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PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA

MICROBIOLOGÍA MÉDICA

Dr. Arturo Pareja Cruz


Médico Microbiólogo-Inmunólogo
Responsable del Centro de Investigación en Infectología e Inmunología
Responsable de los cursos de Microbiología, Parasitología, Inmunología
Facultad de Medicina USMP
03/08/2018 Nombre y apellido del docente.

Principales causas de morbilidad


Perú-2015

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Fuente: Ministerio de Salud - Oficina General de Tecnologías de Información
03/08/2018 Nombre y apellido del docente.

Principales causas de mortalidad


Perú-2014

Fuente: Ministerio de Salud - Oficina General de Tecnologías de Información


MICROBIOLOGÍA MÉDICA
La microbiología médica es la ciencia que estudia el
diagnóstico etiológico de las enfermedades infecciosas por
medio del aislamiento e identificación de los agentes
infecciosos, así como la demostración de la respuesta
inmunológica (anticuerpos, reacción cutánea) en el paciente.
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz

Breve Historia de la Microbiología


03/08/2018 Nombre y apellido del docente.
03/08/2018 Nombre y apellido del docente.
Anton van Leeuwenhoek
Construyó como
entretenimiento diminutas
lentes biconvexas
montadas sobre platinas
de latón, que se sostenían
muy cerca del ojo.

1632 - 1723
La primera observación
notable tuvo lugar en
1665, cuando consiguió En las gotas de
ver a través de uno de agua comenzó a
sus microscopios ver lo que él llamó
capilares de un ser vivo.
animálculos. Eran
pequeños seres
con vida de
diminuto tamaño
que se movían por
el agua.
Robert Koch
(1813-1910)

Establecimiento de las
técnicas de aislamiento de
microorganismo y de los
medios de cultivo en medio
sólido (primero sobre rodajas
de papa, luego sobre gelatina
y finalmente sobre agar) por
Robert Koch. Cajas de vidrio circulares diseñadas
por Richard Petri, asistente de Koch
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Alexander Fleming (1881–1955)


03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Daniel Alcides Carrión (1857-1885)


03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Taxonomía y Nomenclatura
Carolus Linnaeus o Carlos linneo
23 de mayo de 1707, Suecia

• Padre de la taxonomía
• Sistema binomial
Genero especie, latín
• En 1761 fue hecho noble, y se
convirtió en Carl von Linné
Taxonomía
• Taxonomía: (taxis = orden, rango).
• La ciencia de la clasificación
• Objetivo: identificar, describir y delimitar especies
• Formado por taxones.
Taxón
Taxones o taxas: categorías jerárquicas.
1. Se le otorga un nombre en latín,
2. Se le hace una descripción
3. Se le asocia a un ejemplar "tipo"
Taxonomía
Nomenclatura
• Subdisciplina que aplica las reglas para
nombrar y describir a los taxones.
• Códigos Internacionales de nomenclatura.
• Objetivos:
1. cada organismo posea sólo un nombre
correcto.
2. no haya 2 taxones diferentes llevando el
mismo nombre.
Sistema binomial o
nomenclatura binomial
• Sistema taxonómico:
1. nombre del género, (primera letra de
este será en mayúscula)
2. nombre designado para esa especie en
concreto, -us, -a, -um, -is, -os, -ina, -ium, -ides, -
ella, -ula, -aster, -cola, -ensis, -oides, -
3. en latín. opsis, -saurus, -therium, -ana...
• Gaspar Bauhin el primero que sugirió la
idea
• Linneo quien la popularizó (Species
Plantarum en 1753)
Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus
S. aureus
S. aureus
S. aureus
Nombre científico
El objetivo es el de poseer un único nombre que deba ser utilizado en
todo el mundo, en cualquier lengua, para referirse a un único taxón.
• Staphylococcus aureus

Color
albus: blanco
viridis: verde

origen Hábitat
Africanus: africano arenarius : crece en arena
americanus: americano Campestris: de los campos
alpinus: alpino fluviatilis: de los ríos
Nombre común Nombre científico
1… Carbunco (Bacillus anthracis)
2… Botulismo (Clostridium botulinum)
3… Tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis)
4… Disentería bacilar (Shigella dysenteriae)
5… Fiebre paratifoidea (Salmonella paratyphi)
6… Fiebre tifoidea (Salmonella typhi)
7… Gonorrea (Neisseria gonorrhoae)
8… Meningitis meningocócica (Neisseria meningitidis)
9… Salmonela (Salmonella typhimurium)
10. Neumonía (Streptococcus pneumoniae)
11. Sífilis (Treponema pallidum)
12. Tifus epidémico (Rickettsia prowazekii)
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Estructura Bacteriana
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Diferencias entre una célula eucarióta y


procarióta
03/08/2018

Diferencias
entre una célula
eucariota y
procariota
BACTERIAS
1968 → Incluidas en el reino PROCARIOTA (Núcleo primitivo por
ausencia de membrana nuclear)

• Su genoma esta conformado por


ADN de doble cadena de forma
circular

• Miden de 1 a 6 micras, aunque


existen bacterias de mayor
tamaño (40-50 micras)

De acuerdo a su forma y agrupación


reciben un nombre específico.

Romero Cabello Raúl; “Microbiología y parasitología humana”; 3ra. Edición; Editorial Médica Panamericana; México, DF.
ESTRUCTURA DE UNA BACTERIA
CÁPSULA: Esta constituida por polisacáridos y polipéptidos.
Sus principales funciones son proteger de la fagocitosis,
participar en la adhesión a mucosas y en la formación del
glucocálix

PARED: Es un estrato rígido que confiere forma a MEMBRANA


CITOPLASMÁTICA: Es la
la bacteria. Al ser el sostén de la membrana barrera osmótica de la
citoplasmática, confiere protección contra célula. Conformada por
efectos mecánicos dos capas de lipoproteínas

ESPACIO PERIPLÁSMICO: Es el
MESOSOMAS: Son repliegues
espacio entre la membrana
de membrana que
citoplasmática y la INCLUSIONES: Estructuras de
participan en la secreción de
membrana externa, ahí se almacenamiento de energía
proteínas y la replicación
acumulan enzimas
cromosómica de la bacteria
hidrolíticas y las B-lactamasas

Romero Cabello Raúl; “Microbiología y parasitología humana”; 3ra. Edición; Editorial Médica Panamericana; México, DF.
ESTRUCTURA DE UNA BACTERIA
03/08/2018

Estructuras de la membrana bacteriana


Pared celular
Gram positivos Gram negativos
03/08/2018

Características de la membrana de
Gram+ y Gram-
ESTRUCTURA DE UNA BACTERIA
Filamentos largos formados por
una proteína contráctil 1. Monótricas: Un solo

FLAGELOS
llamada FLAGELINA. Son flagelo en un polo
órganos de locomoción de las
bacterias, por lo general
Gram- 2. Anfítricas: Mechón
de flagelos en cada
uno de los polos

3. Iofótricas: Mechón
de flagelos en un solo
polo

4. Perítricas: Flagelos
alrededor de la
bacteria

Romero Cabello Raúl; “Microbiología y parasitología humana”; 3ra. Edición; Editorial Médica Panamericana; México, DF.
ESTRUCTURA DE UNA BACTERIA
*PILIS: Estructuras rígidas formadas por PILINA, son puentes de
conjugación bacteriana
*FIMBRIAS: Estructuras rígidas que realizan la adherencia de la
bacteria a células de los tejidos actuando como adhesinas

ESPORAS: Son estructuras resistentes y confieren CITOPLASMA: Material


una gran protección en casos donde la proteico contenido
bacteria se encuentre en condiciones por la membrana
desfavorables para su subsistencia citoplasmática

NUCLEOIDE: Formado por PLÁSMIDOS: DNA


DNA de doble cadena en susceptible de transferirse
RIBOSOMAS: En ellos se
forma circular. Contiene el a otras bacterias ,
lleva a cabo la síntesis
código de la información transmitiendo las
proteica
de caracteres biológicos características biológicas
de la especie que contienen

Romero Cabello Raúl; “Microbiología y parasitología humana”; 3ra. Edición; Editorial Médica Panamericana; México, DF.
Pili
• Son vellosidades.

• Les permite la fijación a ciertas superficies: como a las


células a la que infectan, al igual para la transferencia de
ADN.

• Un Pili suele tener unos 3-25 nm de diámetro y de 10-20


nm de longitud.
Estructuras internas
Nucleoide

Citoplasma
Nucleoide
• Nucleoide es el nombre que recibe la estructura en la que
se compacta el ADN procariota.

• Contiene el ADN en el citoplasma.

• El Nucleoide está compuesto fundamentalmente por ADN


(60%), con pequeñas proporciones de ARN y proteínas.
Citoplasma
• Esta limitado por la membrana citoplasmática, y en el se
encuentran las inclusiones celulares.

• Esta atravesado por numerosas membranas que lo


compartimentarían.

• Esta compuesto de agua, enzimas, sustancias nutritivas,


desechos, y gases, contiene estructuras celulares como
ribosomas, cromosoma y plásmidos.
Espora
• Es una estructura compleja que se forma dentro de la
célula para asegurar la supervivencia de la especie ante
condiciones ambientales desfavorables.

• La formación de esporas es inherente a algunos tipos de


bacilos.

• Las esporas pueden observarse en el interior de las


bacterias o libremente después de la desintegración de
las células progenitoras.
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Etapas de formación de una espora bacteriana


03/08/2018

Morfología Bacteriana
BACTERIAS

Romero Cabello Raúl; “Microbiología y parasitología humana”; 3ra. Edición; Editorial Médica Panamericana; México, DF.
Tamaño de las bacterias
• μm: El micrómetro o micra
es una unidad de longitud
equivalente a una
millonésima parte de un • Células individuales
metro. observables sólo al
microscopio.
• Colonias bacterianas
• Bacillus anthracis: Es uno apreciables a simple vista.
de los bacilos más
grandes, 1 x 10 μm

• Francisella tularensis:
Bacterias con menor
tamaño 0,2 x 0,7 μm
Características de las colonias:

1. Morfología
• Cuando se tiene un cultivo en agar siempre es relevante
anotar la morfología colonial de la cepa bacteriana para
facilitar la identificación.

• Generalmente se reporta la morfología colonial tal como


uno la percibe.

• También se puede agregar características que consideres


importante para identificarlas, por ejemplo el olor.
2. Bordes, superficie y consistencia
3. Pigmentación
• Es característica de pocas especies bacterianas, se
observa en colonias y células individuales.

• Hay que tener cuidado y no confundir la pigmentación,


hay que usar indicadores especiales.
4. Hemólisis
• Algunas bacterias especialmente los cocos, son capaces
de hemolizar los hematíes de la sangre, se debe a que se
libera una sustancia llamada hemolisina.

• La producción de hemolisis sirve para identificar


estreptococos.
5. Olor
• Algunas bacterias se descomponen su metabolismo,
liberando un olor característico de esa bacteria.

• Es posible saber qué tipo de bacteria es solo cuando


están en colonias, se distinguen fácil en cultivos mixtos o
contaminados.
03/08/2018

Clasificación Bacteriana
CLASIFICACIÓN
GRAM POSITIVOS • Cocos Catalasa positivos:

Bacitracina Resistente: Staphylococcus

Coagulasa positivo: Coagulasa negativos:

Staphylococcus aureus Novobiovina sensible: Novobiovina resistente:

Staphilococcus epidermidis. Staphilococcus saprophyticus

Staphilococcus hominis.

Staphilococcus haemoliticum.

Staphilococcus lugdunensis.

Bacitracina Sensibles:
Cloruro de Na+ 6,5 % positivo: Cloruro de Na+ 6,5 % negativo:
Micrococcus. Stomatococcus.
Cocos del grupo
Catalasa positivos:
Streptococcus
Beta-Hemolíticos (hemolisis completa)

PYR (+) PYR (-)

Grupo A (Streptococcus pyogenes) Hipurato (+) Hipurato(-)

Grupo B (Streptococcus agalactiae) Grupo C.

Grupo F

Grupo G

Alfa-Hemolíticos (hemolosis parcial de hematies)


Optoquina sensible Optoquina resistente
Streptococcus pneumoniae. Streptococcus del grupo viridans:
S. mutans.
S. sanguis.
S. mitis.
S. salivarius.
S. anginosus.
Gamma-Hemoliticos (no hemolíticos)
Streptococcus bovis.
Streptococcus milleri.
Streptococcus anaerobios.
Algunos Streptococcus del grupo viridans y Streptococcus agalactiae.

Cocos no Streptococcus
Optoquina resistentes Pediococcus.
Enterococcus. Leuconostoc.
Telurito positivo Telurito negativo Stomatoccus.
E. faecalis. E. faecium. Gemella.
E. gallinarum. Aerococcus.
E. raffinosus.
E. casseliflavus. Lactococcus.
Catalasa positiva

Catalasa negativa
• BACILOS
GRAM POSITIVOS
Aerobios
Formador de esporas No formadores de esporas:
Bacillus Corynebacterium (catalasa positivo)
B. anthracis. Arcanobacterium (catalasa negativo)
B. cereus.
Nocardia
Rhodococcus
Gordona.
Tsukamurella.
Actinomadura.
Streptomyces somaliensis.
Tropheryma whippelii.
Listeria monocytogenes.
Lactobacillus.
Erysipelothrix rhusiopathiae.
GRAM NEGATIVOS
• Cocos
En pareja (diplococos) y oxidasa positiva
Neisseria Moraxella.
N. gonorrhoeae. M. catarrhalis.
N. meningitidis.

• Bacilos
No fermentadores (en TSI)
Oxidasa positivos Oxidasa negativos
Pseudomonas Burkholderia Stenotrophomonas maltophilia.

P. aeruginosa. B. cepacia. Acinetobacter baumanii.


P. fluorescens. B. pseudomallei.
P. putida.
• Bacilos
Fermentadores (en TSI)
Oxidasa Negativos Oxidasa Positivos
Escherichia coli Vibrio
Klebsiella. V. cholerae.
V. mimicus.
V. damsela
Salmonella Plesiomonas shigelloides
Shigella Aeromonas
Serratia marcescens
Proteus mirabilis
Citrobacter.
Enterobacter.
Providencia.
Morganella.
Yersinia.
Edwarsella
OTROS BACILOS GRAM NEGATIVOS

Legionella pneumophila. Grupo HACEK:


Francisella tularensis. Actinobacillus actinomycetemcomitans.
Gardnerella vaginalis. Cardiobacterium hominis.
Pasteurella Kingella kingae.
Eikenella corrodens.
Haemophillus aphrophilus.
Capnocytophaga Streptobacillus moniliformis.
Helicobacter Calymmatobacterium granulomatis.
Campylobacter
Bartonella.
Bordetella
Brucella
Haemophilus
03/08/2018

Fisiología Bacteriana
FISIOLOGÍA BACTERIANA
• La fisiología bacteriana comprende el estudio de las
funciones realizadas por estas.

• Las bacterias son muy eficientes fisiológicamente,


sintetizan en forma muy rápida sus componentes
celulares, siendo la mayoría autosuficientes, a pesar de su
simpleza estructural.

• En la bacteria se desencadenan una serie de procesos


químicos, que en conjunto constituyen

METABOLISMO BACTERIANO
Macronutrientes
• Dióxido de Carbono (CO2)
• No aporta Hidrógeno ni energía.
• Los organismos pueden agruparse dependiendo de la fuente de
carbono en:

Usan el CO2 como ORGANISMOS


AUTÓTROFOS
◆: fuente de energía FOTOSINTÉTICOS

Usan nutrientes
Orgánicos como
HETERÓTROFOS Fuente de carbono
y energía
Macronutrientes
• Tipos nutricionales
• Los microorganismos pueden clasificarse dependiendo de la fuente
de Hidrógeno o electrones:

Obtienen electrones
LITÓTROFOS O hidrógeno de
Compuestos inorgánicos.

Utilizan sustancias
orgánicas como
ORGANÓTROFOS
Fuente de
Electrones.
• Tipos nutricionales
• El metabolismo es realizado mediante la utilización de dos fuentes
de energía: energía libre de las oxidaciones químicas y radiación.

Obtienen energía a partir


de la oxidación de
compuestos orgánicos
o inorgánicos.
Emplean la luz
como fuente
de energía.

QUIMIÓTROFOS FOTÓTROFOS
TIPOS NUTRICIONALES
QUIMIÓTROFOS FOTÓTROFOS
ORGANÓTROFOS LITÓTROFOS
HETERÓTROFOS
AUTÓTROFOS
Protozoos, hongos,
Bacterias no fotosintéticas Algas, bacterias púrpuras
(mayoría de microorganismos Y verdes del azufre,
Patógenos) Cianobacterias.

QUIMIÓTROFOS FOTÓTROFOS
LITÓTROFOS ORGANÓTROFOS
AUTÓTROFOS HETERÓTROFOS

Bacterias oxidantes del azufre, Bacterias púrpuras y


Hidrógeno, nitrificantes, verdes no sulfúreas
Oxidantes del hierro.
CAPTACIÓN DE NUTRIENTES

Funciones de la membrana citoplasmática


CAPTACIÓN DE NUTRIENTES

• Son mecanismos específicos.


• Transporte de nutrientes en
contra de un gradiente de
concentración.
• Los nutrientes tienen que
atravesar la membrana
plasmática.
Crecimiento bacteriano
• Es el incremento de todos los constituyentes en un
microorganismo.
• Es el cambio en la población bacteriana que ocurre a
través de la multiplicación de las células.

• La curva de crecimiento se basa en:


• un cultivo microbiano.
• en un medio líquido.
• sistema cerrado.
• nutrientes entregados en la fase inicial es mayor que los residuos
de la fase final.
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.
Factores ambientales sobre el
crecimiento bacteriano
• El crecimiento está influenciado por factores físicos y
químicos del ambiente en que se encuentran.
• Factores como: efecto de solutos y la actividad del agua,
pH, temperatura, nivel de oxígeno, presión y radiación.
Solutos y actividad del agua
• Cuando la osmolaridad del entorno se vuelve
más baja que la del citoplasma.
• Reducción por cuerpos de inclusión.
• Apertura de canales sensibles a la presión osmótica.
• Osmotolerantes pueden crecer en una amplia
concentración osmótica.
• Halófilas necesitan niveles elevados de cloruro de
sodio, condiciones hipertónicas.
pH
• Medida de la actividad de los iones de hidrógeno de una
solución.
• Acidófilos pH entre 0 – 5,5.
• Neutrófilos pH entre 5,5 – 8,0.
• Alcalófilos pH entre 8,0 – 11,5
• Se utilizan buffer para amortiguar el pH de algunas sustancias.
Temperatura
• Al ser microorganismos unicelulares, están
dependiendo de la Tº ambiental.
• Al aumentar la Tº, aumenta el metabolismo y a
su vez el crecimiento bacteriano Tº óptima
• Desnaturalización de proteínas, deterioro de
membranas citoplasmáticas, inhibición de
crecimiento Tº altas
• La función se afecta, pero la estructura ni
composición química Tº bajas
Temperatura
Reacciones enzimáticas
En aumento constante

Reacciones enzimáticas
A máx. velocidad

Desnaturalización proteica,
Gelificación de membrana, Colapso de membrana,
Transporte lento, Lisis térmica.
No hay crecimiento.
Temperatura
mínima óptima máxima
Psicrófilos 0º C 15º C 20º C Bacterias
oceánicas

Psicrótofos 0º C 20 – 30º C 35º C Bacterias


deterioro de
alim. Refrig.

Mesófilos 15 -20º C 20 – 45º C 45º C Mayoría de


bacterias
patógenas

Termófilos 45º C 55 – 65º C sup. a 65º C Bacterias,


hongos y algas

Hipertermófilos 55º C 80 – 113º C 113º C Bacterias


aisladas del
suelo marino
Temperatura
Concentración de oxígeno
• Aerobios organismo que necesita O2 para crecer.
• Anaerobio organismo que puede crecer en ausencia
de O2.
• Anaerobio facultativo no requieren O2 para crecer,
pero lo hacen mejor en su presencia.
• Anaerobio aerotolerante pueden crecer con
presencia o ausencia de O2.
• Anaerobio estricto no crecen en presencia de O2
• Microaerófilos necesitan niveles de O2 bajos (2-10%)
Concentración de oxígeno

Anaerobio Anaerobio Microaerófilo Anaerobio


Aerobio
estricto facultativo aerotolerante
Presión
• No afecta a microorganismos de la superficie terrestre.
• Presión de 1 atmósfera.
• En el océano puede alcanzar 600 – 110 atm, y Tº es de 2
– 3º C.
• Barotolerantes un aumento de la presión les afecta
negativamente.
• Barófilos crecen a presiones elevadas.
Factores ambientales sobre el
crecimiento bacteriano
Medios de cultivo
• Preparación líquida o sólida utilizada para el crecimiento,
transporte o mantenimiento de microorganismos.
• Debe poseer nutrientes esenciales según la especie que se quiere
cultivar.
• Los requerimientos reflejan el ambiente natural en que se
encuentran.
Medios de cultivo
• Medios sintéticos
• Componentes conocidos.
• Utilizados en investigación.
• Medios complejos
• Para bacterias exigentes.
• Composición química exacta se desconoce.
• Contienen peptonas, extracto de carne y de levadura.
• ej.: caldo nutritivo, agar Mac -conkey, etc.
• Medios selectivos
• Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares.
• Medios diferenciales
• Permite identificación tentativa de bacterias.
• Ej.: agar sangre
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

Genética Bacteriana
GENOMA BACTERIANO
 Una molécula de ADN de
doble hebra circular, en una
copia (haploides).
 ADN compactado (proteínas
tipo histonas).
 Alto peso molecular (4x106 pb
en E. coli).
 Codifica aprox. 4700 genes
(E. coli).
 Replicación del ADN acoplada
a la división celular.
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

¿Cómo se divide una bacteria?


La replicación requiere
una extensión de la pared
celular, así como la
replicación del
cromosoma y la
formación de un tabique.
La fijación del ADN a la
membrana arrastra a
cada cadena hija hacia el
interior de una nueva
célula.
ELEMENTOS GENÉTICOS MÓVILES
(extracromosómico)

• Plásmidos
• Bacteriófagos
• Transposones
• Integrones y cassettes génicos
Plásmidos
• Moléculas de DNA circular extracromosómico
• Origen de replicación propio (Ori) determina
autonomía de replicación del cromosoma
• Tamaño molecular: 1-200 Kb
• Nº de copias variables (1 - >40)
• Transportan información genética no esencial
para la vida de las bacterias
BACTERIOFAGOS
• Virus bacterianos.
• Genoma (acido
nucleico ARN o ADN)
cubierto por capa de
proteinas.
• Pueden establecer un
ciclo lítico o lisogénico
• Para integrarse
reconocen secuencias
específicas en el
genoma bacteriano
TRANSPOSONES
Secuencias de inserción (elementos IS)
• Están compuestas por una secuencia corta
de DNA que codifica las enzimas necesarias
para su transposición
• Los extremos son secuencias repetidas
invertidas idénticas de 15-25 pb, variables en
distintas IS

IL-1 IL Transposasa IR
Integrones y cassettes génicos
Familia de elementos genéticos potencialmente móviles
capaces de integrar y expresar genes de resistencia a los
antibióticos.
Detectados en bacilos Gram (-) fermentadores:
• - Enterobacteriaceae y Vibrionaceae
• - En algunos no fermentadores: Pseudomonas
aeruginosa y Acinetobacter baumannii.
• -Además, un integrón funcional en bacterias Gram (+),
en una cepa de Corynebacterium glutamicum
Mecanismos de transferencia horizontal de
información genética en las bacterias
• Se produce recombinación genética en la
transferencia horizontal de genes

• Conjugación
• Transformación
• Transducción
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.
03/08/2018 Dr. Arturo Pareja Cruz.

¿Cómo el Staphylococcus aureus se hace resistente


a meticilina y vancomicina (SARM y SARMV)?