La cromatograf�a es un m�todo qu�mico de separaci�n para la caracterizaci�n de

mezclas complejas cuyo objetivo es separar los distintos componentes,la cual tiene
aplicaci�n en todas las ramas de la ciencia; es un conjunto de t�cnicas basadas en
el principio de retenci�n selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos
componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de
dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de partici�n de los
compuestos dan como resultado una retenci�n diferencial sobre la fase estacionaria
y, por tanto, una separaci�n efectiva en funci�n de los tiempos de retenci�n de
cada componente de la mezcla.

La cromatograf�a puede cumplir dos funciones b�sicas que se excluyen mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos m�s puros y que puedan ser
usados posteriormente (etapa final de muchas s�ntesis).
Medir la proporci�n de los componentes de la mezcla (finalidad anal�tica). En este
caso, las cantidades de material empleadas suelen ser muy peque�as.

�ndice
1 Historia
2 Clasificaci�n de los m�todos de separaci�n en cromatograf�a
3 T�rminos empleados en cromatograf�a[3]?
4 V�ase tambi�n
5 Referencias
6 Enlaces externos
Historia
La cromatograf�a, (proviene del griego ???�a chroma y ???f? gr�pho, que significan
respectivamente "color" y "escribir, registrar", literalmente "escritura de color",
o "registro de color") , fue empleada originalmente con sustancias coloreadas.

Ya en 1850, Runge describi� la formaci�n de zonas coloreadas cuando se depositaban

gotas de sustancias colorantes sobre papel secante, pero el desarrollo m�s
importante vino con los experimentos de Mija�l Tsvet1? (1872-1919), que emple� por
primera vez en 1906 el t�rmino "cromatograf�a". A comienzos del a�o 1903, Mija�l
Tsvet, bot�nico ruso, logr� separar una mezcla de pigmentos de plantas (clorofilas)
en una columna de carbonato de calcio. M�s tarde, en 1910, cromatografi� un
extracto de yema de huevo en una columna de inulina. Sus investigaciones, sin
embargo, no fueron utilizadas por otros investigadores hasta 1931. Esta demora
quiz� se debi� al hecho de que los trabajos de Tsvet fueron publicados en ruso y en
una revista que no ten�a amplia circulaci�n.

El r�pido desarrollo de la cromatograf�a como herramienta anal�tica sensible no

ocurri� hasta 1931, cuando Kuhn, con Lederer y con Winterstein, emple� la t�cnica
para el an�lisis de pigmentos de plantas, confirmando los primeros trabajos de
Tsvet y su predicci�n de que el caroteno no era una sola sustancia, sino una mezcla
de varios hom�logos estrechamente relacionados. Al mismo tiempo, el tama�o de las
columnas empleadas fue aumentando para poder recuperar los componentes separados.
La t�cnica, por lo tanto, no era solo anal�tica sino preparatoria.

La cromatograf�a en columna por estos tiempo ten�a aplicaciones limitadas, dado que
los componentes que se pod�an separar eran invariablemente l�pidos. Pasaron 10 a�os
antes de que Martin y Synge desarrollaran una t�cnica mediante la cual se pudieran
separar compuestos acuosos o hidrof�licos. Esto marc� un nuevo inter�s en la
t�cnica y en 1944 Consden, Gordon y Martin lograron separar mezclas complejas de
amino�cidos en papel y fueron premiados con el Premio Nobel por sus trabajos. Al
poco tiempo, en 1947, en Estados Unidos de Norteam�rica, la Comisi�n de Energ�a
At�mica dio a conocer informaci�n sobre el uso de la cromatograf�a de intercambio
i�nico para la separaci�n de productos de fisi�n nuclear.

El desarrollo m�s reciente en el campo de la cromatograf�a se deriva de los

trabajos de Stahl, quien en 1956 present� una t�cnica pr�ctica mediante la cual una
capa delgada s�lice gel, celulosa o al�mina era diseminada sobre una placa de
vidrio. Esta t�cnica, llamada cromatograf�a de capa fina, result� en un an�lisis
m�s r�pido y m�s sensible para el examen de mezclas complejas y, en muchos casos,
ha sustituido a otros m�todos similares m�s antiguos de cromatograf�a en papel
toche.

En 1959, Porath y Flodin introdujeron una nueva t�cnica llamada cromatograf�a de

filtraci�n de gel. Esta se ha convertido en una poderosa y nueva herramienta para
la separaci�n de sustancias de alto peso molecular, particularmente las prote�nas,
y ha encontrado muchas aplicaciones en los campos de la bioqu�mica, la medicina, la
fisiolog�a y la biolog�a. La mayor�a de las t�cnicas de filtraci�n en gel utilizan
columnas y recientemente se han hecho trabajos con una combinaci�n de filtraci�n en
gel y materiales de intercambio i�nico, logrando que las separaciones complejas
sean extremadamente r�pidas y eficientes.

Los primeros equipos de cromatograf�a de gases aparecieron en el mercado a mediados

del siglo XX. A su vez, la cromatograf�a l�quida de alta resoluci�n (HPLC High
Performance Liquid Chromatography, en ingl�s) comenz� a desarrollarse en los a�os
1960, aumentando su importancia en las d�cadas siguientes, hasta convertirse en la
t�cnica cromatogr�fica m�s empleada. Sin embargo esto se ir� modificando con el
paso de los a�os.

Clasificaci�n de los m�todos de separaci�n en cromatograf�a

Las distintas t�cnicas cromatogr�ficas2? se pueden dividir seg�n c�mo est�
dispuesta la fase estacionaria:

Cromatograf�a plana. La fase estacionaria se sit�a sobre una placa plana o sobre un
papel. Las principales t�cnicas son:
Cromatograf�a en papel
Cromatograf�a en capa fina
Cromatograf�a en columna. La fase estacionaria se sit�a dentro de una columna.
Seg�n el fluido empleado como fase m�vil se distinguen:
Cromatograf�a de l�quidos
Cromatograf�a de gases
Cromatograf�a de fluidos supercr�ticos
La cromatograf�a de gases se aplica a numerosos compuestos org�nicos. En el caso de
compuestos no vol�tiles, se recurre a procesos denominados de "derivatizaci�n", a
fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilicen en las condiciones de
an�lisis.

Dentro de la cromatograf�a l�quida, destaca la cromatograf�a l�quida de alta

resoluci�n (HPLC, del ingl�s High Performance Liquid Chromatography), que es la
t�cnica cromatogr�fica m�s empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad
de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene car�cter no polar, y la fase
m�vil posee car�cter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporci�n de
la misma o de otros disolvente polares, como por ejemplo, metanol). El nombre de
"reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta
de s�lice o al�mina, de car�cter polar, y por tanto la fase m�vil era un disolvente
org�nico poco polar. Una serie eluotr�pica es un rango de sustancias de diferentes
polaridades que act�an como fase m�vil y que permiten observar un mejor
desplazamiento sobre una fase estacionaria.

Separaci�n de clorofilas mediante cromatograf�a en papel

Tipos Fase m�vil Fase estacionaria
Cromatograf�a en papel L�quido Papel de celulosa.
Cromatograf�a en capa fina L�quido Gel de s�lice o al�mina.
Cromatograf�a de gases Gas Columnas capilares de s�lice fundida, con
recubrimientos internos de varios tipos de siloxanos enlazados, columnas
empaquetadas con tierras diatomeas hechas de tubos de vidrio o metal.
Cromatograf�a l�quida
en fase reversa L�quido (polar) Relleno de siloxano de octilo o siloxano de
octadecilo.
Cromatograf�a l�quida
en fase normal L�quido
(menos polar) Relleno de s�lice, al�mina o un soporte al que se unen
qu�micamente grupos polares (ciano, amino, etc).
Cromatograf�a l�quida
de intercambio i�nico L�quido (polar) Resinas de intercambio i�nico.
Cromatograf�a l�quida
de exclusi�n L�quido Relleno de peque�as part�culas de s�lice o pol�meros
con red de poros uniforme.
Cromatograf�a l�quida
de adsorci�n L�quido Part�culas finamente divididas de s�lice o de
al�mina.
Cromatograf�a de
fluidos supercr�ticos L�quido Columnas abiertas de s�lice fundida con
recubrimientos internos de varios tipos de siloxanos enlazados y de enlaces
cruzados.
T�rminos empleados en cromatograf�a3?
Analito es la sustancia que se va a separar durante la cromatograf�a.
Fase m�vil es la fase que se mueve en una direcci�n definida. Puede ser un l�quido
(cromatograf�a de l�quidos o CEC). un gas (cromatograf�a de gases) o un fluido
supercr�tico (cromatograf�a de fluidos supercr�ticos). La muestra que se est�
separando/analizando (formada de analito/s y el disolvente) se inyecta en la fase
m�vil que se mueve a trav�s de la columna. En el caso de la cromatograf�a l�quida
de alta resoluci�n, HPLC, la fase m�vil es un disolvente no polar como el hexano
(fase normal) o bien alg�n disolvente polar (cromatograf�a de fase reversa).
Fase estacionaria es la sustancia que est� fija en una posici�n durante la
cromatograf�a. Un ejemplo es la capa de gel de s�lice en la cromatograf�a en capa
fina.
Cromatograf�a anal�tica se emplea para determinar la existencia y posiblemente
tambi�n la concentraci�n de un analito en una muestra.
Fase enlazada es una fase estacionaria que se une de forma covalente a las
part�culas de soporte o a las paredes internas de la columa.
Cromatograma es el resultado gr�fico de la cromatograf�a. En el caso de separaci�n
�ptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se corresponden a los
componentes de la mezcla separada.

Cromatograma con picos no resueltos (separados).

Cromatograma con dos picos resueltos.

En el eje X se representa el tiempo de retenci�n, y en el eje Y una se�al
(obtenida, por ejemplo, a partir de un espectrofot�metro, un espectr�metro de masas
o cualquier otro de los diversos detectores) correspondiente a la respuesta creada
por los diferentes analitos existentes en la muestra. En el caso de un sistema
�ptimo, la se�al es proporcional a la concentraci�n del analito espec�fico
separado.
Cromat�grafo es el equipo que permite una separaci�n sofisticada. Por ejemplo, un
cromat�grafo de gases o un cromat�grafo de l�quidos.
Cromatograf�a es el m�todo f�sico de separaci�n en el cual los componentes que se
van a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales es estacionaria
(fase estacionaria) mientras la otra (la fase m�vil) se mueve en una direcci�n
definida.
Eluyente es la fase m�vil que atraviesa la columna.
Serie eluotr�pica es una lista de disolventes clasificados seg�n su poder de
diluci�n.
Fase inmovilizada es una fase estacionaria que est� inmovilizada sobre part�culas
de soporte, o en la pared interior del tubo contenedor o columna.

Cromatograma correspondiente a una cromatograf�a l�quida en fase reversa para

compuestos fen�licos
Cromatograf�a preparativa se usa para purificar suficiente cantidad de sustancia
para un uso posterior, m�s que para an�lisis.
Tiempo de retenci�n es el tiempo caracter�stico que tarda un analito particular en
pasar a trav�s del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) bajo las
condiciones fijadas. V�ase tambi�n: �ndice de retenci�n de Kovats
Muestra es la materia que va a ser analizada en la cromatograf�a. Puede consistir
en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla es tratada en el
curso del an�lisis, la fase o fases que contienen los analitos de inter�s es
llamada igualmente muestra mientras el resto de sustancias cuya separaci�n no
resulta de inter�s es llamada residuo.
Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la fase
m�vil l�quida en cromatograf�a de l�quidos.
Capacidad de carga Es la cantidad m�xima de muestra que puede ser separada en una
sola carga.
Capacidad de fraccionamiento Es el n�mero m�ximo de componentes que pueden ser
separados en una sola operaci�n.
Selectividad Es la capacidad de poder discriminar y distinguir entre dos
componentes.
V�ase tambi�n
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Proceso de separaci�n
Serie eluotr�pica
Cromatograf�a de gases
Cromatograf�a en capa fina
Cromatograf�a de inmunoafinidad