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microorganismos celulolíticos
Hernández González María1, Tirado Gallegos Juan Manuel1, Iliná Anna2, López
Trujillo Ramiro1, Rebolloso Padilla Oscar Noé1, Ruelas Chacón Xóchitl1.
Resumen
El presente estudio se llevo a cabo con la finalidad de extraer el colorante
bixina, presente en la semilla del achiote, ampliamente utilizado por la industria
alimentaria, mediante un tratamiento que ofrezca además de buenos rendimientos,
un producto libre de componentes tóxicos. El proceso se basa en el uso de
microorganismos productores de celulasas, capaces de degradar la pared celular
de las semillas donde se encuentra el pigmento para facilitar su liberación en un
medio acuoso, obteniéndose rendimientos del 81%, mayores a los ofrecidos por
extracción acuosa y ligeramente menores que los obtenidos con tratamiento ácido-
base, cuestionados por la comunidad Europea, obteniéndose una pasta que
muestra picos en el intervalo de los 1600 cm- 1 representativo de los grupos
carbonilos característicos de la estructura de la bixina.
Palabras clave: Bixina, achiote, microorganismos celulolíticos.
Abstract
This assay was carried out to extract bixine, a colorant attached to achiote
seeds, widely used in food industry, by a method which may offer besides good
yields, a toxin free product. The process is based on the use of cellulolytic
microorganisms able to degrade the seed’s cellular wall, where the pigment is
attached, in order to facilitate the pigments liberation in a watery medium. 81% of
the pigment was recovered, this percentage is higher than the one offered by the
aqueous treatment and lower than the one offered by the acid-basic procedure, not
well accepted by the European community. The final paste obtained showed peaks
near to 1600 cm-1 representative of the carbonyl groups characteristic of the bixine
structure.
Key words: Bixine, achiote, cellulolytic microorganisms
Introducción
El color de los alimentos es un atributo que tiene mucho peso dentro del
juicio del consumidor, este puede llegar a ser determinante para que un comestible
sea aceptado o rechazado. (Badui, 1993). La industria alimentaria utiliza una serie
de sustancias , mejor conocidas como aditivos; que tienen como función primordial
impartir alguna coloración en particular o simplemente resaltar la que por la
naturaleza tienen las materias primas o, en su caso, de los procesos tecnológicos
en la coloración del producto final.
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Los aditivos que son utilizados como sustancias colorantes pueden ser
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obtenidos
por síntesis química en la industria (colorantes sintéticos) o provenir de fuentes
naturales como los vegetales (colorantes o pigmentos naturales). En los últimos
tiempos los colorantes sintéticos han sido cuestionados debido a sus efectos
toxicológicos, inclusive algunos han sido eliminados de algunas legislaciones. Lo
anterior aunado a la tendencia que tienen los consumidores, sobre todo en los
países desarrollados, a consumir alimentos con un mínimo o nulo contenido de
sustancias sintéticas; ello ha provocado que el uso de colorantes naturales vaya
en aumento y sustituyendo a los sintéticos (Salas, 2003).
Para abastecer la creciente demanda de colorantes naturales sin problemas
de legislación, se procede a la extracción de los pigmentos presentes en los
tejidos vegetales o animales por medio de diferentes métodos, cada uno presenta
sus limitantes y ventajas.
El colorante obtenido de las semillas de achiote (Bixa orellana), esta
compuesto en su mayoría por el carotenoide bixina, que se utiliza en la industria
láctica, cárnica, condimentaría, cosmética, farmacéutica, etc.; es un colorante
natural exento de certificación. La extracción más rudimentaria se basa en un
lavado con agua en ebullición y a escala industrial se ha implementado un proceso
de extracción alcalino que es de fácil aplicación, pero que tiene el inconveniente
de que el producto final contiene al máximo 30 a 40% de pigmentos (Vázquez,
2001).
Las posibilidades de incrementar el rendimiento y la pureza del colorante
obtenido del achiote siguen siendo tema de estudio, se debe buscar un método de
extracción de fácil aplicación, que eleve el grado de rendimiento, dando como
resultado un extracto exento o con un mínimo de impurezas químicas, que
disminuya los riesgos que implica al consumidor el uso de solventes o los
tratamientos ácido – alcalinos.
Metodología experimental
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Los hongos fueron viabilizados en un medio líquido y posteriormente
inoculados en placas de agar carboximelticelulosa (CMC). Después de 7 días de
incubación a 28ºC se evaluó su actividad sobre la celulosa aplicando la técnica del
rojo congo de acuerdo con los lineamientos propuestos por Iliná (2002). De esta
etapa se logró seleccionar tres cepas para su posterior caracterización.
Resultados y discusión
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funcionar en el proceso de Biocatálisis como una fuente de carbono caracterizada
por fibras que pueden ser desdobladas por complejos enzimáticos presentes en
organismos como los hongos.
Los resultados obtenidos aplicando la técnica del rojo congo, para
seleccionar la cepa con mayor actividad celulolítica, fueron sometidos a un análisis
de varianza con una p<0.05; esto con la finalidad de elegir con mayor seguridad
cual o cuales microorganismo son los que más se adecuan a la investigación. Los
resultados del análisis se reportan en el cuadro número 1, como las medias
analizadas por la prueba de t-Student (p<0.05).
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Figura 1. Pasta colorante obtenida para cada tratamiento.
De la misma manera que en el análisis de varianza, se observa que la
interacción que ofrece el mayor rendimiento es cepa 7, pH 7 y temperatura de
35ºC, presentando 1.2 g de extracto colorante, los cuales contienen 0.022 g de
bixina total obtenidos a partir de una muestra de 2 g; por lo que se espera que de
100 g de semilla se obtengan 1.13 g de bixina lo que representa el 80.7 % de
extracción ya que la semilla contiene 1.4 g de bixina por 100 g de semilla como se
citó anteriormente.
En la figura 2 se muestra un espectro infrarrojo (IR) para la pasta colorante
recuperada, destacándose un pico sobresaliente cercano a 1600 cm -1, el cual es
representativo de los grupos carbonilos, así como un pico en el intervalo de los
1700 a 1880 cm-1 aproximadamente, representativo de los dobles enlaces
presentes en las estructuras orgánicas, características de la bixina.
105.2
100
715.39
1974.96
825.88
90
879.51
80 m 'b' esporas
70
2927.12
1266.98 772.05
%T
60
3271.00
1373.24
50 1598.96
40
30 1048.10
25.0
4000.0 3000 2000 1500 1000 600.0
cm-1
Conclusiones
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Aspergillus, lo cual fue confirmado al monitorear la formación y consumo de
azúcares totales y reductores presentando un comportamiento típico para este tipo
de hongos excretando la enzima al medio para obtener carbohidratos simples y
asimilarlos constantemente.
Fue posible establecer que las condiciones para el óptimo desarrollo
fúngico, con su consecuente efectividad en la degradación de la materia en
cuestión para facilitar la liberación del pigmento, fueron de pH 7 y temperatura de
35ºC, para la cepa 7 identificada como Aspergillus spp. Antes citado.
Comparando los procesos usando las otras cepas estudiadas y sin inóculo,
el tratamiento con Aspergillus resultó un 30% mas efectivo que los antes
mencionados.
Las condiciones antes citadas ofrecen un rendimiento de extracción de
bixina de hasta un 80 % comparado a lo obtenido con agua, e inferior al reportado
utilizando los métodos alcalinos, sin contener los residuos químicos tóxicos que se
presentan en dicha extracción, cuestionados recientemente por la unión Europea.
Literatura citada
AOAC. 1980. Oficial Methods of Análisis of the Association of Official Alytical Chemists. Thirteenth
edition. 353 p.
Badui, D. S. 1993. Química de los alimentos. Addison Wesley Longman de México, S. A. DE C. V.
México D. F., México.
Dubois, M., Guilles, K. A., Hamilton, J. K., Rebers, P. A. and Smith, F. 1956. “Colorimetric meted for
determination of sugars and related substances”. Anal. Chem. 28:530.
Iliná A. 2002. Manual de Prácticas de crédito 1 Introducción a la Biotecnología U. A. de C. 38 p.
Lynch, M. J. R., S. S. Mellor, D. L. Spare, D. P. Inwood, H. M. J. 1987. Métodos de Laboratorio. 2ª
ed. Vol 2. Ed. Nueva editorial interamericana. México, D. F. pp. 1446-1447.
Salas, G. L. 2003. Educación Alimentaria, manual indispensable en educación para la salud. Ed.
Trillas. México, D. F. pp. 97.
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determinación de lignina, celulosa y silicio por el método de permanganato. J. Anal. Chem.
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Vázquez, H. C. 2001. Estudio preliminar de la degradación de bixina en polvo en los diferentes
tipos de empaques y temperaturas establecidas. Tesis ING. Instituto Tecnológico de Villahermosa.
Villahermosa, Tabasco, México.
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