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Microbiología Laboratorio

I. INTRODUCCIÓN:

Cuando hablamos de crecimiento microbiano en realidad nos referimos al número de

células, no al tamaño de las células. Los microbios que están en la etapa de
“crecimiento” aumentan en cantidad y se agrupen colonias (grupos de células lo
suficientemente grandes como para ser observados sin el microscopio) de cientos de
miles de células, o poblaciones de miles de millones de células. Si bien el tamaño de las
células individuales casi se duplica durante la vida de la célula, este cambio no es muy
significativo si se lo compara con los aumentos de tamaño observados durante la vida
de plantas y animales. Las poblaciones microbianas pueden tornarse increíblemente
grandes en un tiempo muy corto. Si se conocen las condiciones necesarias para el
crecimiento microbiano se puede determinar la forma de control del crecimiento de los
microbios que causan enfermedades y deterioro de los alimentos. (Gerard J. Tortora,
2007)

Es necesario disponer de procedimientos para controlar el crecimiento microbiano. La

palabra control se refiere a las inhibición, muerte o eliminación de los microrganismos
los cuales pueden ser controlados por agentes químicos.

Un agente químico es una sustancia (sólida, líquida o gas) que se caracteriza por una
composición molecular definida y que causa una reacción. (Alarcón, 2001)

También se puede estimular el crecimiento de los microbios útiles y de aquellos que de

desea estudiar.

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II. OBJETIVOS
 Determinar el efecto bactericida o bacteriostático de algunos agentes
químicos como colorantes básicos, desinfectantes y metales pesados.

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III. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES:
 Agar nutritivo en tubos.
 Cultivos en caldo nutritivo: Bacillus sp, E.coli, Salmonella sp, Stphyloccocus sp.
 Discos de papel de filtro.
 Placas estériles.
 Pinzas.
 Asa de Kolle.Métodos:

REACTIVOS:
 Soluciones colorantes:
 Cristal violeta: 1/1000, 1/5000, 1/10000
 Verde malaquita: 1/1000, 1/5000, 1/10000
 Azul de metileno: 1/1000, 1/5000, 1/10000

 Soluciones desinfectantes:
 Fenol: 0.5%, 1% y 3%

 Soluciones de metales pesados:

 Sulfato de cobre: 0.5%, 1% y 3%
 Cloruro de mercurio: 0.5%, 1% y 3%
MÉTODOS:
 Se colocó dos asadas de uno de los cultivos bacterianos a los tubos con los
medios licuados, se mezcló bien y se vertió el contenido de los tubos en las
placas Petri. Se dejó enfriar. Después de la solidificación del medio, se dividió la
superficie de la placa en seis partes iguales con un plumón marcador.

 En condiciones asépticas, se cogió un disco de papel de filtro con las pinzas y se

sumergió ligeramente un de sus bordes en una de las soluciones antimicrobianas.
Una vez que el colorante se impregnó en el disco, se le colocó sobre el agar en
uno de los sectores marcados. Se incubaron las placas a 37°C por 24 horas. Y se
observaron los resultados.

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IV. RESULTADOS Y DISCUCIONES :

Después de haber realizado la siembra de los diferentes microorganismos en los

cultivos de agar, seguidamente haber implantado desinfectante, colorante básico y
metales pesados a diferentes concentraciones, se obtuvieron los siguientes resultados:

 Soluciones colorantes

CONCENTRACIONES:

 1/1000
 1/5000
 1/10000

 Los colorantes interfieren con la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas

(acridina) o interfieren en la síntesis de la pared celular (derivados del
trifenilmetano, cristal violeta). La acridina se inserta entre dos bases
sucesivas del ADN y las separa físicamente, lo que provoca errores en la
duplicación del ADN. Los derivados del trifenilmetano (violeta de
genciana, verde malaquita y verde brillante) bloquean la conversión del
ácido UDPacetilmurámico en UDP-acetilmuramil-péptido.

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a) Cristal violeta
 La incorporación de cristal violeta a un medio de cultivo con frecuencia lo
torna selectivo debido a la acción bacteriostática, se debe a la modificación
del potencial de óxido-reducción del medio, lo que inhibe el desarrollo de
los microorganismos. En general, son más activas contra las bacterias
Gram positivas y algunos hongos (Negroni, 2009). Se observa una
disminución del halo de inhibición conforme aumente la concentración y
que este colorante presenta cierto grado de inhibición de crecimiento
bacteriano que se corrobora con la teoría.

b) verde malaquita:
 Los colorantes derivados del trifenilmetano como la verde malaquita, el
cristal violeta y el verde brillante, tienen alto poder destructor contra
bacterias Gram positivas (Montoya, 2008) Sin embargo en los resultados
no se encontró un halo de inhibición en la bacteria evaluada.

c) Azul de metilo

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 (Miller, 2000) nos dice que el azul de metileno es un inhibidor parcial de

bacterias grampositivas y gramnevagtivas con requerimientos nutricionales
especiales, además de un indicador de pH. Por el contrario, no causa efecto
en la bacteria donde y no se formó halo de inhibición en consecuencia.

 Soluciones desinfectantes
a) Fenol

CONCENTRACIONES:

 0.5%
 1%
 3%

 El fenol ha ocupado un lugar prominente en el campo de la desinfección

hospitalaria, desnaturalizan proteínas, dañan la membrana. En la actualidad
rara vez se lo utiliza como antiséptico o desinfectante debido a los efectos
irritantes sobre la piel y a su olor desagradable (Negroni, 2009). Donde no
se encontró halo de hidrolisis en la muestra, que nos indica que el fenol no
ha inhibido el desarrollo de la bacteria.
 Los fenoles se utilizan más como desinfectantes, tienen propiedades
antibacterianas frente a estreptococos, estafilococos y Escherichia coli, y
también propiedades antifúngicas y antivirales. Tienen poca solubilidad en
el agua, por lo que son empleados en presentaciones que incluyen agentes
emulsificadores (jabones) que, además, aumentan su efectividad.

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 Soluciones de metales pesados :

-sulfato de cobre
-cloruro de mercurio

Sulfato de cobre

CONCENTRACIONES:

 0.5%
 1%
 3%

Cloruro de mercurio

 Por muchos años los iones de metales pesados tales como el mercurio, la
plata, el arsénico, el zinc y el cobre, fueron usados como germicidas. Estos
son bacteriostáticos ya que el metal se combina con los grupos
sulfihidrilos de las proteínas inactivándolas o precipitándolas. (Murray, P.
2002)

 Más recientemente estos elementos han sido reemplazados por otros

germicidas menos tóxicos y más efectivos (muchos metales pesados son
más bateriostáticos que bactericidas), pero hay algunas excepciones.

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Una solución al 1% de nitrato de plata es a menudo añadida a los ojos de

infantes para prevenir gonorrea oftálmica (en muchos hospitales la
eritromicina se utiliza en lugar de nitrato de plata ya que es más efectiva
contra Chlamydia y contra Neisseria). En quemaduras de utiliza
sulfadiacina de plata. (Jawetz, E.2001)

 El sulfato de cobre aun con su toxicidad se puede observar el gran halo

formado, este es un muy desinfectante en particular es un algicida efectivo
en lagos y albercas. Los metales pesados se combinan con proteínas, a
menudo con grupos sulfhidrilo, y las inactivan. También pueden precipitar
las proteínas celulares. (Murray, P. 2002)

Cuadro 01: tamaño del halo observado

Antiséptico o desinfectante Concentración Staphylococcus sp

1/1000 0.7 cm

Cristal viola 1/5000 1.3 cm

1/10000 1.1 cm

1/1000 -

Verde de malaquita 1/5000 -

1/10000 -

0.5% -

fenol 1.0% -

3.0% -

0.5% 0.5 cm

Sulfato de cobre 1.0% 0.9 cm

3.0% 1.8 cm

0.5% 1.5 cm

Cloruro de mercurio 1.0% 1.6 cm

3.0% 1.7 cm

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V. CONCLUSIONES:

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VI. BIBLIOGRAFÍA
 Alarcón, L. R. (2001). Manual de practicas de Microbiología básica y
Microbiología de alimentos. Programa de Nutrición.
 Gerard J. Tortora, B. R. (2007). Introducción a la Microbiología.
 NEGRONI M. Microbiología Estomatológica. Ed. Médica Panamericana.
2009
 Chris H. Miller; Charles John Palenik. 2000. Control de la infección y
manejo de materiales peligrosos. Página
18https://books.google.com.pe/books?isbn=8481744689
 Negroni, M., 2009, “Microbiología Estomatológica”, 2da edición, edición
Medica Panamericana, Universidad de Buenos Aires, pag.176-177.
 Hugo Montoya, 2008, Microbiología básica para el área de salud, 2da
edición,Ed. Universidad de Antioquia, Colombia, pág 73-75.
 Jawetz, E., J. Melnick y E. Adelberg. 2001. Microbiología Médica. 17ava
edición. Editorial El Manual Moderno, S.A., México D.F.
 Murray, P.; Rosenthal, K.; Kobayashi, G. y M. Pfaller. 2002.
Microbiología Médica. 4ta. Edición. Editorial Elsevier Science. Barcelona
– España.

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CUESTIONARIO

1. Algunos microorganismos usan carbohidratos sin formar niveles de ácido

detectables. En tales casos, ¿cómo determinaría si el carbohidrato ha sido
utilizado?

Por observación, al sembrar la colonia en un medio cuya única fuente de carbono fuera
tal carbohidrato, si prospera la colonia, es que sí fue utilizado.

2. ¿Por qué las amilasas, gelatinasas, caseinasas y lipasas son clasificadas como
enzimas hidrolíticas?

Las amilasas, gelatinasas, caseinasas y lipasas son enzimas hidrolíticas por que aceleran
las reacciones en las que una sustancia se rompe en componentes más simples, esta
clase de enzimas actúan normalmente sobre las grandes moléculas. La acción catalítica
se expresa en la escisión de los enlaces entre átomos de carbono y nitrógeno (C-Ni) o
carbono oxigeno (C-O); Simultáneamente se obtiene la hidrólisis (reacción de un
compuesto con el agua) de una molécula de agua. Se clasifican así porque son estas
enzimas las que catalizan reacciones de hidrólisis, es decir rompimiento de enlaces
peptídicos, glucosídicos, ester, etc, son capaces de transformar macromoléculas en
moléculas más pequeñas (Riviera, 2016).

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3. ¿Las enzimas que hidrolizan la caseína y gelatina rompen el mismo enlace

químico, cuál es?

Bacterias pueden producir la exoenzima gelatinasa, que rompe la estructura de la

gelatina y la licúa. La hidrólisis del almidón se produce por la amilasa que es una
enzima que actúa en procesos de digestión de carbohidratos,
Específicamente actúa sobre el almidón, enzima glucolítica que se encuentra en la
saliva; esta hidroliza los enlace glucosídicos alfa 1,4 de la fracción amilosa de la
molécula de almidón. Esta desdobla el almidón hasta alfa dextrinas y luego hasta
maltosa.

5. ¿Cuál es el nombre de la amina formada por la descarboxilación de la lisina?

La amina formada es la cadaverina, la cual se origina por descarboxilación de la lisina

por la lisina descarboxilasa.

Las bacterias pueden catalizas algunas reacciones de descarboxilacion de aminoácidos.

Uno de los aminoácidos más frecuentes en este tipo de reacción es la lisina. La
descarboxilacion de la lisina genera cadaverina.

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