UNIVERSIDAD EL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

PROGRAMA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
VI SEMESTRE

GUÍA No 1
RECONOCIMIENTO DE LABORATORIO Y NORMAS
DE BIOSEGURIDAD.

INTRODUCCIÓN
El desarrollo de la actividad biotecnológica se presenta mediante el uso de diversas técnicas, las
cuales incluyen el estudio y uso de moléculas, células, tejidos, órganos vegetales, animales y
microorganismos de interés y aplicación en la agricultura, la industria y el medio ambiente. Estos
organismos vivos, protagonizan una serie procesos de los cuales se obtienen productos de gran
importancia en el que hacer agroindustrial. Para el adelanto de estos procesos, se necesitan
instalaciones e implementos que cumplan con las características mínimas para obtener resultados
aceptables de la actividad.

OBJETIVOS

General

Reconocer las áreas de distribución, los equipos y las normas de bioseguridad para el trabajo en el
laboratorio de biotecnología de la facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad del Cauca.

Específicos

Identificar áreas de trabajo en el laboratorio de biotecnología de la facultad de Ciencias Agrarias

de la Universidad del Cauca.

Identificar los principales equipos, materiales e insumos para el desarrollo de las prácticas de
biotecnología.

Conocer las normas de bioseguridad para el trabajo en laboratorio.

ÁREAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

El laboratorio de biotecnología debe presentar áreas específicas para desarrollar determinadas

actividades, dichas áreas son interdependientes pero a la vez permiten realizar actividades en
condiciones de aislamiento, con el fin de evitar contaminación cruzada y otros efectos adversos
para el tratamiento aséptico cuando las técnicas lo requieren. A continuación se describen las áreas
necesarias:

____________________________________________________________
1
Elaborada por: Ing. José Luis Hoyos Concha. Esp. Biotecnología. Mg. Est. Doc. Ingeniería de Alimentos. Docente.
2 Modificaciones a cargo de: Ing. Remigio Yamid Pismag Portilla. Mg. Ingeniería de Alimentos. Docente.
3 Biólogo Iván Otero Ramírez. Est. Maestría Microbiología Agroindustrial. Docente
Oficina de servicios. En este espacio se encuentra el personal responsable de las actividades
internas de laboratorio, personal de apoyo a las actividades académicas y de investigación, así
mismo se encuentra disponible el archivo y toda la documentación guía para la operatividad del
laboratorio.

Áreas de almacenamiento y preparación de medios de cultivo. Espacio necesario para la

formulación y preparación de los medios requeridos para el crecimiento de microorganismos. En
este lugar, deben ubicarse estanterías para el almacenamiento de reactivos, material de vidrio y
equipos como balanzas analíticas, plancha de calentamiento y agitación, destilador, propipetas
automáticas, pH-metro y refrigeradores.

Área de esterilización: sitio del laboratorio en donde se realiza la desinfección del material para uso
en el laboratorio de biotecnología, que será llevado al área de transferencia o siembra. En este lugar
se puede adecuar material de vidrio, material metálico y medios de cultivo, para la esterilización
del material es indispensable contar con papel kraft, toallas, cinta y bisturí. La esterilización es una
operación de mucha importancia en el laboratorio de biotecnología, por esta razón se describen
algunos de los principios de acción de esta actividad en el laboratorio.

El calor es el método de esterilización generalmente empleado para acondicionamiento de materia

de laboratorio, siempre y cuando soporte altas temperaturas. Este agente esterilizante se aplica de
dos formas. Calor húmedo para destruir microorganismos por desnaturalización de proteínas y calor
seco para destruir microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. La eficacia de
este método depende del tiempo de exposición y la temperatura empleada.

La importancia de la esterilización de medios de cultivo, radica en que estos deben estar

completamente libres de cualquier agente contaminante, previo a su uso. Por esta razón, siempre
que se desea realizar una actividad de estudio que implique el uso de medios de cultivo y cualquier
materia en contacto con estos, debe ser previamente lavado y esterilizado. La esterilización de
medios de cultivo se realiza de manera general empleando una autoclave. El equipo de autoclavado,
puede ser de carga horizontal o vertical, posee un rango de trabajo entre 115 -135 0C, en donde la
presión regula la temperatura y es directamente proporcional a esta. El tiempo de operación, varía
de acuerdo a las características y la cantidad de material a esterilizar, las ventajas del equipo de
autoclave son la velocidad, simplicidad, reducción de toda forma de hongos, bacterias y sus
esporas. Las desventajas son el cambio de pH, disociación y/o pérdida de actividad de los
componentes de los medios de cultivo.

Un caso particular, es la preparación de medios de cultivo líquido, suplementos vitamínicos y

hormonales que son termolábiles, donde la única manera de esterilización es la filtración. La
filtración evita la posible contaminación con hongos y bacterias. En esta técnica los filtros y los
equipos de trabajos se deben esterilizar previamente, para remover los posibles contaminantes; así
mismo, el poro del filtro es muy importante ya que restringe el paso del material contaminante.

Área de transferencia. Este sitio debe contar con todas las normas de asepsia para evitar la
contaminación, uno de los equipos de importancia en esta área es la cámara de flujo horizontal o
vertical. La cámara suministra un flujo de aire el cual pasa a través de un filtro HEPA (High
Efficiency Particle Arresting), proporcionando un espacio inocuo para el manejo del material
biológico; adicionalmente, este procedimiento debe contar con un mechero de alcohol y aspersores
con alcohol para la desinfección del microambiente. Todos los materiales necesarios para la
siembra como medios de cultivo, material de vidrio, agua estéril, papel kraft y toallas se deben
ubicar en el interior de la cámara para evitar contaminación.
En el área de transferencia, el flameado es un método empleado con frecuencia como medio de
esterilización, con el fin de esterilizar asas de siembra e incluso el microambiente cercano al sitio
de siembra (cajas de petri o tubos con medios de cultivo). Algunos instrumentos a tratar, se
sumergen en alcohol y luego se flamean hasta que la llama se consuma. El método del flameado se
usa por lo general luego de haber realizado otro tipo de esterilización, pero es importante aclarar
que el flameado no destruye o elimina esporas.

Área de seguimiento. Luego de la inoculación del medio en condiciones asépticas, se procede a

brindar condiciones ambientales controladas, según el sistema empleado (Cámaras de incubación).
Los parámetros sobre los cuales generalmente se ejercen control pueden ser la temperatura,
velocidad de agitación, inyección de gases, pH y humedad relativa. Para esta actividad es necesario
acondicionar los equipos necesarios, como las incubadoras, en los que se ubica el material a
propagar.

En esta sección, también se cuenta con todos los equipos necesarios para realizar observaciones de
tipo analítico como producción e identificación de microorganismos, cuantificación de metabolítos,
con el fin de identificar los cambios generados como objeto de estudio.

Área de lavado, inactivación de medios y material de desecho. En esta área se dispone de todo el
material de desecho derivado de todos los procesos microbiológicos, fermentativos y
biotecnológicos en general. El equipo de mayor importancia en esta área es la autoclave, además
se cuenta con un espació y recipientes necesarios claramente enumerados e identificados para
desechar reactivos o residuos previamente inactivados para evitar efectos adversos al ambiente. Así
mismo se cuenta con espacios para el lavado de material para su uso posterior o simplemente para
almacenar el material limpio y seco.

REGLAMENTO INTERNO DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO

DE BIOTECNOLOGÍA

ARTÍCULO 1. El presente Reglamento es complementario del Reglamento de Higiene y

Seguridad para el Laboratorio de Biotecnología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad del Cauca. Es aplicable para trabajo experimental, sea de docencia o de investigación.
Se considerarán también como áreas de laboratorio aquellos anexos donde se lleven a cabo
experimentos. Su observancia es obligatoria para el personal académico, alumnos y trabajadores
administrativos y no excluye otra reglamentación que resulte aplicable.

ARTÍCULO 2. Para poder permanecer en los laboratorios, tanto profesores como alumnos,
laboratoristas, secretarias y auxiliares están obligados a usar bata de algodón, lentes de seguridad
y calzado cerrado y, cuando sea necesario, guantes de látex o asbesto, cofia y cubrebocas.

ARTÍCULO 3. Durante el desarrollo del trabajo experimental, el alumno deberá colocar sus útiles
fuera del área del mismo.

ARTÍCULO 4. Todas las actividades que se realicen en los laboratorios estarán bajo la supervisión
del responsable del mismo o del profesor de la asignatura, ello incluye las prácticas, los trabajos
experimentales y las tesis; por tanto, se prohíbe estrictamente el uso de equipos si no se encuentra
alguna de las personas antes mencionadas.

ARTÍCULO 5. Queda prohibido trabajar en el laboratorio con anillos, pulseras, collares y cadenas.
ARTÍCULO 6. El responsable del equipo empleado en las actividades experimentales y el profesor
del grupo supervisarán el manejo adecuado y la limpieza del mismo.

ARTÍCULO 7. Las instalaciones del laboratorio deberán dejarse limpias al terminar la práctica o
al terminar el trabajo experimental del día y el profesor responsable del grupo deberá asegurarse de
que se cumpla con esta disposición.

ARTÍCULO 8. Cualquier muestra que se guarde en los refrigeradores, congeladores y cuartofrío

deberá estar bien empaquetada y etiquetada, indicando nombre completo del alumno, fecha, tipo
de muestra, nombre de la asignatura, nombre del proyecto de tesis y nombre del profesor
responsable.

ARTÍCULO 9. Cualquier desperfecto o daño en las instalaciones, aparatos o equipos, se deberá

notificar por escrito al responsable.

ARTÍCULO 10. Las gavetas de los laboratorios serán utilizadas exclusivamente para almacenar
todo lo relacionado con el trabajo experimental.

ARTÍCULO 11. Todos los profesores, alumnos y laboratoristas deberán conocer las propiedades
principales de las sustancias que manejan, de tal manera que puedan tomar las medidas de seguridad
adecuadas. Se deben revisar los manuales correspondientes.

ARTÍCULO 12. La preparación de reactivos y soluciones deberá realizarse siempre dentro de la

campana de extracción.

ARTÍCULO 13. Queda prohibido retirar material, reactivos y equipo de los laboratorios sin
autorización.

ARTÍCULO 14. Queda prohibido introducir alimentos, bebidas o golosinas no relacionados con
el trabajo experimental.

ARTÍCULO 15. Queda estrictamente prohibido fumar.

ARTÍCULO 16. Queda prohibido correr en el laboratorio y hacer bromas que pongan en riesgo la
integridad de las personas o el trabajo experimental.

ARTÍCULO 17. El trabajo con sustancias tóxicas, volátiles o inflamables deberá hacerse dentro
de las campanas de extracción. Estas sustancias deberán almacenarse en áreas específicas y
perfectamente señaladas.

ARTÍCULO 18. El profesor responsable y el profesor de la asignatura asesorarán al alumno en el

manejo y tratamiento correcto de residuos generados en cada una de las prácticas.

ARTÍCULO 19. La basura deberá separarse y depositarse en el contenedor indicado.

ARTÍCULO 20. Los residuos de las actividades experimentales se colocarán en recipientes

especiales, debidamente etiquetados e identificados, para que posteriormente sean tratados.

ARTÍCULO 21. Todo residuo tóxico deberá ser confinado en recipientes especiales, marcados y
cerrados herméticamente, para su disposición final. Queda estrictamente prohibido desecharlos al
drenaje o a la basura.
ARTICULO 22. Antes de desechar los cultivos de microorganismos, deberá procederse a su
destrucción o inactivación.

ARTÍCULO 23. El responsable de seguridad o el profesor tienen la autoridad para suspender los
trabajos que consideren peligrosos.

ARTÍCULO 24. En caso de ocurrir un accidente dentro de los laboratorios deberá reportarse
inmediatamente a:

 Responsables del área

 Brigada de emergencias (Funcionario Brigadista)
 Cuerpo de Bomberos de Popayán Cl. 4 Nro 10 - 80 Popayán. Teléfonos: 8233923 –
8231313
 Cruz Roja colombiana Seccional Cauca Cra 6 Nro 5N - 33 – Popayán. Teléfonos: 8232335
– 8203010. Identifíquese: nombre y puesto. Ubicación: Laboratorio de Biotecnología.
Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad del Cauca. Sede las Guacas. Vía
Penitenciaria San Isidro. Proporcione el mayor número de referencias físicas posibles y las
vías de acceso. Tipo de siniestro. Número de lesionados. Apoyo: especifique si requiere
apoyo adicional.

ARTÍCULO 25. En caso de un accidente con lesión, el profesor del grupo o el responsable de
seguridad deberá acompañar al accidentado para que se le proporcione la asistencia médica
necesaria, sin desatender al resto del grupo.

ARTÍCULO 26. No se permite la presencia de personas no autorizadas en los laboratorios de

docencia e investigación, así como en los cubículos de los profesores.

ARTÍCULO 27. Este Reglamento se dará a conocer a todos los alumnos al inicio del semestre y
se recabarán sus firmas de enterados. Asimismo, deberá estar en un lugar visible en el laboratorio.

BIBLIOGRAFÍA

M. MADIGAN, J. M. MARTINKO, J. PARKER. Biología de los Microorganismos. Editorial

Prentice Hall. España. 2004.

O. P. WARD. Biotecnología de la Fermentación. Acribia. España. 1990.

SOLANO, CRISTINA. Microbiología general: Guión de prácticas. Universidad de Navarra. 2006.

GUTIÉRREZ DE GAMBOA. Métodos de Esterilización. Venezuela. 2001. Disponible Online:

[Consultado, 20 de Febrero del 2015]
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9todos_
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VOLCY, Charles; PARDO, Víctor Manuel. Principios de Micología. Centro de publicaciones,

Universidad Nacional de Colombia. 1994.