Replicación del ADN

Julián Camilo Riaño Moreno M.Sc

Universidad Cooperativa de Colombia
Facultad de medicina - Villavicencio
 Dogma Central de la BM

DNA
Transcripción
Replicación RNA FENOTIPO
GENOTIPO

Traducción PROTEÍNA
Objetivo de la replicación

• Transmisión de la
información genética
• Reproducción
• Mantenimiento tisular
• Libre de errores
 Proceso
semiconservativo
Cada hebra parental
sirve como molde
para la síntesis de
una nueva hebra
complementaria
¿Qué se necesita?
• Secuencia de Origen
• Nucleótidos
(Desoxinucleósidos 5´
trifosfato o dNTPs)
• Enzimas
DNA polimerasas
• Proteínas adicionales
• Primers o Cebadores (inicio
del proceso)
 Propiedades basadas en:
1. Dependencia de molde
2. Dependencia de primer o cebador
3. Actividad exonucleasa (eliminación)
– Síntesis de ADN en dirección 5' a 3‘
– Corrección de errores (lectura del molde) en
dirección 3' a 5'
Propiedades basadas en:
Origen y Horquilla de replicación
Origen y Horquilla de replicación
Origen y Horquilla de replicación
 Enzimas de la replicación
• Polimerasas: Reclutan los nucleótidos libres y
los aparean con el complementario de la hebra
parental.

”A partir de 60 kg de Escherichia
coli, logró obtener miligramos de
una enzima que él denominó ADN
polimerasa”
Premio Nobel de Fisiología o Medicina 1959

Arthur Kornberg – Severo Ochoa

 Enzimas de la replicación
ADN Polimerasas
• Sólo se mueven sobre un molde 3’ a 5’
polimerizando de 5’ a 3’
Bacterias:
ENZIMA FUNCIÓN
DNA Pol III Polimeriza el DNA Exonucleasa 3’ – 5’
Exonucleasa 5’ – 3’
DNA Pol I Rellena los gaps
Exonucleasa 3’ – 5’
DNA Pol II Revisa y repara Exonucleasa 3’ – 5’
 Enzimas de la replicación
• Polimerasas: Reclutan los nucleótidos libres y los
aparean con el complementario de la hebra
parental.
Eucariotas: todas tienen función exonucleasa 3’ – 5’
ENZIMA FUNCIÓN
ADN Pol α Síntesis del cebador (ADN primasa)
ADN Pol δ Polimerización
ADN Pol ε Polimerización
ADN Pol β Reparación
ADN Pol γ Síntesis ADN mitocondrial
 Replisoma
Equipo de enzimas y proteínas realizan la replicación.
 Replicación
Características Etapas
• Origen fijo
1. Iniciación
• Simultanea 2. Elongación
• Secuencial 3. Terminación
• Bidireccional
(polimerización
siempre de 5´a 3´)
 INICIACIÓN
Eventos:
1. Apertura de la doble hélice en el origen
de replicación
2. Creación de dos horquillas de
replicación
3. Síntesis de cebadores
 INICIACIÓN
Replicación en Escherichia coli

1. La replicación tiene lugar

a partir del origen de
replicación.

2. En las dos direcciones

3. Hasta terminar en el sitio

ter. Situado en el lugar
opuesto del cromosoma.
 INICIACIÓN
Replicación en Escherichia coli
Características del origen de replicación
Sec de 245 bp

Secuencias ricas en AT
GATCTNTTNTTTT
 INICIACIÓN
Replicación en Escherichia coli

El complejo pre-cebador se va a formar por la

unión secuencial de proteínas que van a abrir la
doble cadena.
 Helicasas que abrirán la
doble cadena en cada
horquilla, en una reacción
ATP-dependiente.
 INICIACIÓN
Replicación en Escherichia coli
Cadenas sencillas estabilizadas por proteínas
 INICIACIÓN
1. Múltiples orígenes de la replicación (Eucariotas)

Replicón Replicón Replicón Replicón Replicón

• Origen: Secuencia característica

• Replicón: Región del genoma que puede ser replicada a
partir de un mismo origen (50 a 100 kb)
 INICIACIÓN
Replicación en EUCARIOTAS
Replicón

Ori Ori Ori Ori Ori

50 – 100 Kb 50 – 100 Kb 50 – 100 Kb 50 – 100 Kb

 Múltiples orígenes de Replicación Ori, que se disponen a lo largo de un

cromosoma a distancias de 50 Kb a 100 Kb
 Unidad de Replicación ( 70 Kb ) = Replicón.
 INICIACIÓN
Replicación en EUCARIOTAS

3´ 5´
5´ 3´

3´ 5´
5´ 3´

La Replicación será Bidireccional en cada Burbuja de

Replicación, que tiene dos horquillas.
 INICIACIÓN
Replicación en EUCARIOTAS

Complejo de Reconocimiento de Ori

 INICIACIÓN
Replicación en EUCARIOTAS
La proteína RPA humana se une a cadenas sencillas estabilizándolas.

helicasa helicasa
5´
3´

3´ 5´

DNA Polimerasa α
Primasa

La Primasa forma un complejo con la DNA Polimerasa α para

formar un cebador RNA - DNA
 ELONGACIÓN
• Replisoma: Complejo de enzimas y factores proteicos
responsables de la replicación.
• Ambas hebras son copiadas al mismo tiempo
• ADN-Pol sintetizan en sentido 5´ a 3´
• Dependencia de cebadores (unidos por puentes de
hidrogeno)
ELONGACIÓN

Pol δ

Pol ε

Se requieren 2 moléculas de
DNA polimerasa
 ELONGACIÓN
1. Síntesis del Cebador:
http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072437316/student_view0/chapter14/animations.html
http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072437316/student_view0/chapter14/animations.html
 ELONGACIÓN
1. Fragmentos de Okazaki
http://www.youtube.com/watch?v=-mtLXpgjHL0
https://www.youtube.com/watch?v=bee6PWUgPo8
 TERMINACIÓN
Cuando las horquillas de replicación alcanzan las
horquillas de los replicones contiguos
1. Degradación de los cebadores (ARN)
– Polimerasa I
– RNAasa H

2. Rellenar lo que hace falta:

– Polimerasa δ
– Polimerasa ε (Cadena Rezagada)

3. Cerrar los GAPS (brechas) en la hebra retrasada.

– Ligasa
5´
TERMINACIÓN
- Polimerasa I
3´ - RNAasa H 3´
5´
3´
5´ 5´
3´

5´
- Polimerasa δ
- Polimerasa ε
3´
3´
GAP GAP 5´
GAP
3´
5´ 5´
3´ GAP
 5´ TERMINACIÓN
3´
DNA Ligasa 3´
OH OH OH 5´
3´
OH
5´
5´

3´
https://www.youtube.com/watch?v=hszZXlNY9Wc
¿Preguntas?