BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE

PUEBLA

LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACOBIOLOGO

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRACTICA 9

Crecimiento de microorganismos gram negativos en diferentes medios

de cultivo

PROFESOR

M.S.P. MARIA DE LA CRUZ MENESES SÁNCHEZ

 Resultados
Cepa: Yersinia Enterocolitica
Caracteristicas nutricionales:
 No exigente
 Fermentadora de glucosa y lactosa con producción de gas
 Anaerobio facultativo

MEDIO DE TIPO DE VIRE DEL INDICADOR INHIBIDORES INDICADORES FUENTE

CULTIVO MEDIO ÁCIDO NEUTRO BASICO DE
CARBONO
MacConkey Diferencial Cristal violeta y Rojo de fenol Lactosa
Selectivo sales biliares Diferencial:
Lactosa
EMB Diferencial Eosina Diferencial: Lactosa
Selectivo Azul de Lactosa Sacarosa
Inhibidor metileno
XLD Diferencial Sales biliares a Rojo de fenol Xilosa
Selectivo alta Diferencial: Lactosa
concentración, Lactosa,Sacarosa Sacarosa
citrato y Xilosa.
tiosulfato
SS Selectivo Sales biliares, Rojo neutro Lactosa
Diferencial citrato y Diferencial:
Colorante: Lactosa y
Verde brillante tiosulfato
Verde Selectivo Colorante: Rojo de fenol Lactosa
Brillante Inhibidor Verde Brillante Sacarosa
(inhibe Gram+)
Sulfito de Selectivo Bismuto y el Sulfato ferrroso y Dextrosa
Bismuto Diferencial colorante Verde sulfito indica la
Brillante producción de
SH2

TCBS Selectivo Altas Por la presencia Sacarosa

concentraciones de sacarosa y el
de tiosulfato azul de timol y
sódico, citrato bromotimol
férrico y cloruro como
sódico que indicadores.
inhiben a la
mayoría de las
enterobacterias.

Cepa: Escherichia coli

Caracteristicas nutricionales:
 No exigente
  Fermentadora de glucosa y lactosa con producción de gas
 Anaerobio facultativo

MEDIO DE TIPO DE VIRE DEL INDICADOR INHIBIDORES INDICADORES FUENTE

CULTIVO MEDIO ÁCIDO NEUTRO BASICO DE
CARBONO
MacConkey Diferencial X Cristal violeta y Rojo de fenol Lactosa
Selectivo (Lactosa +) sales biliares Diferencial:
Colonias rosa Lactosa
EMB Diferencial X Eosina Diferencial: Lactosa
Selectivo (Color verde Azul de Lactosa Sacarosa
Inhibidor fosforescente) metileno
Fermentador
de Lactosa
XLD Diferencial X Sales biliares a Rojo de fenol Xilosa
Selectivo (Amarillo) alta Diferencial: Lactosa
Desecha NH3 concentración, Lactosa,Sacarosa Sacarosa
citrato y Xilosa.
tiosulfato
SS Selectivo X Sales biliares, Rojo neutro Lactosa
Diferencial (Lactosa +) citrato y Diferencial:
colonias rojas Colorante: Lactosa y
Verde brillante tiosulfato
Verde Selectivo X Colorante: Rojo de fenol Lactosa
Brillante Inhibidor Verde Brillante Sacarosa
(inhibe Gram+)
Sulfito de Selectivo X Bismuto y el Sulfato ferrroso y Dextrosa
Bismuto Diferencial (Producción colorante Verde sulfito indica la
de ácido) Brillante producción de
SH2

TCBS Selectivo X Altas Por la presencia Sacarosa

Sacarosa + concentraciones de sacarosa y el
(Amarillo)
de tiosulfato azul de timol y
sódico, citrato bromotimol
férrico y cloruro como
sódico que indicadores.
inhiben a la
mayoría de las
enterobacterias.
 Cepa: Salmonella typhi
Caracteristicas nutricionales:
 Anaerobio facultativo

MEDIO DE TIPO DE VIRE DEL INDICADOR INHIBIDORES INDICADORES FUENTE

CULTIVO MEDIO ÁCIDO NEUTRO BASICO DE
CARBONO
MacConkey Diferencial Ligeramente Cristal violeta y Rojo de fenol Lactosa
Selectivo Básico: sales biliares Diferencial:
colonias Lactosa
transparentes
No fermenta
la lactosa
EMB Diferencial Neutro: Eosina Diferencial: Lactosa
Selectivo colonias Azul de Lactosa Sacarosa
Inhibidor transparentes metileno
No fermentan
la lactosa
XLD Diferencial Ácido: Sales biliares a Rojo de fenol Xilosa
Selectivo colonias alta Diferencial: Lactosa
rosas o rojas concentración, Lactosa, Sacarosa
(no citrato y Sacarosa
fermentan la tiosulfato Xilosa.
lactosa, pero
descarboxilan
la lisina,
suben el pH)
con punto
central negro
(por
producción
de sulfuro).
SS Selectivo Ligeramente Sales biliares, Rojo neutro Lactosa
Diferencial ácido citrato y Diferencial:
Colonias: con Colorante: Lactosa y
punto central Verde brillante tiosulfato
negro
(producen
sulfuro).
Verde Selectivo Ligeramente Colorante: Rojo de fenol Lactosa
Brillante Inhibidor Ácido: Verde Brillante Sacarosa
colonias (inhibe Gram+)
rosas
Sulfito de Selectivo Ácido: Bismuto y el Sulfato ferrroso Dextrosa
Bismuto Diferencial colonias con colorante Verde y sulfito indica
bordes claros Brillante la producción
y punto de SH2
central negro.
Fermentan la
dextrosa
TCBS Selectivo Ácido: Altas Por la Sacarosa
Colonias concentraciones presencia de
opacas y de tiosulfato sacarosa y el
amarillas
 Fermentan la sódico, citrato azul de timol y
sacarosa férrico y cloruro bromotimol
sódico que como
inhiben a la indicadores.
mayoría de las
enterobacterias.

Conclusión
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la
que se añadirán otros ingredientes. Así mismo es importante conocer el
crecimiento que tienen estos microorganismos patógenos en diferentes medios de
cultivo ya que así podemos conocer sus características.

Bibliografía
Krikorian, A. D. (1991). Medios de cultivo: generalidades, composición y preparación. Cultivo de
tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones. Cali: CIAT, 41-77.

Bou, G., Fernández-Olmos, A., García, C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S. (2011). Métodos de
identificación bacteriana en el laboratorio de microbiología. Enfermedades infecciosas y
microbiología clínica, 29(8), 601-608.

Huertas, R. A. P. (2010). Bacterias ácido lácticas: Papel funcional en los alimentos. Biotecnología
en el sector agropecuario y agroindustrial, 8(1), 93-105.

Cuestionario
1. Menciona la característica de la pared celular de las bacterias Gram
Negativas

La envoltura celular de las bacterias gramnegativas está compuesta por

una membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada
de peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la
pared celular de estas bacterias.
2. Da 5 ejemplos de microorganismos Gram Negativo

 Neisseria meningitidis.
 Neisseria gonorrhoeae.
 Escherichia coli.
 Salmonella typhi.
 Salmonella enteritidis.
 Haemophilus influenzae.
 Bordetella pertussis.
  Brucella abortus.
 Francisella tularensis.
 Pasteurella multocida

3. ¿Qué componentes deben estar presentes en un medio de cultivo?

Agua, sustancias orgánicas (azúcares, aminoácidos, ácidos grasos, etc)

4. Menciona el fundamento de Mac Conkey.

El fundamento de este medio se puede explicar a través de la descripción de sus

componentes, pues cada uno posee una finalidad que determina una propiedad
del mismo.

Sales biliares y cristal violeta

En este sentido, el agar MacConkey tiene una composición compleja. En primel
lugar contiene sales biliares y cristal violeta.
Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias Gram positivas
y algunos bacilos Gram negativos exigentes. A su vez favorece el desarrollo de los
bacilos Gram negativos que no son afectados por estas sustancias. Por ello es un
medio selectivo.
Se dice que es ligeramente selectivo en comparación a otros medios que
igualmente inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y también de la
mayoría de las bacterias Gram negativas.
Es extremadamente selectivo para un determinado género, como por ejemplo el
agar TCBS para aislamiento de Vibrio cholerae y otras especies similares halófilas
y alcalófilas.

Peptonas, polipectonas y lactosa

Contiene sustancias que aportan los nutrientes necesarios a los microorganismos
que se desarrollan en este medio, como las peptonas, polipectonas y la lactosa.
La lactosa es el punto clave para que el medio sea un medio diferencial, pues los
microorganismos que poseen la capacidad para fermentar la lactosa desarrollaran
colonias rosadas fuertes.
Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lentamente o débilmente,
desarrollando colonias color rosado pálido y siguen siendo lactosa positiva.
Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente de energía,
produciendo amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello las colonias que se
originan son incoloras o transparentes.

Indicador de pH
El cambio de color se logra a través de otro compuesto esencial que posee el agar
MacConkey. Este compuesto es el indicador de pH, que en este caso es el rojo
neutro.
La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos
acidifican el medio a un pH por debajo de 6,8.
Esto hace que el indicador de pH vire hacia a una tonalidad rosada intenso. La
intensidad del color puede variar dependiendo el pH final.

Agua destilada, cloruro de sodio y agar

 Por otra parte, contiene agua destilada y cloruro de sodio que le dan la hidratación
y equilibrio osmótico al medio. Finalmente, el medio contiene agar, que es la base
que proporciona la consistencia de medio sólido.
El medio agar MacConkey preparado debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2.
5. ¿Qué otros medios de cultivo, diferentes a los empleados en esta práctica,
pueden ser utilizados para el crecimiento de Gram Negativos?