Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA

Facultad de Farmacia y Bioquímica

Escuela Profesional de Toxicología

Cátedra de Bioquímica I

Tema:

Informe integrador RAE III

Docentes:

 Mg. Gloria Gordillo Rocha

 Dra. Gabriela Solano Canchaya
 Q.F. Christopher Cárdenas Hinojosa

Integrantes:

 Karina Aguilar Silva

 Orlando Aranda Palomino
 Christian Bautista
 Leonardo Rayme Gutiérrez

Mesa:

Mesa N° 1

Ciclo verano:

2019 – 0
MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD REDOX DE LA LDH EN SANGRE Y
CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES E INHIBIDORES

INTRODUCCIÓN:

Todos los procesos biológicos son dependientes de un pH; un pequeño cambio en el pH

produce un gran cambio en la velocidad del proceso. Esto no es solo es cierto para las
muchas reacciones en las que el H+ es un participante directo, sino también para aquellas en
las que aparentemente no juegan ningún papel. Las enzimas que catalizan las reacciones
celulares, y muchas de las moléculas sobre las que actúan, contienen grupo ionizables con
valores de pKa característicos. Las soluciones neutras (pH = 7) son las que tienen la misma
concentración de H+ y OH-. Las soluciones ácidas (tienen valores de pH inferiores a 7) son
las que tienen mayor concentración de H+ que de OH-, en cambio, las soluciones básicas
(tienen valores de pH superiores a 7) son las que tienen mayor concentración de iones OH-
que de H+ .1

Por otro lado, al trabajar con animales de laboratorio tienen que ser respetados y atendidos
como seres vivos por lo que sus necesidades deben ser cubiertas. Sabemos que la
experimentación animal se define como una actividad que tiene como misión evidenciar o
aclarar fenómenos biológicos sobre especies animales determinadas.2 No obstante, también
es toda acción de carácter científico o experimental que pueda llegar a suponer un ataque al
estado de bienestar del animal. Por eso, en la actualidad uno de los principales pilares de la
investigación con animales es evitar en lo posible el sufrimiento de los animales, aunque
sigue el debate bioético si deberíamos o no seguir ocupando animales en investigación 3.

Sabiendo lo anterior, el sacrificio de un animal para la obtención de muestras biológicas,

será óptimo. Dichas muestras serán utilizadas más adelante para la experimentación de
diversos parámetros bioquímicos como, el primer caso a estudiar, evaluar el contenido
proteico en una muestra biológica. En general, para la cuantificación de proteínas se pueden
emplear numerosos métodos. Cabe mencionar que el método debe seleccionarse
cuidadosamente ya que en muchas ocasiones la presencia de sustancias interferentes hace
necesaria la purificación de los componentes de las proteína7. Pero primero, obtendremos
las fracciones celulares y la extracción de proteínas nucleares presentes en el lisado nuclear,
para la cuantificación de proteínas, utilizando el método de Biuret y el espectrofotométrico,
obteniendo absorbancias para realizar una curva de calibración como método gráfico y
analítico.4

En el presente informe, veremos la preparación y capacidad amortiguadora de los sistemas

buffers, así como también de los fluidos biológicos. También observaremos los parámetros
para la experimentación con animales de laboratorio para obtener muestras biológicas que
serán utilizadas en la última práctica para la cuantificación de proteínas, finalizando con
una curva de calibración.5

OBJETIVOS:

— Entender y aplicar los conceptos REDOX en una muestra biológica.

— Determinar la actividad REDOX en fluidos biológicos: lactato deshidrogenasa en
sangre.
— Identificar la actividad de algunas enzimas específicas presentes en el tejido animal
como las enzimas citocromo oxidasa y la succínico – deshidrogenasa, mediante el
uso de aceptores electrónicos coloreados e identificar el efecto inhibitorio de
algunas sustancias sobre estos sistemas enzimáticos.
RESULTADOS:

PRÁCTICA Nº 11:

Figura 1. Obtención de la
muestra sanguínea obtenida por
punción venosa y centrifugada.

Calculamos el cambio de absorbancia por minuto (ΔA/min) y luego determinamos la

actividad lactato deshidrogenasa siguiendo las fórmulas siguientes:

Actividad LDH (𝑈𝐼/𝐿) = Factor × ΔA/ min Muestra

𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝐿𝐷𝐻 (𝑈𝐼/𝐿) = ΔA/min × 3376

DISCUSIÓN:

PRÁCTICA Nº 11:

PRÁCTICA Nº 12:
CONCLUSIONES:

—
CUESTIONARIOS:

PRÁCTICA Nº 11:

1. ¿Cuál es el rol metabólico del NAD y el FAD, y cómo se aplica eso en

bioenergética?
El NAD+ es una molécula orgánica compleja y está constituida por la unión de 2
moléculas de ribosa, una de adenina, una de niacina y dos de ácido fosfórico. El
NAD+ se diferencia del NADH, en que esta última tiene un par de electrones y un
protón más que NAD+, los cuales se insertan como un ión H-. Las reacciones en
donde interviene este compuesto son: en la glucólisis con la deshidrogenación del
gliceraldehído – 3 – fosfato y del piruvato; en el ciclo de Krebs, con la
deshidrogenación del isocitrato a α – cetoglutarato y malato en donde ingresa en la
forma NAD+ y sale como NADH, acompañado de un protón H+. El NAD es un
cofactor de las enzimas que catalizan las reacciones mencionadas.
Al igual que el NAD, el FAD es cofactor de algunas deshidrogenasas. Cuando
interviene en una reacción, pasa de la forma oxidada, FAD, a la forma reducida
FADH2, recibiendo un par de electrones del sustrato de la enzima. Los electrones
así obtenidos serán donados a la cadena respiratoria. El FAD, como el NAD, es un
dinucleótido del compuesto dinucleótido de flavina y adenina. Otro nucleótido que
integra el FAD tiene como base nitrogenada a la molécula de riboflavina. Para la
bioenergética, en los organismos aerobios, el oxígeno es el aceptor final de
electrones en el metabolismo.
PRÁCTICA Nº 12:

1. Explique el efecto del cianuro sobre la citocromo oxidasa.

El cianuro bloquea el transporte electrónico en el complejo IV, citocromo oxidasa.
Este inhibidor también detiene el consumo de O2. El ión cianuro, CN-, se une al Fe3+
de la citocromo oxidasa e impide que el oxígeno reaccione con el citocromo a, a3 y
sirva como aceptor último de electrones, inhibe el transporte de electrones. Cesan la
respiración mitocondrial y la generación de energía y se produce la muerte celular.
Esta muerte tiene lugar por asfixia tisular, especialmente del sistema nerviosos
central. Se sintetiza mediante la enzima mitocondrial rodanasa que participa en la
transferencia de azufre desde el tiosulfato hasta el cianuro para producir tiocianato
(un compuesto menos tóxico), y sulfito.
RODANASA
CN- + S2O32- SCN- + SO 32-
La inhalación o la ingestión de ácido cianhídrico gaseoso o cianuro de potasio
produce una rápida inhibición de la cadena de transporte electrónico mitocondrial a
nivel de la citocromo oxidasa. El cianuro es uno de los venenos más tóxicos y de
acción más rápida que se conoce.

2. Explique el efecto del succinato y el malonato sobre la acción de la enzima

succinato – deshidrogenasa.
El complejo II, que contiene la enzima del ciclo del ácido cítrico succinato
deshidrogenasa, traslada los electrones desde el succinato hasta la CoQ. Sus grupos
redox comprenden el FAD unido covalentemente a la succinato deshidrogenasa. La
inhibición competitiva de la enzima succinato deshidrogenasa se da ya que esta
cataliza la deshidrogenación del succinato para dar fumarato, y ciertos compuestos
con estructura química similar a la del succinato como el malonato y el oxalacetato
actúan como inhibidores reversibles de la enzima succinato deshidrogenasa. Tanto
el malonato como el oxalacetato, que poseen dos grupos carboxilos ionizados a
 pH7, pueden ocupar el sitio activo de la enzima, impidiéndole actuar sobre el
sustrato normal.

BIBLIOGRAFÍA:

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