TALLER DE LABORATORIO

BACTERIOLOGIA III

Dr. Julio Cesar Rocha Jiménez

Elimeleth Gonzalez Arteaga

Sebastián Caraballo Torres

Universidad de San Buenaventura Sec. Cartagena

Faculta de Ciencias de la salud
Bacteriología
2019
 INTRODUCCION

La tuberculosis es una enfermedad cuyo agente causal es un bacilo, una

micobacteria. Si bien existen más de setenta especies diferentes de micobacterias
capaces de infectar al hombre, la más común es Micobacterium tuberculosis.
Estas bacterias pueden ingresar al organismo a través de varias vías, pero lo
hacen sobre todo a través del tubo digestivo y los sistemas genitourinario y
respiratorio, siendo esta última la vía de infección más frecuente, ya que las
partículas liberadas al toser por un paciente con tuberculosis contienen bacterias
que, al ser aspiradas por un individuo sano y depositarse en sus pulmones,
generan la tuberculosis pulmonar.

OBJETIVOS
 Determinar la capacidad infectiva de este microorganismo

 Saber los pasos a seguir para la obtención de la muestra de este

microorganismo en personas que tengan los síntomas

 Aprender la morfología del microorganismo y coloraciones pertinentes para

si identificación

 La manera de cómo se reporta unas muestras positivas

 GUIA DE LABORATORIO DE TUBERCULOSIS

1. OBJETIVO
Identificar microscópicamente bacilos ácido alcohol resistentes mediante la coloración de Ziehl-
Neelsen en diferentes tipos de muestra respiratorias y algunos líquidos corporales en TB extra
pulmonar.

2. ALCANCE
Aplica a las muestras de Esputo, secreciones respiratorias, Líquidos corporales entre otras muestras
extra pulmonares recibidas en la sección de microbiología con solicitud de cultivo y baciloscopia.

3. DEFINICIONES
- Coloración de Zielh neelsen: coloración basada en incorporar en citoplasma bacilar de las
Mycobacterias la fucsina como colorante básico conociendo su capacidad de resistirse a la
penetración de la misma y su resistencia a la decoloración con alcohol acido, por su interacción con
los ácidos micólicos, péptidos y glicolipidos, requiriendo a su vez calor para permitir que el colorante
penetre por la debilidad de los ácidos grasos a este.
- BAAR: bacilos acido alcohol resistente de la familia de las Mycobacterias.

4. DOCUMENTO DE REFERENCIA.
Files.sld.cu/tuberculosis/files/2009/12/tb-labs-baciloscopia1.pdf
Actualización INS 2014.

5. EQUIPOS Y MATERIALES
Mechero
Portaobjetos
Bajalenguas
Colorantes Zielh Neelsen
Aceite de inmersión
Microscopios
Tapabocas N95

6. PROCEDIMIENTO
- preparar y organizar todo el área y material a emplear
- partir en 4 el baja lenguas primero a lo largo y luego a la mitad /
dejando la paleta dentada que facilite el trabajo con la muestra mucoide
- realizar extendido de 2 cm x 1 cm y dejar secar, seleccionando la partícula mas purulenta
 - luego de estar seco el extendido, cubrir totalmente la lámina con Fucsina fenicada
- calentar la lámina por 5 minutos permitiendo que desprenda vapores y sin dejar hervir, si
se va secando la lámina se va agregando más fucsina, durante los 5 minutos solo se
flamea 3 veces.
- Lavar con agua corriente
- Decolorar con alcohol ácido por 3 minutos o hasta que haya desprendido todo el rojo de la
fucsina, esto va a depender del grueso del extendido.
- Lavar con agua corriente
- Cubrir con azul de metileno durante 1 minuto.
- Lavar con agua corriente
- Dejar secar
- Observar al microscopio con objetivo de inmersión.

7. REPORTE

Informe el resultado teniendo en cuenta la escala semicuantitativa.

Observaciones:

- cuando el extendido este negativo para BAAR, pero se observen blastoconidias, micelios,
debemos informar que se observan estructuras compatibles con hongos, pero siempre
aclarando que es una nota ya que la coloración solo esta validada para BAAR.
- En caso de obtener resultados negativos en el examen seriado y la clínica del paciente
indique lo contrario debemos sugerir realización de cultivo de la segunda muestra, en
pediátricos se deben cultivar las 3 muestras (aspirado gástrico)
- Todas las láminas positivas deben ser enviadas al Laboratorio de salud departamental.

INFORME
 1. Defina el mecanismo de ácido alcohol resistencia.

es la propiedad física de algunas bacterias a la resistencia a la decoloración

de la fucsina básica (rojo) la cual penetra en la célula por acción del fenol y
el calor. sin embargo, puede ser teñido con algunas tinciones concentradas
combinadas con calor. Una vez teñida tiene la capacidad de resistir la
decoloración de una combinación de alcohol- ácido, el cual es el decolorante
más común en los protocolos de tinción de bacterias, de donde viene el
nombre Alcohol-ácido resistente.

2. Indique la manera correcta de recolectar, el volumen y la conservación de

muestras de Esputo, esputo inducido, lavado gástrico y biopsia pulmonar.

ESPUTO
*Capacidad para 30 - 50 ml- Boca ancha
* Primera toma en la clínica – durante la visita inicial
Primera de la mañana En casa – primer esputo producido en la mañana del
segundo día de visita a la clínica (idealmente, el día posterior a la visita inicial)
Segunda de la mañana En casa – después de una hora de tomar la primera muestra
de la mañana tomar la segunda en lugares amplios y ventilados.
Tercera toma en la clínica – una muestra adicional tomada durante la segunda visita
LAVADO GASTRICO
En cuanto a la recogida de jugos gástricos, se debe realizar por la mañana después
de ayuno nocturno, se coloca una sonda nasogástrica a través de la cual se
administran 20 ml de suero salino fisiológico, durante 3 minutos, posteriormente se
realiza el aspirado, repitiendo el procedimiento con 5-10 ml de suero salino
fisiológico hasta conseguir un mínimo de 20 ml de aspirado en total.

ESPUTO INDUCIDO
se administra nebulización de suero salino hipertónico, se propone 5ml con un flujo
de 5 litros por minuto nebulizado durante 15 minutos, si tras este procedimiento no
existe expectoración espontánea, el esputo será conseguido a través de succión en
la nasofaringe, con un aspirador de secreciones.

BIOPSIA
Mycobacterium tuberculosis es una bacteria intracelular facultativa que
puede estar presente en macrófagos de la médula ósea, hígado, sangre
y ganglios linfáticos de pacientes con tuberculosis diseminada . Debido a
que las biopsias de tejidos en general no están contaminadas con otros
microorganismos, la muestra puede ser homogenizada e inoculados
directamente al medio de cultivo sin el empleo de una solución
descontaminante.

3. Indique 5 anormalidades que se puedan identificar durante la lectura de la

baciloscopia y puedan interferir con el resultado.

*BAAR que se mueven de forma anormal

*cuerpos extraños que se mueven con el portaobjetos
* restos de alimentos
*artefactos en movimiento
*otros bacilos que quedaron de baciloscopias anteriores en el aceite de inmersión

4. Como se debe realizar el control de calidad de las baciloscopias según el INS

y la OMS.
 Si se realizan mas de 10 baciloscopias por día, se debe repetir el control
arriba descrito (coloración de un extendido positivo y uno negativo) una vez
por semana
 Si se realizan menos de 10 baciloscopias por día se deben incluir los frotis
positivos y negativos como control diariamente

5. En que procesos clínicos el médico puede requerir un examen de Esputo,

justifique.

*expectoración por mas de 10 a 15 dias

*sudoración
*fiebre nocturna