Diseño de un nuevo complejo de Cu (II) que contiene CNC-Pinza-Vitamina

conjugados B3 y B7 para la aplicación del cáncer de mama

Estudiante: Juan Pablo Chiquito Loaiza.

Introducción.
El cáncer de mama está conformado por un grupo de neoplasias malignas que tiene su
origen en la proliferación acelerada a causa de pérdida del control del ciclo celular por
alteración en algunos genes, y en otros casos por razones desconocidas. Puede estar
localizado a nivel de los ductos o los lobulillos siendo el ductal el más frecuente. El término
«Carcinoma in situ» se refiere al tipo de cáncer que se encuentra confinado en la luz de los
ductos o de los lobulillos glandulares, sin invadir los tejidos vecinos. El cáncer de mama se
presenta tanto en hombres y mujeres, aunque el cáncer de mama femenino es más
frecuente.1
Existen distintos fármacos utilizados para el tratamiento del cáncer, entre ellos se encuentra
el cisplatino un medicamento importante y muy utilizado a nivel clínico. El cisplatino se
caracteriza por ser un complejo neutro, es decir, no tiene la capacidad de reaccionar, por lo
que se dirige a la zona donde se localiza el tumor sin sufrir una previa reducción. Una vez
que el cisplatino se encuentra en la zona tumoral se metaboliza en el interior celular,
resultando un compuesto citotóxico.2
El ion Cu presenta una importancia biológica ya que se encuentra en fármacos y en rutas,
incluyendo metabolismo, respiración mitocondrial, enfriamiento de especies reactivas de
oxígeno (ROS), desarrollo de neurotransmisores y participante en reacciones de oxidación-
reducción. Numerosos complejos de Cu se han propuesto como fármacos anticancerígenos
para diferentes acciones en comparación con el fármaco platino. En general, los complejos
Cu podrían aplicarse como alternativas a los agentes de platino anticancerígenos. Datos
recientes proporcionan un amplio espectro de la actividad anticancerígena de los complejos
de Cu (II), incluida la actividad contra múltiples células de cáncer de mama.3
Complejos metálicos de ligandos de carbeno N- heterocíclicos (NHC) han sido aprobados
como posibles medicamentos contra el cáncer con alta selectividad hacia las mitocondrias.
La química de complejos organocobre (I) / (II) ha llamado mucho la atención y ha sido
explorado en la literatura. Algunos casos de complejos de carbeno, Cu (II)- N- heterocíclico
(NHC), han sido descritos. Sin embargo, las propiedades anticancerígenas de estos
compuestos rara vez han sido investigadas.4
El sistema de entrega comúnmente implica un reconocimiento tumoral y focalización con
captación específica en células cancerosas utilizándose restos vitamínicos tales como
biotina, riboflavina, vitamina B12 y ácido fólico.
Aquí, el nuevo diseño y las propiedades biológicas de un complejo Cu (II), es decir,
[Cu(CNC-B3) (IM-B7)] (PF6)2 que contiene CNC-B3 (L2) = CNC-pinza-vitamina B3 y
IM-B7 (L3) = 1H-imidazol-1-metanamina-vitamina B7 se han reportado conjugados para la
aplicación de cáncer de seno.
Estructura de los complejos.
Las especies como el ion [Ag(NH3)2]+, que son conjuntos de un ion metálico central unido
a un grupo de moléculas o iones que lo rodean, se llaman complejos metálicos o
sencillamente complejos. Si el complejo tiene una carga eléctrica neta, se le designa en
general como un ion complejo Los compuestos que contienen complejos se conocen como
compuestos de coordinación. Aunque los metales de transición sobresalen en la formación
de compuestos de coordinación, otros metales también los pueden formar.
Las moléculas o iones que rodean el ion metálico en un complejo se conocen como agentes
acomplejantes o ligandos (de la palabra latina ligare, que significa “unir”). Por ejemplo, hay
dos ligandos NH3 unidos a la Ag+ en el ion [Ag(NH3)2]+. Los ligandos son normalmente
aniones o moléculas polares; además, tienen al menos un par no compartido de electrones
de valencia.
Al formar un complejo, se dice que los ligandos se coordinan al metal. El metal central y
los ligandos unidos a él constituyen la esfera de coordinación del complejo. Al escribir la
fórmula química de un compuesto de coordinación, usamos paréntesis rectangulares para
separar los grupos que están dentro de la esfera de coordinación de otras partes del
compuesto. Por ejemplo, la fórmula [Cu(NH3)4]SO4 representa un compuesto que contiene
el catión [Cu(NH3)4]2+ y el anión SO42- Los cuatro ligandos NH3 del catión complejo están
unidos directamente al ion cobre (II) y se encuentran en la esfera de coordinación del
cobre.5
Importancia biológica del Cobre
El cobre presenta más de un estado de oxidación, participa en reacciones de oxidación-
reducción y forma complejos con proteínas por la numerosa capacidad de coordinación
gracias a las cuales puede adaptarse fácilmente a los ligandos con átomos dadores de
azufre, nitrógeno y oxígeno, como los aminoácidos de las proteínas. Todos los fluidos del
cuerpo contienen complejos de cobre. Entre 80 y 60 mg de cobre constituyen las proteínas,
no como ion libre, sino formando parte principalmente de las enzimas que participan en
procesos biológicos, tales como el metabolismo del hierro, formación de colágeno, síntesis
de hemoglobina, entre otros. Los complejos de cobre pueden potenciar la acción
antiinflamatoria de ciertos fármacos y se ha comprobado que pueden inducir “in vitro” los
procesos de apoptosis con lo que se confirma la actividad anticancerosa de algunos quelatos
de cobre.6
Síntesis del complejo de Cobre (II)
Ligando L1 fue sintetizado por acoplamiento de ácido nicotínico con 2,6-dibromo-4-
aminopiridina usando el método reportado en la literatura (esquema 1). Se preparó el
ligando de sal de imidazolio L2 por L1 y 1-metilbencimidazol (esquema 1).
Adicionalmente, la biotina se cambió a una amida (ligando L3) a través de la reacción con
cloruro de oxalilo y luego agregando 1H-imidazol-1-metan-amina (esquema 2). El
complejo Cu (II) fue sintetizado por la reacción de transmetalización de la sal de imidazolio
L2 y Ag2O seguido de la adición de CuCl2 en presencia de L3 en diclorometano (esquema
3)
Esquema 1. Estructuras de L1 y L2 y su método de preparación
Esquema 2. Estructura de L3 y su método de
preparación

Esquema 3. Estructura del Complejo Cu (II) y su método de preparación

Estudio de la interacción de ADN
Los complejos con ADN pueden proporcionar información valiosa sobre el desarrollo de
medicamentos efectivos. Por lo tanto, UV-visible, titulación por absorción y la
espectroscopia de fluorescencia fueron realizados para explorar la interacción de complejos
metálicos con el ADN. Los espectros UV-visibles del complejo Cu (II) en diferentes
concentraciones de ADN del tumor circulante (CT) son presentados en la Figura 3. La
banda de absorción del complejo de Cu (II) exhibido hipocromismo disminuido y menor
batocromismo como resultado del aumento del ADN de CT concentración. Los resultados
de la absorción UV-visible valoración especificó la interacción del complejo Cu (II) con
ADN. Además, los espectros de absorción del sistema Cu (II)-Tris muestran la intensidad
máxima a 630 nm a pH 7.0. Como esta banda está ausente en los espectros durante la
adición del ADN CT al complejo Cu (II) en el tampón Tris-HCl (Figura 3), no hay ningún
complejo Cu (II)-Tris en la solución para interactuar con el ADN CT, permaneciendo
intacto tras la interacción con el ADN CT. El valor Kb del complejo Cu (II) obtenido de la
absorción fue 1.25 (± 0.17) × 105 M−1. El presente complejo confirmó el mayor valor de Kb
que el del complejo de Cu (II) de terpiridina (como ligando N, N, N -tridentado) (1.83 ×104
−5,69 × 104 M−1). Esto muestra que la pinza CNC ligando puede tener un efecto sobre la
capacidad de unión del ADN a los complejos. Para explorar más a fondo el modo de
interacción de unión al ADN, los experimentos de desplazamiento de bromuro de etidio
(EB) fueron realizados. Los espectros de fluorescencia del sistema EB-DNA al agregar el
complejo Cu (II) se presentan en la Figura 4. Se observó una reducción significativa en la
intensidad de fluorescencia de EB a 587 nm con la creciente concentración del complejo Cu
(II). Esta observación confirmó el desplazamiento de la EB unida al ADN por el complejo
Cu (II). La Kq y Los valores de Kapp de la aplicación del complejo Cu (II) fueron 1.18 (±
0.05) × 105 y 5.84 (± 0.05) × 105 M−1, respectivamente.

Figura 3. Espectros visibles con rayos UV del Figura 4. El enfriamiento por fluorescencia
complejo Cu (II) (10 m) en el tampón Tris-HCl con de la EB se une al ADN (10 m) en presencia
concentraciones de ADN CT crecientes (0 a 100 del complejo Cu (II) (0 a 50 μM).
μM). La flecha muestra la disminución de las
intensidades de absorción con el aumento de la
concentración de ADN.
Estudios de Atraque de ADN y HSA.
Los estudios de acoplamiento molecular se utilizan para considerar sitios en el ligando de
interacción con el receptor para diferentes propuestas. Estos estudios de investigación
desarrollan bolsas de unión para la interacción y todas las combinaciones de todos los sitios
de unión a través de la interacción de ligandos Modos. Además, es posible obtener
distancias de unión, fuerzas de unión y átomos de unión entre los receptores y diferentes
ligandos.
Estudio de interacción de ADN
La interacción con el complejo se muestra en la Figura 5a, que indica interacción en el
surco mayor. Las bases del ADN con las principales interacciones se calcularon en dos y
tres representaciones dimensionales (Figura 5 b, c). Existen cuatro bandas de hidrógeno en
la interacción con el complejo, que son indicadas por líneas verdes. Bases DA5, DC3,
DA20 y DG26 tienen bandas de hidrógeno de longitudes 3.31, 2.89, 3.18 y 2.93 Å,
respectivamente, entre N y O átomos. De acuerdo con la figura 6b, las interacciones
hidrofóbicas son interacciones importantes en el sitio de unión activa.

Figura 5. (a) Mejor posición para la interacción del complejo Cu (II) con el ADN. (b, c)
Vistas bidimensionales y tridimensionales de las bases dominantes del ADN interactuando
con el complejo Cu (II).
La energía libre de unión más baja (Δ G°b) y constante de unión (Kb) para las interacciones
se presentan en la Tabla 1 .Los resultados muestran una gran adaptación entre experimental
y datos teóricos
Tabla 1. Experimental y Teórica (Energía Libre, kcal mol-1) y Kb para ADN y HSA
Interacción con el complejo de Cu (II)

Estudios de citotoxicidad.
Las actividades citotóxicas de L2, L3 y el complejo Cu (II) han sido evaluados in vitro por
líneas celulares de cáncer de mama MCF-7 y MDA-MB-231 y MRC-5células no
tumorigénicas (fibroblastos de pulmón humano) (Tabla 2). La citotoxicidad se evaluó
mediante el ensayo MTT después de 48 h de tratamiento. Cisplatino, el mejor y más
utilizado medicamento contra el cáncer y Tamoxifeno, el medicamento para el tratamiento
de cáncer de mama, se utilizaron como estándar bajo mismas condiciones experimentales.
Los ligandos libres L2 y L3 fueron apenas eficaces contra las líneas celulares tumorales
MCF-7 y MDA-MB-231 (IC50 > 50 μM). Sin embargo, el complejo Cu (II) mostró una
citotoxicidad notable contra la línea celular del cáncer MCF-7, aproximadamente 6.75- y
19.12- pliegue más activo que el cisplatino y el Tamoxifeno.
Tabla 2. Actividad citotóxica de los compuestos

Además, el complejo Cu (II) fue 8,25- y 19,63- veces más activo que el cisplatino y el
Tamoxifeno contra la línea celular de cáncer MDA-MB-231, respectivamente. Los valores
IC50 del complejo Cu (II) fueron de 0,48 y 0,62 μM contra las líneas celulares de cáncer
MCF-7 y MDA-MB-231, respectivamente, lo que indica una mayor citotoxicidad tras la
complejidad y la presencia del ion Cu (II).
El complejo Cu (II) también se probó contra células no tumorigénicas, MRC-5, donde el
complejo era menos activo en células sanas que el cisplatino y el Tamoxifeno. El valor
calculado de SI (índice de selectividad) fue 78,58 y casi 18,15 y 34,7 veces mayor que el
obtenido para cisplatino y Tamoxifeno, respectivamente. Demostrándose así la eficacia del
complejo de Cu (II) para el tratamiento de cáncer de mama.
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