UNIVERSIDAD POLITECNICA DE PUEBLA

BACTERIOLOGIA

GRADO: QUINTO GRUPO: BA

LABORATORIO DE BACTEREOLOGÍA
PRACTICA #1

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

INTEGRANTES:
HERNÁNDEZ GARCÍA DIANA
HERNÁNDEZ GASCA LILIA
LÓPEZ MALDONADO SARAI
TECPANECATL TELLEZ ANA MARÍA

M.C. MONTALVO PAQUINI CLAUDIA

29 ENERO 2010
INTRODUCCIÓN:
Para la identificación de microorganismos en el laboratorio, el laboratorista tiene
que llevar a cabo diferentes procedimientos que lo lleven a cumplir su objetivo. El
procedimiento consta de diferentes etapas que van desde la toma de la muestra,
la selección y preparación de medios de cultivo, la siembra del microorganismo, el
aislamiento de mismo así como la caracterización de la morfología colonial macro
y microscópica; todas las anteriores bajo el orden en que se mencionan.

MEDIOS DE CULTIVO

Para un cultivo adecuado de bacterias y microorganismos, se utiliza el agar, un gel

coloidal formado por hidratos de carbono, de extendido uso comercial y que
proviene de las paredes celulares de varias especies de algas rojas, en concreto de
miembros orientales del género Gelidium. Se utiliza como agente solidificante en
la preparación de dulces, cremas y lociones, así como en las conservas de pescado
y carne; para texturizar y emulsionar los helados y postres congelados; para
clarificar, durante el proceso de fabricación del vino y la elaboración de la cerveza;
y también para dar apresto (almidonar) las telas.
Además, es un excelente medio de cultivo de bacterias, ya que no se disuelve por
el efecto de las sales, ni se consume por la acción de la mayoría de los
microorganismos.
Cada tipo de agar debe de cumplir con los requerimientos:

Fuente de energía.- Las bacterias pueden ser fototrofos o quimiotrofos. Las

fototrofos absorben energía del sol y las quimiotrofos de compuestos orgánicos e
inorgánicos.

Fuente de carbono. Se encuentran los autótrofos y los heterótrofos utilizan las

moléculas orgánicas.

Fuete de electrones.-Las bacterias pueden ser organotrofos que utilizan moléculas

orgánicas y los litotrofos que utilizan sustancias inorgánicas

Fuente de nitrógeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrógeno atmosférico a

través de las proteínas o por la degradación de aminoácidos o péptidos.

Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales (P).

Vitaminas.
Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorción de los nutrimentos.
También requiere de los requerimientos nutricionales óptimos para su desarrollo:

Proteínas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles

en el comercio, preparadas por digestión parcial de carne con enzimas peptídicas;
consisten en polipéptidos, dipéptidos y aminoácidos.

Carbohidratos.- Suministran carbono para la síntesis, y además su fermentación

libera energía utilizable en el metabolismo.

Factores accesorios de crecimiento.- Son también requerimientos por algunas

bacterias. Entre ellos están las vitaminas del complejo B; estas suministran
enzimas necesarias para que las bacterias que son incapaces de sintetizar otros
factores necesarios para algunas bacterias sean obtenidos de los nutrimentos más
complejos.

Sales minerales.- Elementos como K, Ca, Na, etc.; también son requeridas por
algunas bacterias en su desarrollo.

Atmósfera.- Algunos microorganismos precisan oxígeno para su desarrollo, otros

son incapaces de reproducirse en presencia de este elemento, en cambio otros
organismos pueden crecer en una atmósfera con oxígeno, logran sobrevivir y
crecer sin el, se les llama anaerobios facultativos.

Presión osmótica.- Las células pueden encogerse y ser destruidas en soluciones

hipertónicas; inversamente se rompen por entrada de agua, en las soluciones
hipotónicas.

Temperatura.- La temperatura para la cual los organismos microbianos crecen

mejor, es considerada como temperatura óptima.

Luz.- La mayoría de las bacterias se desarrollan mejor en ausencia de luz. La luz

ultravioleta puede ser letal.
La mayoría de las bacterias crece en un medio ligeramente alcalino (pH 7.2 a 7.6).
Los hongos crecen con facilidad en los medios ácidos (pH 5).
Actualmente existen diferentes formas y métodos de cultivar en el mercado, ya
que pueden cultivarse en placas, tubos etc.

Morfología colonial:
Una colonia se define como una masa visible de microorganismos, todos
originados de una sólo célula madre, de manera que una colonia constituye clones
de bacterias, todas genéticamente similares.
Los siguientes adjetivos pueden usarse para describir la morfología colonial o
características de cultivo:

1) Tamaño: medido en milímetros; menos de 1mm = puntiforme

2) Forma: Circula, Irregular, Filamentosa, Rhizoide y Ondulada

3) Margen: (la forma del contorno de la colonia): Entero, Ondulada, Lobada,

Irregular, Concéntrica, Arrugado, Circular irradiado, Filamentoso (filiforme),
Ciliado.

4) Propiedades ópticas: Opaca, Translúcida y Transparente y Brillante (mucoide).

5) Elevación: Elevada, Convexa, Plana, Gotiforme (forma de gota), Umbonada,

Crateriforme.
Colonias de bajo crecimiento*

6) Textura: Suave, Granular, Tenaz, Mucoide.

7) Pigmento: Hialino a colores blanquesinos, y de amarillos a rojos

Objetivo:

Adquirir habilidades básicas para el laboratorio de microbiología tales como:

 Preparación de medios de cultivo y material para utilizar en

microbiología.
 Esterilización por calor húmedo y seco del material preparado
 Caracterización de la morfología colonial macroscópica
MATERIAL Y REACTIVOS:

Agar MacConkey
Agar Nutritivo
2 Matraces de 250 ml
Espátula
1 Probeta de 100 ml
1 Piceta
2 Pipetas serológicas de 1 ml
1 tubos de ensaye
Perilla
Microscopio
Aceite de inmersión
Azul de metileno
Mechero, Tripie, Tela de Asbesto
1 Paquete de cajás petri grandes desechables estériles
6-8 hisopos
Portaobjetos y cubreobjetos
Asa bacteriológica
Alcohol, algodón, gasa, papel aluminio, papel estraza o Manila, 1 Fco. Gerber

PREPARACIÓN DE MATERIAL

a) Preparar tapones de algodón para los matraces en los que se esterilizará el

medio de cultivo.
b) Envolver pipetas, hisopos y tubos de ensaye para esterilizar por calor (180ºC
durante 2 horas).

PREPARAR MEDIOS DE CULTIVO

 Por equipo preparar 2 cajas petri con Agar Nutritivo y 2 cajas con Agar
MacConkey. Los medios se preparan de acuerdo a las especificaciones del
fabricante.
 Cada caja puede contener de 20 ml a 25 ml de medio de cultivo.
 Una vez pesado el medio deberá disolverse en agua, sometiéndolo a una
ligera ebullición hasta que el medio se torne transparente. En este
 momento el matraz se tapará con tapón de algodón y se procederá a su
esterilización por autoclave, durante 20 min. a 121°C y una presión de 15 lb.
 Preparar un área estéril para realizar el vertido del medio, limpiar
perfectamente con alcohol o yodo y encender un mechero.
 Una vez esterilizado el medio verter en las cajas petri estériles en la zona
estéril y dejar gelificar.

Cada uno de los estudiantes tomara una muestra con la ayuda de un hisopo y
sembrara, de forma masiva, en las cajas con agar Nutritivo y la incubará a 37ºC
por 24 hrs. En las cajas petri con Agar Mac Conkey se sembrara de forma masiva
con un hisopo, previamente esterilizado y pasado por la superficie dental de algún
compañero, e incubará a 37ºC por 24 hrs. Rotular las cajas (No. de Equipo, Fecha,
Nombre del medio, Tipo de muestra y/o lugar donde se tomo muestra).
Una vez realizada la morfología colonial macroscópica realizar una observación
microscópica de la siguiente forma:

OBSERVACIONES Y ESQUEMAS:
 Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3
Medio: Medio: Medio:
Procedencia: Procedencia: Procedencia:

Dibujo

MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA:

RESULTADOS:
MORFOLOGÍA MACROSCOPICA:
Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3
Característica Medio: Medio: Medio:
Procedencia: Procedencia: Procedencia:
Color Rosa Blanco Amarillo
Borde Entero Lobulado Entero
Elevación Plana Convexa Plana
Superficie Lisa lisa lisa
Consistencia
Luz reflejada Brillante Brillante Brillante
Luz Translucida Opaca opaca
transmitida
CUESTIONARIO:
 1.- Señala ventajas y desventajas de la esterilización por calor húmedo y calor
seco.

VENTAJAS DESVENTAJAS
Calor húmedo Calor seco Calor húmedo Calor seco
Rápido No es corrosivo para No permite Requiere mayor tiempo de
calentamiento y metales e esterilizar esterilización, respecto al
penetración instrumentos. soluciones que calor húmedo, debido a la
formen baja penetración del calor.
emulsiones con el
agua
Destrucción de Permite la Es corrosivo sobre
bacterias y esporas esterilización de ciertos
en corto tiempo sustancias en polvo y instrumentos
no acuosas, y de metálicos
sustancias viscosas no
volátiles.

No deja residuos
tóxicos
Hay un bajo
deterioro del
material expuesto
Económico

2.- Indica la composición de cada uno de los medios de cultivo utilizados y para
que tipo de microorganismos utilizados.

AGAR MACCONKEY:

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el

desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0 Suspender 50 g del polvo por
Lactosa 10.0 litro de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar hasta
Mezcla de sales biliares 1.5
uniformar. Calentar suavemente
Cloruro de sodio 5.0
y hervir 1 a 2 minutos hasta
Agar 13.5 disolver. Esterilizar en autoclave a
Rojo neutro 0.03 121°C durante 15 minutos.
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 ± 0.2

AGAR NUTRITIVO:

Es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus

requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.
La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano.
El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero
u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Pluripeptona 5.0 Suspender 31 g de polvo por litro
Extracto de carne 3.0 de agua destilada. Mezclar y
Cloruro de sodio 8.0 dejar reposar 5 minutos. Calentar
Agar 15.0
suavemente agitando y hervir 1 o
2 minutos hasta su disolución.
pH final: 7.3 ± 0.2

3.- Por qué es importante para el microbiólogo ser capaz de identificar la

morfología colonial.

Por que el crecimiento de las colonias sobre los medios con agar se ha podido
estudiar la formación de colonias bacterianas o de biofilms

4.- Explica cuales son las diferencias en los siguientes términos: esterilización,
desinfección y asepsia.

Esterilización: eliminación o muerte de todos los microorganismos que contiene

un objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no
pueden contaminarse nuevamente.

Desinfección agente que elimina la carga microbiana total en superficies

inanimadas tales como habitaciones.

Asepsia agente que controla y reduce la presencia de microorganismos

potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas (sólo pueden aplicarse
externamente sobre seres vivos.

5) Señala la diferencia entre los colorantes ácidos y básicos que se utilizan para
tinción
Tinción básica es aquella en que el color está dado por el ion cargado
positivamente.
Ejemplo: Azul de metileno (+) + cloruro (-)

Tinción ácida es aquella en que el color está dado por el ion cargado
negativamente.
Ejemplo: Eosinato (-) + Sodio (+)
BIBLIOGRAFÍA
www.MiTecnologico.com/lb/Main/MorfologiaColonialYMicroscopica