Cromatograf�a de gases

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Un equipo de cromatograf�a gaseosa.

La cromatograf�a de gases es una t�cnica cromatogr�fica en la que la muestra se

volatiliza y se inyecta en la cabeza de un mechero de una columna cromatogr�fica.
La eluci�n se produce por el flujo de una fase m�vil de gas inerte. A diferencia de
los otros tipos de cromatograf�a, la fase m�vil no interact�a con las mol�culas del
analito; su �nica funci�n es la de transportar el analito a trav�s de la columna.

Existen dos tipos de cromatograf�a de gases (GC): la cromatograf�a gas-s�lido (GSC)

y la cromatograf�a gas-l�quido (GLC), siendo esta �ltima la que se utiliza m�s
ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatograf�a de gases (GC). En la
GSC la fase estacionaria es s�lida y la retenci�n de los analitos en ella se
produce mediante el proceso de adsorci�n. Precisamente este proceso de adsorci�n,
que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatograf�a tenga
aplicaci�n limitada, ya que la retenci�n del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de eluci�n con colas. Su �nica aplicaci�n es la
separaci�n de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase
estacionaria mol�culas de l�quido inmovilizadas sobre la superficie de un s�lido
inerte.

La GC se lleva a cabo en un cromat�grafo de gases. �ste consta de diversos

componentes como el gas portador, el sistema de inyecci�n de muestra, la columna
(generalmente dentro de un horno), y el detector.
�ndice

1 Historia
2 Gas portador
3 Sistema de inyecci�n de muestra
4 Columnas y sistemas de control de temperatura
5 Detectores
6 Columnas y tipos de fases estacionarias
7 Aplicaciones
8 Montaje de t�cnicas
9 V�ase tambi�n
10 Bibliograf�a

Historia

La cromatograf�a data de 1903 en la obra del cient�fico ruso, Mija�l Tsvet. El

estudiante de doctorado alem�n Fritz Prior desarroll� la cromatograf�a de gas de
estado s�lido en 1947. Archer John Porter Martin, que fue galardonado con el Premio
Nobel por su trabajo en el desarrollo de la cromatograf�a l�quido-l�quido (1941) y
de papel (1944), sent� las bases para el desarrollo de la cromatograf�a de gas y
m�s tarde de la cromatograf�a l�quido-gas (1950). Erika Cremer sent� las bases y
supervis� gran parte del trabajo de Prior.
Gas portador
Diagrama de un cromat�grafo de gases

El gas portador cumple b�sicamente dos prop�sitos: Transportar los componentes de

la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe
reunir ciertas condiciones:

Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusi�n gaseosa
F�cilmente disponible y puro
 Econ�mico
Adecuado al detector a utilizar...

El gas portador debe ser un gas inerte, para impedir su reacci�n con el analito o
la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, arg�n, nitr�geno,
hidr�geno o di�xido de carbono, y la elecci�n de este gas en ocasiones depende del
tipo de detector empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o
empleando un generador, especialmente en el caso del nitr�geno y del hidr�geno.
Luego tenemos un sistema de man�metros y reguladores de flujo para garantizar un
flujo estable y un sistema de deshidrataci�n del gas, como puede ser un tamiz
molecular.

Generalmente la regulaci�n de la presi�n se hace a dos niveles: un primer man�metro

se sit�a a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del
cromat�grafo, donde se regula el flujo. Las presiones de entrada var�an entre 10 y
25 psi, lo que da lugar a caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1
a 25 mL/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede utilizar un
rot�metro o un simple medidor de pompas de jab�n, el cual da una medida muy exacta
del caudal volum�trico que entra a la columna.

La pureza de los gases es sumamente importante, se requieren niveles 4.5 o mayores

es decir 99.995 % de pureza. Sin embargo, debido al cuidado que se debe tener con
la fase activa de la columna, se hace completamente necesario la instalaci�n de
trampas a la entrada del gas portador, estas trampas obviamente tienen una
capacidad limitada, pero son important�simas al momento de usar el cromatografo.
Estas trampas evitan el ingreso de hidrocarburos, agua y CO entre otros.
Sistema de inyecci�n de muestra

La inyecci�n de muestra es un apartado cr�tico, ya que se debe inyectar una

cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tap�n de vapor") que
sea r�pida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da
con cantidades elevadas de analito. El m�todo m�s utilizado emplea una microjeringa
(de capacidades de varios microlitros) para introducir el analito en una c�mara de
vaporizaci�n instant�nea. Esta c�mara est� a 50 �C por encima del punto de
ebullici�n del componente menos vol�til, y est� sellada por una junta de goma de
silicona septa o septum.
Inyector de muestra para un GC

Si es necesaria una reproducibilidad del tama�o de muestra inyectado se puede usar

una v�lvula de seis v�as o v�lvula de inyecci�n, donde la cantidad a inyectar es
constante y determinada por el tama�o del bucle de dicha v�lvula.
Un muestreador autom�tico para emplear la t�cnica de Espacio de Cabeza o Head Space
para GC (accesorio).

Si la columna empleada es rellena, el volumen a inyectar ser� de unos 20 �L, y en

el caso de las columnas capilares dicha cantidad es menor, de 1 �L, y seg�n el tipo
de columna capilar (ya que existen columnas de distinto di�metro interno) es que si
se utiliza todo el volumen de muestra inyectado. Para obtener menor cantidad de
volumen, se utiliza un divisor de flujo (la inyecci�n se conoce como modo "split")
a la entrada de la columna que desecha parte del analito introducido. Si se utiliza
todo el volumen de muestra la inyecci�n es de tipo "splitless". El modo splitless
se emple� m�s para determinar cantidades peque�as o trazas (determinaciones
ambientales).

Si se inyecta 1 microlitro de solvente -por ejemplo agua-, al pasar a la fase vapor

su volumen se multiplicar� por mil. Es decir, un microlitro de agua pasar�a a ser 1
mL de agua en gas; como el volumen del puerto de inyecci�n es limitado, se emplean
split pulsado u otras configuraciones para garantizar el ingreso adecuado de las
muestras.
En caso de muestras s�lidas, simplemente se introducen en forma de disoluci�n, ya
que en la c�mara de vaporizaci�n instant�nea el disolvente se pierde en la
corriente de purga y no interfiere en la eluci�n.

Seg�n las curvas de Van Demter (HEPT vs. Velocidad Lineal), el mejor gas a usar en
la columna cromatogr�fica como portador de los analitos es el hidr�geno, sin
embargo dada su peligrosidad, es m�s usado como gas de encendido en el detector
FID, junto con el aire. Luego vienen, respectivamente, helio y nitr�geno.

El gas hidr�geno es el mejor portador y los flujos que manejan los cromat�grafos no
son peligrosos, adem�s a la salida de estos generalmente existen restrictores de
llama que evitan la propagaci�n de un posible incendio. Se puede recomendar el uso
de hidr�geno debido a, primero por su bajo precio respecto a los otros gases y por
la resoluci�n de los picos que se muestran en los cromatogramas.

La relaci�n para la ignici�n entre hidr�geno y aire es de 4,1% para el l�mite

inferior y del 74,8% para el superior a 101,3Kpa y 298K (Safety Standard for
Hydrogen and Hydrogen Systems, NASA), y se tiene que estar en presencia de una
chispa o zona de calentamiento alta (desde 520�C).
Columnas y sistemas de control de temperatura

En GC se emplean dos tipos de columnas: las empacadas o de relleno y las tubulares

abiertas o capilares. Estas �ltimas son m�s comunes en la actualidad (2005) debido
a su mayor rapidez y eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a
60 metros, y est�n construidas de acero inoxidable, vidrio, s�lice fundida o
tefl�n. Debido a su longitud y a la necesidad de introducirlas en un horno, las
columnas suelen enrollarse en una forma helicolidal con longitudes de 10 a 30 cm,
dependiendo del tama�o del horno.

La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de

separaci�n de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisi�n
de d�cimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullici�n del analito
o analitos, como tambi�n la m�xima temperatura de funcionamiento de la columna
(fase estacionaria), y por lo general se ajusta a un valor igual o ligeramente
superior a �l. Para estos valores, el tiempo de eluci�n va a oscilar entre 2 y 30-
40 minutos. Si tenemos varios componentes con diferentes puntos de ebullici�n, se
ajusta la llamada rampa de temperatura con lo cual �sta va aumentando ya sea de
forma continua o por etapas. En muchas ocasiones, el ajustar correctamente la rampa
puede significar separar bien o no los diferentes analitos. Es recomendable
utilizar temperaturas bajas para la eluci�n, ya que -aunque a mayor temperatura la
eluci�n es m�s r�pida- se corre el riesgo de descomponer el analito. Se puede
progamar la rampa tanto para aumentar como para disminuir la temperatura del horno
para que no haya solapamiento de los picos.
Detectores

El detector es la parte del cromat�grafo que se encarga de determinar cu�ndo ha

salido el analito por el final de la columna. Las caracter�sticas de un detector
ideal son:

Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisi�n cu�ndo sale

analito y cuando sale s�lo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-
15 g/s de analito.
Respuesta lineal al analito con un rango de varios �rdenes de magnitud.
Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.
Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde temperatura
ambiente hasta unos 350-400 �C, temperaturas t�picas trabajo.
Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe
dar salidas de se�al iguales.
 Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o
Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido n�mero de analitos.

Algunos tipos de detectores:

Detector de ionizaci�n de llama (FID, Flame Ionization Detector).

Detector de conductividad t�rmica (TCD, Thermical Conductivity Detector).
Detector termoi�nico (TID, ThermoIonic Detector).
Detector de captura de electrones (ECD, Electr�n-Capture Detector).
Detector de emisi�n at�mica (AED, Atomic Emission Detector).

Vista de un detector GC del tipo FID (desmontado).

Otros detectores minoritarios son el detector fotom�trico de llama (PFD), empleado

en compuestos como pesticidas e hidrocarburos que contengan f�sforo o azufre. En
este detector se hace pasar el gas eluido por una llama hidr�geno/ox�geno donde
parte del f�sforo se convierte en una especie HPO, la cual emite a ? = 510 y 526
nm, y simult�neamente el azufre se convierte en S2, con emisi�n a ? = 394 nm. Dicha
radiaci�n emitida se detecta con un fot�metro adecuado. Se han podido detectar
otros elementos, como algunos hal�genos, nitr�geno, esta�o, germanio y otros.

En el detector de fotoionizaci�n (PID), el gas eluido al final de la columna se

somete a una radiaci�n ultravioleta con energ�as entre 8,3 y 11,7 eV,
correspondiente a una ? = 106-149 nm. Mediante la aplicaci�n de un potencial a la
celda de ionizaci�n se genera una corriente de iones, la cual es amplificada y
registrada.
Columnas y tipos de fases estacionarias

Columnas de relleno

Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de vidrio, metal

(inerte a ser posible como el acero inoxidable, n�quel, cobre o aluminio) o tefl�n,
de longitud de 2 a 3 metros y un di�metro interno de unos pocos mil�metros,
t�picamente de 2 a 4. El interior se rellena con un material s�lido, finamente
dividido para tener una m�xima superficie de interacci�n y recubierto con una capa
de espesores entre 50 nm y 1 �m. Para que puedan introducirse en el horno, se
enrollan convenientemente.

El material de relleno ideal consiste en peque�as part�culas, esf�ricas y

uniformes, con una buena resistencia mec�nica, para tener una m�xima superficie
donde interaccionar la fase estacionaria y el analito. La superficie espec�fica
m�nima ha de ser de 1 m�/g. Como todos los componentes de columnas para GC, debe
ser inerte a altas temperaturas (~400 �C) y humectarse uniformemente con la fase
l�quida estacionaria durante el proceso de fabricaci�n. El material preferido
actualmente (2005) es la tierra de diatomeas natural, debido a su tama�o de poro
natural. Estas especies, ya extinguidas, utilizaban un sistema de difusi�n
molecular para tomar nutrientes del medio y expulsar sus residuos. Por lo tanto son
materiales especialmente �tiles, debido a que el sistema de absorci�n superficial
del analito y la fase estacionaria es parecido.

El tama�o es cr�tico a la hora de darse el proceso de interacci�n del analito, y a

menores tama�os la eficacia de la columna es mejor. Pero existe el problema de la
presi�n necesaria para hacer circular un caudal estable de gas portador por la
columna, ya que dicha presi�n es inversamente proporcional al cuadrado del di�metro
de dichas part�culas. As�, el tama�o m�nimo para usar presiones m�ximas de 50 psi
es de 250 a 149 �m.

Columnas capilares
Las columnas capilares son de dos tipos b�sicos: las de pared recubierta (WCOT) y
las de soporte recubierto (SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la
pared interna se ha recubierto con una fin�sima capa de fase estacionaria. Las
columnas SCOT tienen en su parte interna una fina capa de material absorbente como
el empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se ha adherido
la fase estacionaria. Las ventajas de las WCOT frente a las SCOT es la mayor
capacidad de carga, ya que en su fabricaci�n se emplean mayores cantidades de fase
estacionaria, al ser la superficie de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en
primer lugar est�n las WCOT, luego las SCOT y por �ltimo las columnas de relleno.

Las columnas WCOT se fabrican a partir de s�lice fundida, conocidas como columnas
tubulares abiertas de s�lice fundida o FSOT. Estas columnas se fabrican a partir de
s�lice especialmente pura, sin apenas contenido de �xidos met�licos. Debido a la
fragilidad inherente a este material, en el mismo proceso de obtenci�n del tubo se
recubre con una capa de poliimida, de esta forma la columna puede enrollarse con un
di�metro de unos pocos cent�metros. Estas columnas, con propiedades como baja
reactividad, resistencia f�sica y flexibilidad, han sustituido a las WCOT cl�sicas.

Las columnas FSOT tienen di�metros internos variables, entre 250 y 320 �m (para
columnas normales) y 150-200 �m para columnas de alta resoluci�n. Estas �ltimas
requieren menor cantidad de analito y un detector m�s sensible, al eluir menor
cantidad de gas. Existen asimismo columnas macrocapilares con di�metros de hasta
530 �m, que admiten cantidades de analito comparables a las de relleno pero con
mejores prestaciones.

En estas columnas existe un problema debido a la adsorci�n del analito sobre la

superficie de la s�lice fundida, adsorci�n debida a la presencia de grupos silanol
(Si-OH), los cuales interaccionan fuertemente con mol�culas polares org�nicas. Se
suele solventar este inconveniente inactivando la superficie por sililaci�n con
dimetilclorosilano (DMCS). La adsorci�n debida a los �xidos met�licos se ve paliada
en gran parte por la elevada pureza de la s�lice empleada.

La fase estacionaria

Las propiedades necesarias para una fase estacionaria l�quida inmovilizada son:

Caracter�sticas de reparto (factor de capacidad ?' y factor de selectividad a)

adecuados al analito.
Baja volatilidad, el punto de ebullici�n de la fase estacionaria debe ser al
menos 100 �C mayor que la m�xima temperatura alcanzada en el horno.
Baja reactividad.
Estabilidad t�rmica, para evitar su descomposici�n durante la eluci�n.

Existen como mucho una docena de disolventes con estas caracter�sticas. Para elegir
uno, debe tenerse en cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor polaridad del
analito, mayor polaridad deber� tener la fase estacionaria. Algunas fases
estacionarias utilizadas actualmente (2005) son:

Polidimetilsiloxano, fase no polar de uso general para hidrocarburos,

arom�ticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCB.
Poli(fenilmetildifenil)siloxano (10% fenilo), para �steres met�licos de �cidos
grasos, alcaloides, drogas y compuestos halogenados.
Poli(fenilmetil)siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides, pesticidas y
glicoles.
Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para arom�ticos clorados,
nitroarom�ticos, bencenos alquilsustituidos.
Polietilenglicol,sirve para compuestos polares, tambi�n para compuestos como
glicoles, alcoholes, �teres, aceites esenciales.
 Poli(dicianoalildimetil)siloxano, para �cidos grasos poliinsaturados, �cidos
libres y alcoholes.

Generalmente, en columnas comerciales, la fase estacionaria se presenta enlazada y

entrecruzada para impedir su p�rdida durante las operaciones de eluci�n o lavado.
De esta forma se obtiene una monocapa adherida qu�micamente a la superficie de la
columna. La reacci�n implicada suele ser la adici�n de un per�xido al l�quido a
fijar, inici�ndose una reacci�n por radicales libres que tiene como resultado la
formaci�n de un enlace carbono-carbono que adem�s incrementa su estabilidad
t�rmica. Otra forma es la irradiaci�n con rayos gamma.

Otro tipo de fase estacionaria son las quirales, lo cual permite resolver mezclas
enantiom�ricas. Este tipo de fases suelen ser amino�cidos quirales o alg�n derivado
adaptado al trabajo en columna.

El grosor de la pel�cula var�a entre 0,1 y 5 �m; el grosor depende de la

volatilidad del analito. As�, un analito muy vol�til requerir� una capa gruesa para
aumentar el tiempo de interacci�n y separar m�s efectivamente los diferentes
componentes de la mezcla. Para columnas t�picas (di�metros internos de 0,25 o 0,32
mm) se emplean grosores de 0,25 �m, y en las columnas macrocapilares el grosor sube
hasta 1 �m. El grosor m�ximo suele ser de 8 �m
Aplicaciones

La GC tiene dos campos de aplicaci�n importantes. Por una parte su capacidad para
separar mezclas org�nicas complejas, compuestos organomet�licos y sistemas
bioqu�micos. Su otra aplicaci�n es como m�todo para determinar cuantitativa y
cualitativamente los componentes de la muestra. Para el an�lisis cualitativo se
suele emplear el tiempo de retenci�n, que es �nico de cada compuesto en condiciones
determinadas (mismo gas portador, rampa de temperatura y flujo), o el volumen de
retenci�n. En aplicaciones cuantitativas, integrando las �reas de cada compuesto o
midiendo su altura, con los calibrados adecuados, se obtiene la concentraci�n o
cantidad presente de cada analito.
Montaje de t�cnicas

El montaje de una t�cnica anal�tica de CG es netamente emp�rico, el perfil de los

analitos que se quiera determinar, la elecci�n de la fase m�vil, los tiempos de
retenci�n (eluci�n) estar�n dados exclusivamente por las condiciones particulares
de la columna (fase estacionaria) frente al equipo. Las rampas de temperatura a
seleccionar bien pueden isot�rmicas o escalonadas.

La elecci�n del g�s depender� del tipo de detector, la elecci�n de la columna (fase
estacionaria) depender� de la polaridad de los compuestos a separar, el detector
depender� del tipo de compuestos a detectar.

Usualmente una t�cnica anal�tica de GC consumir� muchas horas de un cromatografista

en ser desarrollada e instalada por el m�todo del ensayo y error antes de ser
validada como real.

La elecci�n de los est�ndares es fundamental en el desarrollo de la t�cnica. La

estabilizaci�n de la l�nea base de la fase m�vil en la fase estacionaria
( posterior al frente del solvente) a trav�s del tiempo es fundamental para
establecer un m�todo. Una l�nea de base (solvente) poco estable o irregular que
cambia de intensidad frente al detector a medida que eluye debe ser afinada y
estabilizada antes de introducir los analitos.

El layout de los par�metros del rango de temperatura del horno, la adecuada

elecci�n de la columna y su fase estacionaria (incluye, tipo, largo y di�metro), la
elecci�n adecuada del tipo de detector, las temperaturas del detector e inyector,
los vol�menes de analito, deber�n ser establecidas de modo tal que se obtenga la
mayor eficacia en separar los analitos, y con la mejor resoluci�n posible. La
pureza de la muestra depender� de la preparaci�n previa de la misma.

La CG es una metodolog�a altamente efectiva y su perfomance permite una amplia gama

de posibiidades para la qu�mica anal�tica en compuestos org�nicos. Una derivaci�n
de esta t�cnica es la Cromatograf�a HPLC que funciona sobre la base de la afinidad
del analito por la fase m�vil l�quida en vez de gaseosa.

La sensibilidad de la t�cnica GC puede incluso detectar microgramos del analito si

est� bien montada. La cuantificaci�n se basa en c�lculos del �rea bajo la curva que
es proporcional a la concentraci�n del analito. Com�nmente se usa en est�ndar
interno de trabajo.