UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

ESCUELA DE MEDICINA
SEMESTRE ACADEMICO 2019-1

CIEN-639

BIOLOGIA CELULAR
Dra. Ofelia M. Córdova Paz Soldán
 SEMANA 10

1 2 3
Ácidos nucleicos: ADN y ARN Replicación del ADN Transcripción del ADN
 Ácidos nucleicos: ADN y ARN
• Macromoléculas de largas cadenas
(secuencia) de nucleótidos.
• Miescher en 1871 aisló una sustancia
ácida rica en fósforo que llamó
"nucleína". Un año más tarde, en
1872, aisló un compuesto que
denominó "protamina" y que resultó
ser una sustancia ácida y otra básica.
El nombre de ácido nucleico procede
del de "nucleína" propuesto por
Miescher.
• Funcionan como almacén,
transmisión de información genética,
y funciones estructurales y catalíticas.
 Bases nitrogenadas
Ácidos Nucleicos: Estructura

NUCLEOTIDO

Enlace éster

La hidrólisis química completa

de un ác. nucleico da lugar a
NUCLEOSIDO una mezcla equimolar de:
una base nitrogenada, una
pentosa y ortofosfato
 ADN Estructura
Modelo de doble hélice
Dos fuentes de información:
Estudio de composición de bases de Erwin Chargaff
• El DNA es una doble cadena que consiste de ~50%
purinas (A,G) y ~50% pirimidinas (C, T)
• La cantidad de A=T y la cantidad de G=C (regla de
Chargaff)
• % GC varía de organismo a organismo.

(James Watson y Francis

Ejemplos: %A %T %G %C %GC Crick –1953)

Homo sapiens 31.0 31.5 19.1 18.4 37.5

Zea mays 25.6 25.3 24.5 24.6 49.1
Drosophila 27.3 27.6 22.5 22.5 45.0
Mycobacterium sp. 12.0 11.0 28.0 26.0
ADN Estructura primaria
 Enlaces Fosfodiéster

Cuando los nucleótidos se polimerizan para

formar ácidos nucleicos, el grupo hidroxilo
fijado al carbono 3’ del azúcar de un
nucleótido forma un enlace éster con el
fosfato de otro nucleótido, con eliminación de
una molécula de agua .
En consecuencia, una hebra aislada de ác.
nucleico es un polímero de fosfatos y
pentosas (un poliéster), con bases púricas y
pirimídicas como grupos laterales.
Las uniones entre nucleótidos se denomina
enlaces fosfodiéster
La secuencia lineal de nucleótidos unidos por
enlaces fosfodiéster constituye la estructura
primaria.
ADN Estructura secundaria
 ADN Estructura terciaria

• Palíndrome: Secuencia de DNA con bases repetidas en

secuencia inversa en ambas hebras. Esta secuencia es
autocomplementaria por lo tanto puede formar
estructuras en forma de horquilla o cruz.
• Repetición especular: La secuencia repetida se
encuentra sobre la misma hebra de DNA. No puede
formar ninguna de las estructuras anteriores.
Niveles de complejidad
del ADN
ADN función
ARN Estructura

Unidad monomérica: NUCLEOTIDO

Tipos RNA
ARN tipos
ARN tipos
ARN tipos
ARN función
 Replicación del ADN
Gen 3
DOGMA CENTRAL Cadena de Gen 1
DE LA BIOLOGIA DNA Molécula
MOLECULAR de DNA
Gen 2

TRANSCRIPCION RNA

Codon

Aminoácido
TRADUCCION

Polipeptido
Replicación (duplicación o Síntesis del ADN )
Replicación del ADN
DNA Polymerase III

Helicase

Single-strand binding proteins

Primase
 DNA POLIMERASAS (DNA Pol)
La DNA Polimerasa, agrega un nucleótido al extremo 3’ de la
cadena de DNA en crecimiento y forma un enlace fosfodiéster
entre este extremo y el grupo 5’-fosfato de nucleótido
entrante.
El nucleótido trifosfato entrante provee la energía necesaria
para esta reacción por la hidrólisis de los dos fosfatos
terminales (PPi).
Este pirofosfato es luego hidrolizado a fosfato inorgánico (Pi),
lo cual permite que la reacción de polimerización sea
irreversible.
Las Topoisomerasas
tipo II cambian la
topología del DNA
mediante el corte y la
reparación del DNA
bicantenario.
DNA Helicasa
 DNA HELICASAS Y PROTEÍNAS SSB.

◦ Una helicasa y las proteínas de unión a las monocadenas (SSB) trabajan para desenrollar y mantener las
cadenas de DNA separadas antes del avance de la horquilla de replicación
◦ Las helicasas son una clase de enzimas capaces de desplazarse a lo largo del DNA utilizando la energía
de la hidrólisis del ATP, para separar las cadenas.
◦ Las proteínas SSB mantienen las cadenas separadas
CARACTERISTICAS DE LA REPLICACION
 ASIMETRICA

La otra cadena hija, cuyo molde es la cadena del DNA progenitora que corre en dirección 5’→3’ es
sintetizada de un modo singular, ya que para poder crecer en esa dirección debe sintetizarse en
dirección opuesta al avance de la horquilla de replicación. El problema se supera haciendo de que la
síntesis sea discontinua, lo cual significa que la nueva cadena se sintetiza de a pequeños fragmentos y
se le llama cadena retrasada (“lagging strand”).
 BIDIRECCIONAL

La síntesis de la cadena re-trasada se

lleva a cabo en la dirección opuesta a
la del movimiento de la horquilla de
crecimiento, a partir de una serie de
iniciadores de RNA cortos formados
por la primasa en múltiples sitios de
la segunda cadena molde. Los
segmentos resultantes de RNA más
DNA se conocen como fragmentos de
Okasaki.
MULTIFOCAL

• En eucariotas, para poder llevar a cabo la replicación en un tiempo razonable, ha de

ser multifocal, es decir, empezar por muchos puntos a la vez. Se ha comprobado que
en el DNA de células de mamíferos existen cerca de 50 000 a 100 000 replicones.
• En cambio la replicación del DNA bacteriano es monofocal, es decir, existe un sólo
origen de replicación.
SEMICONSERVATIVA

Origen de replicación Origen de replicación

Cadena parental

Cadena hija

Origen de
replicación

Búrbuja de replicación

Dos moléculas de DNA hijas

Al abrirse la doble hélice se forma una estructura llamada “burbuja de replicación”, cuyo tamaño aumenta a medida que
avanza la separación de las dos cadenas de DNA, evento que se produce en forma simultánea en los 2 extremos de la
burbuja. Cada burbuja, tiene dos horquillas de replicación que a partir de ese punto de origen común avanzan en ambas
direcciones opuestas
ETAPAS DE LA REPLICACION
INICIACION
Reconocimiento de orígenes de replicación
Separación de hebra
Posicionamiento de maquinaria de
replicación

ELONGACION
Crecimiento bidireccional de la horquilla de
replicación
Replicación semiconservativa,
semidoscontinua, coordinada.

TERMINACION
Reconocimiento de señales de terminación
Desensamble de replisomas
INICIO DE REPLICACION
EN EUCARIOTAS

Los origenes de replicación

contienen contienen tramos de
ADN especiales, compuestos por
cientos de nucleótidos. Todos
poseen una secuencia común
denominada ARS (autonomous
replication sequence).

El ADN de los orígenes de

freplicación se halla asociado aun
complejo de proteínas llamadas
ORC (origin recognition complex).

El ORC es requerido durante la

activación de los orígenes de
replicación.

En G1, Factores de replicación

defosforilados se unen al ORC
para formar complejo de pre-
replicación.
 ◦ When DNA polymerase III reaches
previous Okazaki fragment, it is released
◦ DNA polymerase I replaces the primer of
previous Okazaki fragment with DNA, but
leaving a small “nick”
◦ Finally, DNA ligase catalyzes formation of
ELONGACION DE REPLICACION the phosphodiester linkage that joins
the two Okazaki fragments
Transcripción del ADN o síntesis de RNA
 Características generales
Es monocatenaria. Sólo se
transcribe una
cadena de DNA
Es selectiva. Sólo se
sintetiza RNA a
partir de ciertas
regiones del DNA.
Es reiterativa. Es decir,
una misma región
de DNA puede estar
siendo transcrita
simultáneamente
por varias RNA
polimerasas, con lo
que se obtienen
muchas copias.
La transcripción es el proceso mediante el cual, a partir de una molécula de DNA doble

hélice, se sintetiza una molécula de RNA, complementaría a una de las hebras de DNA.

No requiere de cebadores
 UNION DE LA RNA POLIMERASA AL PROMOTOR

El primer paso es la unión de la RNA polimerasa (RNA pol) al sitio promotor del DNA –una secuencia
específica de varios pares de bases que determina donde empieza la síntesis de RNA y que hebra de
DNA sirve como molde.
Aproximadamente 10 bases corriente arriba del punto de inicio se encuentra la secuencia de 6
nucleótidos, TATAAT, denominada secuencia -10 o caja Pribnow (caja TATA). Por convención, los
nucleótidos se nuemran desde el punto de inicio (+1) con números positivos hacia la derecha
(corriente abajo -”downstream”) y negativos hacia la izquierda (corriente arriba - ”up stream”).
1, INICIACION

Una vez que la molécula de RNA polimerasa se ha unido

al promotor y se desenrolla localmente la doble hélice
del DNA, una las cadenas sirve como molde para la
síntesis de RNA, usando como sustrato ribonucleótidos
trifosfato.

El punto de inicio casi siempre es una purina y suele ser

adenina.

La RNA pol cataliza la formación de un enlace

fosfodiéster entre el grupo 3’ hidroxilo del primer
ribonucleótido trifosfato y el grupo 5’ fosfato del
segundo; luego va agregando nucleótidos, hasta que la
cadena tiene alrededor de 9 a10 nt de longitud. En este
punto el sigma generalmente se separa de la molécula
de la RNA pol.
2, ELONGACION

La elongación continúa cuando la RNA pol se mueve a lo largo de la molécula de DNA, desenrollando la doble
hélice poco a poco y añadiendo un nucleótido complementario de manera que la cadena de RNA va creciendo en
dirección 5’ → 3’.
La RNA pol se mueve a lo largo de la hebra molde desde 3’ hacia el extremo 5’.
A medida que va creciendo la cadena de RNA, los últimos nucleótidos añadidos permanecen apareados con el DNA
molde, formando un híbrido de RNA-DNA corto, de unos 8-12 pb.
La región que contiene la RNA Pol, el DNA y el RNA naciente se denomina burbuja de transcripción.
 3, TERMINACION

En la fase de terminación, cesa la formación

de enlaces fosfodiéster, se disocia el híbrido
DNA-RNA, se rebobina la región fundida del
DNA y la RNA Pol se libera del DNA.

Terminación independiente de rho ():

Las regiones transcritas de los moldes de DNA
contienen señales de terminación (“stops
signals”). La más sencilla es una región
palindrómica rica en GC seguida de una región
rica en AT. El transcrito de RNA de este DNA
palindrómico es autocomplementario. Por lo
tanto sus bases se pueden emparejar para formar
una estructura secundaria en tallo-asa estable en
el transcrito de RNa.
Este tallo-asa viene seguida de una secuencia de
cuatro o más residuos U. El transcrito de RNA
finaliza en ellos o justamente después.
 Terminación dependiente de rho ():
Algunos sitios de terminación requieren la participación de un factor adicional rho (), este detecta señales de
terminación adicionales que no son reconocidas por la RNAP sola. Rho es una ATPAsa que desaloja del sitio activo de
la RNA Pol al extremo 3’ de una cadena de RNA en crecimiento.
 MODIFICACIONES
POSTRANSCRIPCIONALES

Agregado del capuchón (cap)

en el extremo 5’
Una enzima específica incorpora una
guanosina trifosfato (GTP) al extremo 5’
del transcripto.
La enzima metiltransferasa toma dos
grupos metilo de la S-
adenosilmetionina- y los transfiere al
ARNm:
uno a la guanina del cap – se forma
así la 7-metilguanosina- y el otro al
nucleótido del RNAm.
Agregado del capuchón (cap) en el extremo 5’
Agregado de la cola de poli-A en el extremo 3’
Corte y Empalme “Splicing”
Técnicas de biología celular y molecular
1. Homogeneización de células
2. Aislamiento de los núcleos (con SDS)
3. Extracción del DNA o RNA
4. Purificación (separar DNA de
contaminantes)
5. Separación de ADN
por electroforesis en geles
de agarosa
6. Amplificación enzimática
por PCR
Separación de fragmentos de DNA
Purificación
de ADN
 Amplificación por PCR
PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa

Kary Mullis, 1983, de Cetus Corporation

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
 Secuenciación del ADN

Frederick Sanger (1977) identifico la primera secuencia de aminoácidos (insulina)

 Premios Nobel desde 1958
Otorgados por investigación en biología celular y molecular
 HOY MEJOR QUE MAÑANA,
MAÑANA MEJOR QUE HOY….
Siempre es posible hacer
mejor las cosas…ningún día
debe pasar sin una cierta
mejora

….Muchas Gracias por su atención

ocordovap@upao.edu.pe