de log kLa vs log rpm.

b) Determinación de la transferencia de O2 en erlenmeyer, por el método

Iodométrico:
1.- Se prepararon 3 erlenmeyer (por duplicado) con las siguientes características:
a) Erlenmeyer de 250 mL c/ Bafles con 75 mL de solución de Na 2SO3.
a) Erlenmeyer de 250 mL s/ Bafles con 75 mL de solución de Na 2SO3.
a) Erlenmeyer de 250 mL s/ Bafles con 150 mL de solución de Na2SO3.
2.- Se llevaron al shaker previamente termostatizado a 30ºC y se agitaron a 200
rpm.
3.- Se agregó el catalizador (SO4Cu, 1M), hasta alcanzar una concentración final de
10-3 M. Este momento se tomó como tiempo cero de la experiencia.
4.- A intervalos de 45 minutos se extrajeron 6 muestras de 2 mL con pipeta (tiempo
0 más 5 muestras) y se adicionaron sobre 3 ml de solución de I 2 (aproximadamente
0,5 N). El exceso de I2 se tituló por retorno con S2O3Na2 0,075 N, con solución de
almidón como indicador.
5.- Con los datos obtenidos se graficó el volumen de S 2O3Na2 gastado en función
del tiempo y con la pendiente de dicha gráfica se calculó el valor de kLa empleando
la siguiente expresión:

(4)
Donde C*: solubilidad del O2
N : concentración del tiosulfato
Vm: volumen de Na2SO3.
m: Pendiente

Resultados y Discusión:

a) Determinación de la velocidad de transferencia de O2 en biorreactor por el método de

balance gaseoso.

Tabla 1: % de O2 vs rpm de las diferentes condiciones. En los casos de tensioactivo y antiespumante

sólo se tomó medida a 200 rpm.

Tabla 2: OTR calculado a partir de (1) vs rpm de las diferentes condiciones. En los casos de
tensioactivo y antiespumante sólo se tomó medida a 200 rpm.

Tabla 3: C* corregido calculado a partir de (3) vs rpm de las diferentes condiciones. En los casos de
tensioactivo y antiespumante sólo se tomó medida a 200 rpm.

Tabla 4: kLa calculado a partir de (2) vs rpm de las diferentes condiciones. En los casos de
tensioactivo y antiespumante sólo se tomó medida a 200 rpm.
Gráfico 1: Log (kLa) vs log (rpm) en función de los kLa calculados en la Tabla 4.

Acorde a los resultados obtenidos, se puede confirmar la relación que hay entre el
coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno con la velocidad del biorreactor. Es
decir, a mayores revoluciones por minuto (rpm) mayor es el valor de KLa. Además se
pueden observar los efectos que tienen el uso de tensioactivos y antiespumante
obteniéndose un KLa mayor debido a la aparición de espuma en el primer caso y un KLa
menor producto del aumento del diámetro de las burbujas en el segundo caso.
Los valores obtenidos se condicen con los los esperados, ya que se pudo confirmar los
efectos de las diferentes condiciones, tales como la presencia de un tensioactivo, o de un
antiespumante, y el efecto de diferentes velocidades de agitación. Esto permitió obtener la
variación de los valores de Kla correspondientes a un biorreactor de esas dimensiones.

b) Determinación de la transferencia de O2 en erlenmeyer. Método iodométrico.

Tabla 5: Volumen de titulante vs. Tiempo en la tres condiciones diferentes por duplicado. Las celdas
vacías corresponden a datos que fueron eliminados por tener un error considerable respecto a los
valores esperados y que no se pudieron repetir.
Gráfico 2: Volumen de titulante vs. tiempo de cada condición y su duplicado con su línea de
tendencia. Sus pendientes son: 75 ml sin bafles 1,0476 y 1,7867 ml/h, 75 ml con bafles 2,0648 y
3,0057 ml/h y 150 ml sin bafles 0,621 y 0,76 ml/h

Se utilizó el promedio de las pendientes para el cálculo del Kla de cada condición a partir de
la ecuación (4) siendo C* = 0,00023 moles de O2/l (7,5 mg/l), N = 0,06 eq/l y Vm = 2 ml. Los
promedios de cada condición son los siguientes:
kLa 75 ml sin bafles: 46,211 h-1
kLa 75 ml con bafles: 82,671 h-1
kLa 150 ml sin bafles: 22,561 h-1
Con los resultados obtenidos mediante este método, se pudieron analizar las relaciones
esperadas teóricamente para el uso de un erlenmeyer con las distintas condiciones.
Considerando el erlenmeyer de 75 ml sin bafles como control, se puede establecer la
relación de que un erlenmeyer con el mismo volumen pero con la presencia de bafles,
permite obtener un mayor valor de Kla. Y por otro lado, si se duplica el volumen, en
comparación con el del control, y si mantiene la ausencia de bafles, se obtiene un menor
Kla. Estos resultados son consonantes con los esperados debido a que la presencia de
bafles permite la ruptura del torbellino causado por la agitación y la disminución del diámetro
de las burbujas disminuyendo de esta forma el volumen muerto y favoreciendo una mejor
aireación y un mezclado perfecto. Por otro lado, el aumento de volumen, genera una
disminución de la superficie de contacto de la solución con el aire, por lo que la
transferencia de oxígeno es menor, disminuyendo, en consecuencia, el valor de Kla.

Conclusión:
Debido a los resultados obtenidos se puede concluir que la agitación del sistema es
esencial para poder variar los valores de Kla del biorreactor utilizado. Ya que, al aumentar la
agitación, se observa un aumento del valor de Kla, debido a la formación de burbujas más
pequeñas que permiten aumentar la superficie de contacto. Por otro lado, el agregado de un
accesorio para romper el vórtice generado por la agitación, como es el caso de los bafles,
permiten mejorar la difusión del oxígeno al medio. Las diferencias de volúmenes, a su vez,
también demostraron ser esenciales para la transferencia de oxígeno, ya que a mayor
volumen, menor es la superficie de contacto por lo que es menor la transferencia del gas.
Además se pudo observar el efecto de los agregados al medio de cultivo como pueden ser
los tensioactivos y antiespumantes en la transferencia de gases.
A modo de conclusión final, se plantea que tanto la agitación, como el volumen de trabajo, y
la presencia de bafles son esenciales para una correcta transferencia de oxígeno para el
medio utilizado, y todos los parámetros analizados deben ser tenidos en cuenta para el
diseño de un medio de cultivo apto para el crecimiento del microorganismo con el cual se
quiere trabajar y así obtener los valores de biomasa dentro del rango de lo esperado.