Facultad de Ciencias Básicas

Programa de Biología
ESTIMACIÓN DEL CRECIMIENTO CELULAR MÉTODO: TURBIDIMETRÍA.

Paula A. De Alba1, Cindy P. López1 & René A. Rojas1

1
Estudiantes del Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del Atlántico Km 7
Antigua vía Puerto Colombia

Resumen: se realizó un experimento para evidenciar la estimación del crecimiento celular usando el
método de turbidimetría el cual indica cómo las células se multiplican en un medio líquido, para esto se
utilizó un lector de Elisa, cultivo de bacterias, diversos controles, caldo nutritivo y un extracto adicional,
se realizó el montaje en un plato de 96 pocillos asignado 2 pocillos por grupo; se realizaron medidas por
hora desde su inicio hasta las 7 horas. Se determinó que el pocillo que obtuvo más crecimiento fue el de
Control de Agua, y el que menos crecimiento tuvo fue el del grupo1 gracias a que el extracto utilizado
actúa como antibiótico inhibiendo el crecimiento bacteriano.

Palabras claves: crecimiento, turbidez, tiempo.

donde incluye sustancias que no

Introducción
El crecimiento celular para algunos trabajos
experimentales es fundamental y este requiere
ciertos métodos indirectos, para obtener una
estimación; al cuantificar las sustancias se mide
la actividad de las células y se asocia la
cantidad de sustancia en la actividad de las
células. Para este es necesario el método de la
turbidimetría, método práctico para controlar el
crecimiento bacteriano, cuando estas se
multiplican en un medio líquido se torna turbio o
nebuloso y para medir este efecto es necesario
un espectrofotómetro. [1]
Para evaluar la función celular y cómo afecta la
sustancia a la célula es necesario el
espectrofotómetro, en este caso se utilizó el
lector de Elisa un espectrofotómetro
especializado a base del uso de antígenos y
anticuerpos marcados con una enzima que
conjugados dan resultados de actividad
inmunológica o enzimática, al estar presente
uno de estos componentes marcados, consta de
un control positivo el cual se sabe que si habrá
actividad el cual proporciona un patrón donde se
basaran los resultados y un control negativo
reaccionarán[2]; el haz de luz que es
desprendido en el espectrofotómetro es
transmitido a través de una sustancia bacteriana
a una célula fotoeléctrica, cuando la cantidad de
bacterias aumenta, menos luz alcanza la célula
fotoeléctrica este cambio es registrado en la
escala del lector como densidad óptica (DO), la
absorbancia es utilizada para graficar el
crecimiento bacteriano. Para determinar la
turbidez de una muestra es necesario más de
un millón de células por mililitro para que la
suspensión sea bastante turbia como para ser
medida en un espectrofotómetro. [3] En este
tipo de montaje es necesario tener caldo
nutritivo las sustancias a evaluar extracto
Neen bintec, extracto de flores y extracto de
flores 1, extractos de macroalgas 1 y
extracto de macroalgas 2; y por último
bacterias de Escherichia coli.
Metodología
En este experimento se tuvieron en cuenta 5
sustancias a evaluar distribuyéndola en
diferentes posiciones en los 96 pocillos del
microplato teniendo en cuenta el control
positivo,

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el control negativo y el blanqueador, se adicionó en un estricto orden para que elde
Programa crecimiento
Biología bacteriano
celular sea posible, el orden en que se depositó fue el siguiente:
 10 µl de extracto
 170 µl de caldo de cultivo
 20 µl de cultivo de E. coli
Luego de esto se procedió a dar lectura de la densidad óptica del lector en el lector de microplato,
luego se retiraba y se incubaba a 37°C y se realizó lectura cada hora hasta completar 7 horas.

Fotografía 1. Montaje en los pocillos listo para hacer lectura en el lector de Elisa.

Resultados
En las siguientes tablas se representan los datos obtenidos para cada grupo y controles.

h0 h1 h2 h3 h4 h5 h6 DS
G1 0,033 0,057 0,090 0,155 0,188 0,226 0,288 0,093
G2 0,035 0,070 0,094 0,173 0,200 0,258 0,332 0,107
G3 0,033 0,043 0,052 0,121 0,149 0,187 0,195 0,069
G4 0,051 0,090 0,111 0,172 0,218 0,237 0,257 0,080
G5 0,152 0,162 0,165 0,208 0,231 0,245 0,260 0,044
Control - 0,003 0,015 0,017 0,085 0,114 0,163 0,185 0,075
Control + 0,000 0,017 0,019 0,021 0,013 0,014 0,007 0,007
Control agua 0,000 0,011 0,016 0,057 0,102 0,145 0,181 0,071
H1 (BLANCO) - - - - - - -
Tabla1. Datos promediados de absorbancia en cada grupo y controles en un periodo de 7 horas con su
respectiva desviación estándar

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Absorbancia vs Tiempo
1.800
1.600 Control agua
1.400 Control +
1.200 Control -
ABSORBANCIA

1.000 Grupo 5
0.800 Grupo 4
0.600 Grupo 3
0.400 Grupo 2
0.200 Grupo 1
0.000
h0 h1 h2 h3 h4 h5 h6
Tiempo

Grafica1.Variación promedio del crecimiento microbiano para cada grupo y controles en un periodo de
tiempo de 7 horas con su respectiva desviación estándar y rangos de error.

0 1 2 3 4 5 6 DS
G1 0 0,024 0,057 0,122 0,155 0,193 0,255 0,093
G2 0 0,035 0,060 0,139 0,166 0,223 0,298 0,107
G3 0 0,011 0,020 0,088 0,117 0,155 0,163 0,069
G4 0 0,040 0,060 0,122 0,167 0,187 0,207 0,080
G5 0 0,011 0,014 0,057 0,079 0,094 0,108 0,044
Control - 0 0,012 0,014 0,083 0,112 0,161 0,183 0,075
Control + 0 0,017 0,019 0,021 0,013 0,014 0,007 0,007
Control agua 0 0,011 0,016 0,057 0,102 0,145 0,181 0,071
H1 (BLANCO) - - - - - - -
Tabla2. Variación promedio de la absorbancia para cada uno de los grupos y controles en un periodo de
7 horas con su respectiva desviación estándar.

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Diferencia de Absorbancia vs tiempo
1.6
1.4
1.2
1 Control -
ABSORBANCIA
0.8
0.6
0.4
0.2
0
1 2 3 4
Tiempo
Grafica2.variacion del crecimiento microbiano con respecto a la Tabla1, determinándose que el que
más creció fue el Control agua.
Discusión
Los datos obtenidos en la Tabla1 equivalen a
los promedios de cada grupo en un periodo de
tiempo de 7 horas, se puede ver que la
absorbancia incrementó de una manera
parecida al paso de las horas para cada grupo y
controles. Se realizó para estos la diferencia
entre la absorbancia y la hora cero (h0), para
así tener los datos exactos del incremento
microbiano sin tener en cuenta otros factores, el
restante está ubicado en la Tabla2 donde se ve
el incremento de la absorbancia con respecto a
la hora cero (h0). De las gráficas anteriores se
puede evidenciar que el control Agua fue el que
más crecimiento microbiano obtuvo, (teniendo
en cuanta que el agua es uno de los principales
factores intrínsecos que determina el
crecimiento de un cultivo), el agua utilizada
contaba con nutrientes que incrementan el
crecimiento celular en comparación a los demás
tratamientos que no contaban con agua. El
tratamiento con menos crecimiento celular fue el
del Grupo1, esto se debe a que el estracto
utilizado (Neem Biotec 1) actuó como antibiótico
inhibiendo el crecimiento del cultivo bacteriano.
Este extracto es utilizado en la medicina para
Facultad de Ciencias Básicas
Programa de Biología
Control agua
Control +
Grupo 5
Grupo 4
Grupo 3
Grupo 2
Grupo 1
5 6 7
contrarrestar infecciones, se cree que este
tratamiento tuvo una reacción antibiótica.
Los controles negativo (Control -) y positivo
(Control+) contaban con caldo y bacteria, con
la diferencia de que el control positivo además
de esto tenía antibiótico (Gentaminicina), se
esperaba que el control positivo fuese tenido
una inhibición al crecimiento del cultivo, pero no
fue así, esto puede ser gracias a que el
antibiótico estaba vencido y por esa razón este
tratamiento actuó de la misma manera que el
control negativo. En los tratamientos restantes
(G1, G2, G3, G4) los cuales usaron extractos de
flores 1 y 2 y macroalgas 1 y 2, se obtuvo un
resultado cerca a lo esperado, se tuvo un
crecimiento dentro de condiciones ideales, de
cierta forma no son favorables para el
crecimiento del cultivo, teniendo un efecto
inhibitorio donde este se ve reducido.
Bibliografía
[1] Introducción a la microbiología, 9na edición,
Gerard Totora, Berdell Funke, Christine Case,
7
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2007, capítulo 6, CRECIMIENTO MICROBIANO, Programa
ESTIMACIÓN DEL NÚMERO
de Biología
MICROBIANO, ESTIMACIÓN DEL NÚMERO DE BACTERIAS POR MÉTODOS
DE BACTERIAS POR MÉTODOS INDIRECTOS, TURBIDIMETRIA, Pág 182, en
INDIRECTOS, Pág 182, en línea. línea.

[2] Palacios L. (2012). E.L.I.S.A. Enzime Linked

Inmuno Sorbent Assay.
http://www.slideshare.net/lexass/presentacion-
elisa-13245114.

[3] Introducción a la microbiología, 9na edición,

Gerard Totora, Berdell Funke, Christine Case,
2007, capítulo 6, CRECIMIENTO

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 ANEXOS

1. ¿Qué factores bióticos y abióticos controlan el crecimiento celular?

Los factores abióticos son los distintos componentes en que determinan el espacio físico en el cual
habitan los seres vivos; Los factores bióticos son los principales frenos del crecimiento de las
poblaciones. Ahora cuáles son:

 Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada. Si

consideramos esto, podemos observar una temperatura mínima por debajo de la cual no hay
crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento de la velocidad de crecimiento
con la temperatura de cultivo hasta que se alcanza la temperatura óptima a la que la velocidad
es máxima. Por encima de esta temperatura óptima, la velocidad de crecimiento decae
bruscamente y se produce la muerte celular (por desnaturalización de proteínas y a las
alteraciones producidas en las membranas lipídicas a esas temperaturas).
 Actividad de agua: Todos los seres vivos tienen necesidad de esta para subsistir; El agua actúa
como un termorregulador del clima y de los sistemas vivientes.
 pH: Es un parámetro crítico en el crecimiento de microorganismos ya que cada tipo de
microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente, fuera de este rango
muere.
 Clima: Abarca los valores estadísticos sobre los elementos del tiempo atmosférico en una región
durante un período representativo: temperatura, humedad, presión, viento y precipitaciones,
principalmente.
Para crecer, un microorganismo necesita nutrientes que le aporten energía y elementos químicos
para la síntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan,
los microorganismos se pueden clasificar en autótrofos si es el CO2 atmosférico (microorganismos
que fotosintetizan) y heterótrofos si utilizan carbono orgánico. Los microorganismos de importancia
clínica son todos ellos heterótrofos.

2. ¿Cuál fue el sustrato que produjo la mayor inhibición del crecimiento de E. coli?

El de neem.

3. ¿A qué se puede atribuir el efecto inhibitorio del estrato seleccionado en la pregunta

anterior?
El neem como regulador del crecimiento: En ciertos insectos y bacterias se impide el desarrollo y
salida del huevo. Se impide también la muda de las larvas, la formación de crisálidas y reproducción
de una colonia de bacterias. Las mantiene controladas [1].

Se ha reportado que los extractos de neem tienen efecto inhibitorio en una amplia gama de
microorganismos incluyendo algas, hongos, bacterias, y protozoarios. En el presente estudio se
observó que los extractos de neem inhiben, el crecimiento y la replicación de bacterias (E. coli).
Escherichia coli fue más susceptible a los extractos de neem, ya que se observó la inhibición del
crecimiento de E. coli fue de manera creciente [2].
El Neem es una planta. En Asia es llamado “el árbol de la farmacia del pueblo” porque es gratuito y
cura un sin número de enfermedades. Proveniente de Asia Tropical, de la India para ser más exacto,
y por sus múltiples propiedades la Academia Internacional de la Ciencia ha declarado... “si hubiera
que salvar una única planta de una hipotética catástrofe mundial, no habría ninguna duda sobre la
elección: el árbol del Neem”.

BIBLIOGRAFÍA.

[1] Revista de Servicio de sanidad vegetal, FICHA TÉCNICA INSUMOS, José Luis Porcuna, 2011.

[2] Efecto antimicrobiano de extractos crudos de neem (Azadirachta indica A. Juss) y venadillo
(Swietenia humilis Zucc) contra E. coli, S. aureus y el bacteriófago P22. Yadira López-Pantoja,
Miguel Angulo-Escalante, Celida Martínez-Rodríguez, Johana Soto-Beltrán, Cristóbal Chaidez-
Quiroz, 2007.