MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y

LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
INFORMACIÓN BÁSICA
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: PRÁCTICA No.:
Soluciones amortiguadoras 3
ASIGNATURA: Bioquímica
TEMA DE LA PRÁCTICA: Soluciones amortiguadoras
LABORATORIO A UTILIZAR: Laboratorio de Química y Bioquímica
TIEMPO: 1 Sesión (2 Horas) TRABAJO GRUPAL: TRABAJO INDIVIDUAL:
CONTENIDO DE LA GUÍA
COMPETENCIAS DISCIPLINARES
Preparan dos soluciones buffer o tampón, reconociendo sus propiedades y determinando
experimentalmente el intervalo de pH en que amortigua estos, con adiciones de un ácido y una base fuerte el
cual se representará por medio de una gráfica.
MARCO TEORICO
1. CAPACIDAD AMORTIGUADORA
Si el pH de una solución permanece casi constante cuando se agregan pequeñas cantidades de ácido fuerte o
base fuerte, se dice que la solución está regulada o amortiguada. La capacidad de una solución para resistir
cambios de pH se llama capacidad de amortiguación (Horton, H. et al. 2008).
El objeto de su empleo, tanto en técnicas de laboratorio como en la finalidad funcional del plasma, es
precisamente impedir o amortiguar las variaciones de pH y, por eso, suele decirse que sirven para mantener
constante el pH. Los más sencillos están formados por mezclas binarias de un ácido débil y una sal del mismo
ácido con base fuerte, por ejemplo, una mezcla de ácido acético y acetato de sodio; o bien una base débil y la
sal de esta base con un ácido fuerte, por ejemplo, amoníaco y cloruro de amonio. La aplicación más
importante de esta teoría de los amortiguadores es, para los fisiólogos, el estudio de la regulación del
equilibrio ácido-base. Para dar una idea de la importancia de los amortiguadores de la sangre, recordemos
que la concentración de hidrogeniones del agua pura experimenta una elevación inmediata cuando se añade
una mínima cantidad de un ácido cualquiera, y crece paralelamente a la cantidad de ácido añadido. No ocurre
así en la sangre, que admite cantidades del mismo ácido, notablemente mayores, sin que la concentración de
hidrogeniones aumente de una manera apreciable.

2. MECANISMO DE LA ACCIÓN AMORTIGUADORA

En un amortiguador constituido de ácido acético y acetato de sodio, el ácido estará parcialmente disociado
estableciendo un equilibrio entre las partículas de ácido sin disociar los iones hidrógenos y los iones de base
conjugada Figura 1.

Figura 1: Ionización del ácido acético.

Página 1 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
El acetato de sodio, como todas las sales, está disociado completamente y, por esta causa, el ion acetato
procedente de la sal desplaza el equilibrio hacia la formación de ácido, disminuyendo la concentración de
hidrogeniones libres Figura 2. La presencia conjunta de la sal y el ácido hace decrecer la acidez libre. Si las
cantidades de sal y ácido son del mismo orden de magnitud, la concentración de iones hidrógenos se regulará
por la reacción de equilibrio del ácido.

Figura 2. La ecuación de ionización del acetato de sodio.

Si añadimos al sistema un ácido fuerte, por ejemplo, ácido clorhídrico, se produce un aumento instantáneo
de la concentración de iones hidrógenos, los cuales son neutralizados por la base conjugada del ácido
liberando así, una cantidad equivalente de ácido débil.
Si añadimos al sistema una base fuerte, por ejemplo, hidróxido de sodio, los iones hidroxilos consumen
rápidamente iones hidrógenos del sistema para formar agua, lo que provoca la transformación de una parte
del ácido acético libre en acetato que es una base menos fuerte que el hidróxido de sodio.
La utilidad de las mezclas amortiguadoras en la regulación del equilibrio ácido-base del plasma sanguíneo, se
basan en la posibilidad de mantener la concentración de iones hidrógeno dentro de un rango pequeño. El pH
se puede mantener muy cercano al nivel que convenga, escogiendo las mezclas adecuadas. Por ejemplo, con
un determinado amortiguador el pH de una cierta reacción puede ser tres, y con otro amortiguador la misma
reacción se puede estudiar a pH ocho.

3. ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBACH
La Ecuación de Henderson-Hasselbach permite calcular el pH de una mezcla amortiguadora conociendo su
composición. En su deducción, para un amortiguador compuesto de un ácido débil y una sal de su base
conjugada, se considera que la concentración de ácido libre es aproximadamente igual a la del ácido total, y
la concentración del ion base conjugada coincide con la concentración de la sal. Con ello, La Ecuación de
Henderson-Hasselbach presentada en la figura 3, expresa que el pH de una solución amortiguadora se
calcula sumando al pK del ácido, el logaritmo de la relación concentración de sal / concentración de ácido, es
decir:

Figura 3. Ecuación Henderson-Hasselbalch

Página 2 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
De acuerdo con todo lo anterior, el pKa de un ácido débil se puede definir como el pH del sistema
amortiguador que resultaría al añadirle una cantidad equimolar de una sal fuerte del mismo ácido, o bien el
pH alcanzado después de neutralizar con base fuerte, exactamente, la mitad de ácido. Para el ácido acético,
una solución uno molar de ácido puro tiene un pH de 2,38, mientras que un sistema amortiguador con
cantidades equimolares de ácido y sal tiene un pH igual al pK del ácido acético, es decir, 4,76 (Reyes, F.,
Tirado, S. 2011).

4. SISTEMAS AMORTIGUADORES EN MAMÍFEROS

Las células del organismo funcionan de manera adecuada cuando se mantienen dentro de ciertos parámetros
entre estos el pH de los fluidos corporales que están formados por agua y sustancias disueltas y por lo tanto
pueden sufrir variaciones en su pH dependiendo de los alimentos que se consuman o de las reacciones
metabólicas normales del organismo si los cambios de pH son significativos pueden llegar a afectar al
organismo (Garrido, 1991). Por esto en el plasma sanguíneo, en los fluidos intersticiales y en las células se
encuentran sustancias que actúan como soluciones tampón o amortiguadoras participando en la regulación
del pH y manteniéndolo en un rango de 7,35 a 7,45.
Entre las soluciones tampón más importantes encontramos las proteínas como la hemoglobina y
oxihemoglobina, el sistema bicarbonato(HCO3/H2CO3) y fosfato (H2PO4-/HPO4-2). El control del pH en sangre
se realiza de manera conjunta por los sistemas respiratorios y urinarios (Valtin, 1973, Wilbraham y Matta,
1989, Olvera, 1988). Figura 3.

Figura 3. Tampones fisiológicos

Página 3 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
CONSULTA PREVIA
1. Determinar el pH de una disolución acuosa que es 0,4M en ácido acético y 0,4M en acetato de sodio,
Ka=1,8*10-5 para el ácido acético.

Calcule el pH de 0,500 mL de una solución reguladora, que se prepara disolviendo en agua 2,40 g de
NaH2PO4 y 5,68 g de Na2HPO4 llevando a volumen en matraz aforado de 500 mL.
PKa: 7,21 (Ka: 6,17*10-8)
Peso molecular NaH2PO4: 120 g/mol
Peso molecular Na2HPO4: 142 g/mol

2. Describa con sus propias palabras como se hace el procedimiento para verificar la acción del buffer al
adicionar ácido clorhídrico, mencione los materiales que emplearía para cada acción en el procedimiento
y realice un dibujo que represente lo descrito anteriormente.
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

3. Consulte dos procesos que se tengan que desarrollar en su carrera que impliquen el uso de soluciones
amortiguadoras y mencione cuales son los componentes del buffer que se emplean en dichos procesos.
Proceso 1: _____________________________________________________________________________
Buffer: ________________________________________________________________________________
Proceso 2: _____________________________________________________________________________
Buffer: ________________________________________________________________________________

Página 4 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
4. Mencione las fuentes consultadas que tuvo en cuenta para desarrollar los puntos anteriores. Citar con
normas APA. Cite el artículo.
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

5. RIESGOS Y SEGURIDAD: FRASES H & P, PICTOGRAMAS Y COLECTORES DE DESECHO

Ácido orto-Fosfórico
Ácido Clorhídrico H314
H314-H335- H290 P260-P264-P280-P310
P280-P301+P330+P331 P301+P330+P331
P305+P351+P338 P303+P361+P353-P501
Colector:_____________ Colector:____________
Hidróxido de Sodio
H314-H290
P280-P301+P330+P331
P305+P351+P338

Colector:_____________
Frases H
H290:____________________________________________________________________________________
H314:____________________________________________________________________________________
H335:____________________________________________________________________________________
Frases P
P260:____________________________________________________________________________________
P264:____________________________________________________________________________________
P280:____________________________________________________________________________________
P310:____________________________________________________________________________________
P501:____________________________________________________________________________________
P301+P330+P331:__________________________________________________________________________
P303+P361+P353:__________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
P305+P351+P338:__________________________________________________________________________

PALABRAS CLAVE:
Soluciones amortiguadoras, Soluciones y sistemas tampón, Mecanismos de amortiguación
METODOLOGÍA
• Ingreso de los estudiantes a la práctica (Cada uno debe tener desde el inicio sus elementos de
bioseguridad: Guantes, Tapabocas* y bata).
• Entrega de consulta previa.

Página 5 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
• Retroalimentación de consulta previa, la cual incluye claridad en las posibles dudas que tengan los
estudiantes.
• Explicación por parte del procedimiento por parte del docente
• Entrega de material.
• Ejecución de la práctica.
• Puesta en común de los resultados obtenidos, posibles causas de error y conclusiones.
• Entrega del material e informes.
Nota: Los docentes pueden realizar actividades anexas que permiten retroalimentar o evaluar el proceso de
la guía, las cuales van acorde a los criterios de evaluación presentadas en la rúbrica. Estas actividades se
realizarán en cualquier momento de la sesión práctica, según lo defina el docente.
*El tapabocas deberá corresponder al solicitado dentro del listado de material estudiante, el cual
corresponde al riesgo de la sesión práctica.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR

Materiales y Equipos Reactivos Materiales Estudiante
1 pH-metro 25 mL Fosfato dibásico de potasio Bata de laboratorio
2 Erlenmeyer de 100 mL (K2HPO4) 0,3 M Guantes de nitrilo
1 Pipeta aforada de 5 y 10 mL 15 mL Fosfato monobásico de Gafas de seguridad
3 Beaker 250 mL* potasio (KH 2PO 4) 0,3 M Marcador Sharpie
2 Buretas de 25 mL* 20 mL Ácido clorhídrico 0,1 M Regla
2 Soportes universales* 20 mL Hidróxido de sodio 0,1 M Paño absorbente
2 Pinzas para bureta* 1 mL azul de bromo fenol 2 Hojas de papel milimetrado
* Para todo el laboratorio (indicador en gotero) Colores
PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.
• Usar los elementos de protección (bata, guantes y mono gafas) durante toda la práctica.
• Recuerde siempre todas indicaciones de prevención y seguridad expuestas durante la sesión de
bioseguridad.
• Revise su área de trabajo al ingresar al laboratorio.
• Ingrese al laboratorio conociendo los procedimientos a realizar y nunca descuide montajes o equipos
durante su funcionamiento.
• Lavar cuidadosamente todo el material al iniciar y al finalizar la práctica.
• NUNCA corra o juegue en el laboratorio, puede ocasionar un accidente.
• No ingiera alimentos o bebidas en el laboratorio.
• Antes de manipular los reactivos tenga en cuenta las indicaciones de peligro y prudencia (Frases H y P)
consultadas.
• Cuando opere materiales y/o equipos cerciórese de conocer su funcionamiento. De lo contrario solicite
asistencia.
• Cuando utilice la plancha de calentamiento, mechero u otros materiales calientes tome las
precauciones necesarias: Cables, mangueras y otros elementos se pueden quemar accidentalmente.
• Disponga todos los residuos en los colectores o canecas correspondientes. No los deseche calientes.
• En caso de presentarse algún incidente o accidente informar inmediatamente al docente.
• Dejar el lugar de trabajo limpio, seco y organizado

Página 6 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
PROCEDIMIENTO A UTILIZAR

BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA
Brandis, K. Acid-base physiology: Renal Regulation of Acid-base Balance. Recuperado en 11-julio-2012 de
http://www.anaesthesiamcq.com/AcidBaseBook/ab2_4b.php
Horton, H. Robert; Moran, Laurence A.; Scrimgeour, K. Gray; Perry, Mark D.; Raw, J. David. (2008). Principios de
Bioquímica. Cuarta Edición: Editorial Pearson Educación, México,
Reyes Fiol David Ulises, Tirado Soler José Alberto. Bioquímica, tec. bas. exp, práctica 02, 2011 pag. 3-7 preparación de
soluciones amortiguadoras (“buffers”) instituto tecnológico de la paz laboratorio de bioquímica 18-febrero-2011.
Martin Ana María, Química Analítica, Soluciones Amortiguadoras, Obtenido de
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/SOLUCIONES%20REGULADORAS%20DE%20pH.pdf.

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Firma: Firma: Firma:

Nombre: Docentes de laboratorio Nombre: Lic. César Andrés Nombre: Ing. Claudia Patricia
de Química y Bioquímica Gutiérrez Zapata Fernández Arévalo
Fecha: Junio de 2017 Fecha: junio de 2017 Fecha: junio de 2017

Página 7 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
INFORME DE LABORATORIO
ASIGNATURA:
ESTUDIANTES:
▪
GRUPO:
▪
▪
NOTA:
▪

CARRERA: TRABAJO GRUPAL: TRABAJO INDIVIDUAL:

FORMULE TRES HABILIDADES QUE DESEE ADQUIRIR O DESARROLLAR A TRAVÉS DE LA PRÁCTICA DE
LABORATORIO
• _____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
• _____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
• _____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Práctica de Laboratorio.
Elabore un mapa conceptual, recuerde que el mapa conceptual se debe estructurar por medio de conectores, no se deben poner
definiciones y los conceptos se deben organizar jerárquicamente.

Página 8 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
RESULTADOS
Tabla 1. Resultados capacidad amortiguadora

Adicción de HCl Adicción de NaOH

Volumen de HCl 0.2 M pH Registrado Volumen de NaOH 0.2 M pH Registrado
Añadido (mL) Tampón A (Fosfatos) Añadido (mL) Tampón A (Fosfatos)

CUESTIONARIO
1. Con los datos obtenidos, realice sobre una hoja de papel milimetrado, una gráfica de pH vs Volumen de
HCl (mL) y volumen de NaOH adicionados, e identifique la región en la cual el buffer tiene su mayor
capacidad amortiguadora. La gráfica debe incluir:
• Título de la gráfica.
• Colores para diferenciar la gráfica del HCL de la del NaOH.
• Señale el intervalo de pH en donde pH es útil el buffer preparado en la práctica.
Tome como REFERENCIA la gráfica siguiente para ubicar los ejes y el título. Recuerde que debe usar todo
el espacio del que dispone para hacer la gráfica.

Página 9 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
2. En el agua pura se evidencia que la concentración de hidrogeniones puede sufrir un aumento o
disminución fuerte al añadir una pequeña cantidad de cualquier ácido o base, respectivamente.
A. ¿A qué se debe que no se observe el mismo comportamiento en las soluciones amortiguadoras?
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
B. ¿cuál es mecanismo por el cuál este tipo de soluciones ejerce su acción amortiguadora? Explique su
respuesta:
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
3. Teniendo en cuenta la gráfica obtenida indique ¿Cuál es el intervalo de pH útil del buffer preparado en la
práctica? Y ¿Cómo determinó este intervalo?
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

4. Explique porque son importantes los sistemas amortiguadores de la sangre

_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS
Cómo se explica que en alguno de los procesos (ácido o base) no se vea la ruptura de pH con claridad.
Justifique su respuesta:
Situación:_________________________________________________________________________________________
Explicación:________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES
1. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
2. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
3. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

Página 10 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017
APLICACIÓN PROFESIONAL DE LA PRÁCTICA REALIZADA
Expongan en este espacio la relación de las competencias y habilidades desarrolladas con el ejercicio de su futura profesión.
_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA UTILIZADA Utilicen las normas APA

_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________

Página 11 de 12
 MACROPROCESO RECURSOS E INFRAESTRUCTURA Y
LABORATORIOS
Nombre del Proceso:
CÓDIGO: LA-FM-007
LABORATORIOS
Nombre del Documento: VERSIÓN: 3
FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO FECHA: 18/Marzo/2017

Página 12 de 12