LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

LABORATORIO 7. SEPARACIÓN DE AMINOACIDOS POR

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Nombre: Ingrid Moreno – Paula Gómez NOTA: 4.3/5.0

I. OBJETIVOS

 Separar e identificar los aminoácidos presentes en muestras

vegetales utilizando la técnica de cromatografía en capa delgada
CCD.
 Familiarizarse con los fundamentos de las separaciones
cromatografícas

Cromatografía Espinaca
.

Tabla 1. Cromatografía
Compuesto No. Distancia al Distancia al Rf Nombre del
centro de la límite del compuesto
mancha solvente probable

1. Serina. 1.5 cm 7.0 cm

2. Arginina. 1.0 cm 7.0 cm
3. Ácido 2.5 cm 7.0 cm 0.357
glutámico.
4. Prolina. 3.0 cm 7.0 cm 0.428
5. Leucina. 5.0 cm 7.0 cm
6. Aspargina. 1.0 cm 7.0 cm
7. Isoleucina. 4.5 cm 7.0 cm 0.642
8. Histidina. 0.5 cm 7.0 cm 0.071
9. Alanina 2.5 cm 7.0 cm 0.357
Leucina
Arginina
Lisina
Aspargina
Glicina
Serina
13. Tirosina 3.0cm 7.0 cm 0.42
14. Valina 3.1cm 7.0 cm 0.44
15. Fenilalanina 4.1cm 7.0 cm 0.58
16. Lisina 1cm 7.0 cm
17. Metionina 3.6cm 7.0 cm 0.51
18. Glicina 1.4cm 7.0 cm
19. Treonina 2.0cm 7.0cm 0.28
20. Triptofano 4.0 cm 7.0 cm 0.57

1. Determine la cantidad de aminoácidos diferentes que encontró por

cromatografía en la muestra problema.
Muestra Problema A: Encontramos que el aminoácido probable es la Leucina
porque su Rf son iguales.
Muestra Problema B: Encontramos que los aminoácidos probables son la
Arginina, Lisina, Aspargina porque su Rf son iguales.
Muestra Problema C: Encontramos que los aminoácidos probables son la Glicina
y la Serina porque su Rf son iguales.

2. Calcule los valores de Rf de todas las señales de los patrones y las

muestras.
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 (𝑥)
Rf = 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒 (𝑦)

i) Serina
1.5𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.21
7.0𝑐𝑚
ii) Arginina
1.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.14
7.0𝑐𝑚

iii) Acido Glutámico

2.5𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.35
7.0𝑐𝑚

iv) Prolina
3.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.42
7.0𝑐𝑚

v) Leucina
5.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.71
7.0𝑐𝑚

vi) Aspargina
1.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 1.14
7.0𝑐𝑚

vii) Isoleucina
4.5𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.64
7.0𝑐𝑚

viii)Histidina
 0.5𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.071
7.0𝑐𝑚

ix) Alanina
2.5𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.35
7.0𝑐𝑚

x) Muestra problema A
5.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.71
7.0𝑐𝑚

xi) Muestra problema B

1.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.14
7.0𝑐𝑚

xii) Muestra problema C

1.7𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.24
7.0𝑐𝑚

xiii)Tirosina
3.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.42
7.0𝑐𝑚

xiv) Valina
3.1𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.44
7.0𝑐𝑚

xv) Fenilalanina
4.1𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.58
7.0𝑐𝑚

xvi) Lisina
1.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.14
7.0𝑐𝑚
 xvii) Metionina
3.6𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.51
7.0𝑐𝑚

xviii) Glicina
1.4𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.2
7.0𝑐𝑚

xix) Treonina
2.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.28
7.0𝑐𝑚

xx) Triptofano
4.0𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0.57
7.0𝑐𝑚

3. Compare los valores de Rf de las señales obtenidas en la muestra

problema con los correspondientes patrones e identifique hasta donde
sea posible los componentes de cada muestra.

Leucina
Arginina
Lisina
Aspargina
Glicina
Serina
A partir de los Rf que obtuvimos en cada correspondiente patrón y de la
muestra problema (espinaca), se deduce que los Rf de la muestra problema
contienen estructuras de aminoácidos y estos nombres parten a través de
los Rf de los patrones. En el caso de la muestra A se compara el Rf con la
de la Leucina, en la muestra B se compara con Arginina, Lisina, Aspargina
y de la muestra C se compara con la Glicina y Serina; esto es porque los Rf
son exactamente iguales.

4. Consulte en la literatura, los valores de Rf para sistemas

cromatográficos similares ( fase estacionaria u fase móvil similar) y
analice que tan válida es la comparación con los valores por usted
obtenidos
 5. Realice y explique la reacción de ninhidrina con uno de los
aminoácidos identificados en la muestra problema

Se utilizó la ninhidrina debido a que sirve para la determinación de aminoácidos

con el grupo amino libre. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con
aminoácidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formación de
amoniaco y anhídrido carbónico, con reducción del reactivo de ninhidrina a
hidridantina. La hidridantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molécula
de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta una coloración
púrpura. La ninhidrina reacciona con los aminoácidos formando las coloraciones
con respecto a las reacciones.

La ninhidrina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molécula de ninhidrina

para dar un compuesto de adición doble que presenta una coloración púrpura, con
la excepción de la Prolina y Aspargina, que da una coloración amarillenta (poseen
un grupo amino sustituido).
Esta técnica de separación de cromatografía nos permite observa la reacción
producida por medio de la ninhidrina que permite identificar los aminoácidos ya
que la reacción de estos, con ninhidrina se debe a la presencia del grupo α–NH 2,
observando así una coloración morada. Con respecto a la Prolina no tiene dicho
grupo libre, sino –NH- ya que forma parte del anillo pirrodilina, y al reaccionar con
ninhidrina se forma con un color amarillo.
El factor de retención depende de la afinidad de los aminoácidos con el disolvente
utilizado, dependiendo de esta manera de la polaridad de los aminoácidos
utilizados.
 6. Realice las estructuras de todos los aminoácidos usados en la
práctica, analice estructuras y establezca cual fue el orden de
migración, es decir, ¿Cuáles aminoácidos migraron más, los mas
polares o los menos polares y por qué cree usted que fue así de
acuerdo con las condiciones de la cromatografía en cuanto a
polaridad de la fase estacionaria y móvil?

Para los análisis de resultados, obtenemos la clasificación de aminoácidos según

su polaridad de la siguiente manera:

Aminoácido Aminoácido
1. Serina- POLAR. 2. Arginina- POLAR.

3. Ácido glutámico-POLAR. 4. Prolina-NEUTRO

5. Leucina-APOLAR 6. Aspargina-IONICO
7. Isoleucina-APOLAR. 8. Histidina-BÁSICO POLAR.

9. Alanina NEUTRO APOLAR 10. Tirosina NEUTROS

AROMATICOS

11. Valina NEUTROS 12. Fenilalanina NEUTROS

APOLARES AROMATICOS

13. Lisina-BÁSICO POLAR. 14. Metionina NEUTROS

APOLARES

15. Glicina NEUTRO 16. Treonina POLAR

APOLARES
 17. Triptofano NEUTRO
AROMATICO

La cromatografía de líquidos se utilizaba para separar compuestos polares, siendo

la fase estacionaria de un carácter altamente polar y la fase móvil poco polar. En
este caso los mas polares son las serina, argininia, acido glutámico, treonina.

Los aminoácidos apolares como se logran observar en la imagen 2, es decir, 5

Leucina y 7 Isoleucina. Son los que mejor interactúan con el solvente y son
arrastrados con mayor facilidad por él. Al determinar los factores de retención se
puede observar que la Leucina es la muestra que mayor factor de retención
obtuvo, esto debido a que tiene mayor afinidad por el disolvente y menor factor de
retención fue el de la Histidina, es decir, tuvo menor afinidad por el disolvente
(Esquivel)
Conclusiones
 Se logró concluir que el factor de retención obtenido se debe a que
dependiendo de las característica de cada aminoácido, presentando cada
uno su polaridad tendrán un factor mayor o menor de retención, esto debido
a que un factor de retención alto indica gran afinidad del compuesto por el
disolvente y si el eluyente es polar va a arrastrará consigo a los compuestos
polares, por lo contrario si no es polar, entonces arrastrará a los
compuestos no polares.
 Se puede tener en cuenta que para la espinaca los aminoácidos presentes
son la Leucina, Arginina, Lisina, Aspargina y con la Glicina y Serina.
(Farmacia, 2015)
(Sanchez)

Bibliografía
Esquivel, E. (s.f.). Metodos fisioquimicos. Obtenido de
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_fase_reversa.pdf

Farmacia. (2015). Panamericana Tomo1.

Sanchez, K. (s.f.). Cromatografía de capa delgada. Obtenido de

https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf