EL MUNDO MECÁNICO DE LAS BACTERIAS.

En la naturaleza, las bacterias se asocian predominantemente con las superficies, en lugar de existir como
organismos aislados, que se mantienen libres. Por lo tanto, están sujetos a mecánicas específicas de la
superficie, que incluyen fuerzas hidrodinámicas, fuerzas adhesivas, la reología de su entorno y reglas de
transporte que definen sus encuentros con nutrientes y moléculas de señalización. Aquí, destacamos los
efectos de la mecánica en los comportamientos bacterianos en superficies en escalas de longitud múltiple,
desde bacterias individuales hasta el desarrollo de comunidades bacterianas multicelulares como biofilms.

Las bacterias ocupan una amplia variedad de nichos ecológicos en la Tierra. Su larga historia evolutiva los
ha expuesto a entornos muy diferentes, y han desarrollado una notable plasticidad en respuesta a las
condiciones fisicoquímicas que cambian a nivel local. En particular, las bacterias pueden detectar y
responder a señales químicas, térmicas y mecánicas, así como a campos eléctricos y magnéticos. ¿Cómo
influyen estas señales en los comportamientos bacterianos en ambientes naturales? La caracterización del
comportamiento bacteriano en contextos realistas requiere la integración de un espectro de estímulos
ambientales a los que responden y hacerlo en configuraciones físicas representativas de sus hábitats
naturales. Dichos análisis son críticos para comprender de manera integral la biología bacteriana y, de ese
modo, avanzar en la promoción o restricción del crecimiento bacteriano en los ámbitos médico, industrial y
agrícola.

La mecánica es una parte integral de la biología celular eucariota: numerosos estudios han demostrado la
importancia del flujo de fluidos y la mecánica de la superficie en el crecimiento y comportamiento de las
células de mamíferos en muchas escalas de longitud (Fritton y Weinbaum, 2009; Hoffman y otros, 2011;
Pruitt y otros. , 2014). En contraste, la microbiología se ha centrado tradicionalmente en la influencia del
entorno químico en el comportamiento bacteriano. Por lo tanto, durante décadas, el crecimiento en cultivos
por lotes bien mezclados y en placas de agar fue el método de elección para los estudios de fisiología
bacteriana. Como resultado, la comunidad ha reconocido recientemente que la mecánica también
desempeña un papel importante en la biología microbiana en las superficies: el flujo de fluidos y el contacto
entre las células y las superficies son dos características ubicuas e influyentes de la existencia bacteriana
en ambientes naturales. Los avances en ingeniería a microescala y microscopía ahora nos proporcionan
herramientas poderosas para explorar, en las escalas espaciales relevantes, los roles que desempeñan las
fuerzas físicas en la percepción y adaptación sensorial bacteriana (Rusconi et al., 2014). Estas nuevas
plataformas experimentales han revelado que las bacterias están en sintonía con las fuerzas mecánicas y,
de hecho, pueden explotar la mecánica para impulsar un comportamiento adaptativo.

La motilidad de natación proporciona un ejemplo elegante de cómo las bacterias son influenciadas por la
naturaleza mecánica de su entorno. Como consecuencia de su pequeño tamaño (~ 1 mm), las bacterias
viven en ambientes dominados por la viscosidad, que contrasta con el mundo de escala humana en metros
en el que la dinámica está dominada por la inercia (Purcell, 1977). El movimiento del fluido se puede
caracterizar ampliamente por el número de Reynolds (Re), que compara las magnitudes de las fuerzas
inerciales y las fuerzas viscosas en un flujo dado (Re = rUL / m, donde U es una velocidad de fluido típica,
L una escala de longitud típica, r Densidad del fluido, y m su viscosidad). Nosotros, los humanos, vivimos
un alto número de vidas de Reynolds (al menos 104), ya que somos organismos de medidores a escala
que se mueven a velocidades del orden de metros por segundo. Pero los microorganismos que nadan
viven en los números de Reynolds muy por debajo de la unidad (como máximo 103). Para autopropulsarse
en tal régimen, las bacterias utilizan flagelos motorizados que convierten el accionamiento mecánico
(rotación) en un desplazamiento neto. Por lo tanto, muchas bacterias han desarrollado una máquina
biológica, el flagelo y su motor asociado, para adaptarse a las propiedades mecánicas de su entorno
(puramente viscoso). La biología y la física de la motilidad de la natación se han investigado intensamente
y se han revisado en otros lugares (Berg, 2003; Guasto et al., 2012; Macnab, 2003). Aquí, ofrecemos una
perspectiva sobre un aspecto más general pero poco estudiado de la mecánica en biología bacteriana, a
saber, los efectos de las superficies y el flujo en el comportamiento bacteriano.

Fuera de los océanos, la mayoría de las bacterias en la naturaleza existen en las superficies, en lugar de
en el líquido a granel de sus ambientes fluidos (Costerton et al., 1995). Las bacterias están equipadas para
vivir en la interfaz líquido-sólido a través de la secreción de estructuras adhesivas como flagelos, pili,
exopolisacáridos y otros componentes de la matriz (Dunne, 2002) (Figura 1A). El entorno mecánico de las
bacterias asociadas a la superficie es notablemente diferente al de sus contrapartes que flotan libremente
(Figura 1B). Desde el contacto inicial, una bacteria adherida a la superficie experimentará una fuerza local
que es normal a la superficie, generalmente conocida como fuerza adhesiva (Figura 1B). En un entorno
con flujo, la viscosidad del fluido circundante genera una fuerza hidrodinámica (corte) en la celda que es
tangencial a la superficie en la dirección del flujo (Figura 1B). La motilidad superficial puede producir una
fuerza de fricción que es tangencial a la pared celular y se localiza en la interfaz con el sustrato. Los
principios de la mecánica dictan que las fuerzas en una celda estacionaria o en movimiento constante
deben equilibrarse, de modo que una fuerza adhesiva local hacia el sustrato en un punto de la celda debe
ser equilibrada por fuerzas repulsivas debido a la compresión en otro lugar.

Las células bacterianas adheridas a la superficie pueden multiplicarse para formar grandes grupos que se
convierten en comunidades organizadas denominadas biopelículas (Hall-Stoodley et al., 2004). En esta
escala multicelular, los efectos mecánicos adicionales se vuelven relevantes (Stewart, 2012). La unión de
una célula a una superficie induce la secreción de una mezcla de proteínas, polisacáridos y ADN que
forma una matriz circundante (EPS; sustancias poliméricas extracelulares) con propiedades tanto viscosas
como elásticas (Figura 1B). Estos polímeros extracelulares se unen a células adheridas a la superficie y su
progenie en comunidades de biopelículas, y la reología de la matriz secretada probablemente tenga
implicaciones importantes para el crecimiento, la disposición espacial y la resistencia de las estructuras
multicelulares resultantes (Berk et al., 2012; Chew et al., 2014). La distribución espaciotemporal de
pequeñas moléculas internalizadas y / o liberadas por las células bacterianas que residen dentro de estas
comunidades puede verse fuertemente afectada por el entorno de flujo que experimenta la comunidad, con
consecuencias sustanciales y distintas para los comportamientos individuales y colectivos (Figura 1B).

Figura 2. Influencias de la mecánica ambiental en células individuales y comunidades multicelulares (A y

B) (A) En superficies y en presencia de flujo, las células bacterianas individuales utilizan apéndices cortos
(fimbrias) y otras estructuras o sustancias adhesivas para permanecer fuertemente unidas, y (B) utilizan pili
motorizados localizados en sus polos para moverse contra el flujo. (C) Las bacterias explotan sus formas
 para orientarse en el flujo, mejorando así la colonización de la superficie. (D) A escala de comunidades
multicelulares, las bacterias pueden alterar la reología de la EPS para optimizar el crecimiento. (E y F)
Flow modifica la arquitectura de las biopelículas bacterianas al impulsar la formación de estructuras
filamentosas llamadas serpentinas, que pueden obstruir el flujo pero también capturar células y metabolitos
suspendidos en el fluido circundante. (G) El transporte de nutrientes y otros solutos por difusión y
advección impulsa el crecimiento y las interacciones entre las bacterias asociadas a la superficie.

Aquí, destacamos cómo estos efectos mecánicos juegan un papel en el comportamiento bacteriano a nivel
de células individuales y de estructuras multicelulares. Discutimos estrategias para que las células
bacterianas se desplieguen específicamente en las superficies, incluida la adhesión mejorada en el flujo de
fluidos, la exploración a través de la motilidad específica de la superficie y el control de la forma celular
para mejorar la colonización (Figuras 2A a 2C). A nivel de las estructuras multicelulares, discutimos cómo
la reología de las matrices poliméricas afecta a las poblaciones que crecen en las biopelículas y cómo el
flujo influye en estas estructuras (Figuras 2D a 2F). También describimos cómo el flujo de fluidos afecta el
transporte de pequeñas moléculas utilizadas en las interacciones sociales, por ejemplo, la detección de
quórum, entre células bacterianas individuales (Figura 2G). Finalmente, proporcionamos información sobre
la escalabilidad de los efectos de la mecánica en las bacterias, es decir, cómo los fenómenos a nivel de
células individuales influyen en los comportamientos colectivos emergentes y las consecuencias de la
aptitud de grupo en comunidades multicelulares.

Mecánica a nivel de células individuales.

Para iniciar y mantener un contacto íntimo con superficies sólidas, las bacterias aprovechan una amplia
variedad de estrategias de adhesión. Muchas bacterias, al adherirse a una superficie, secretarán una
mezcla de EPS, que aumenta su afinidad por superficies porosas, rugosas y químicamente heterogéneas
(Flemming y Wingender, 2010). Las bacterias también construyen estructuras de proteínas en sus
exteriores que mejoran su adhesión a las superficies. Por ejemplo, apéndices como pili y fimbrias ayudan a
las células a superar las fuerzas repulsivas entre la membrana celular y las superficies abióticas (Figura
1A). La secreción de EPS y la formación de pilus son áreas activas de investigación y se han revisado en
otros lugares (Burrows, 2012; Flemming y Wingender, 2010). Las revisiones anteriores también han
destacado la motilidad específica de la superficie, como enjambres y contracciones (Harshey, 2003). Aquí,
nos centramos en las estrategias que utilizan las bacterias, a menudo empleando fimbrias, pili y EP, para
mantener la adherencia a las superficies o para optimizar la colonización de la superficie en entornos de
flujo.

Figura 1. Las bacterias experimentan una variedad de efectos mecánicos en las superficies (A) Los
flagelos, los pili y las sustancias adhesivas son útiles para la unión de células bacterianas individuales a las
superficies. EPS ayuda a mantener la integridad de las estructuras comunitarias compuestas por múltiples
células. Las bacterias utilizan moléculas de señalización difusibles, armas químicas y bienes públicos
solubles para interactuar dentro de tales comunidades. (B) Una celda que se adhiere a una superficie está
sujeta a una fuerza adhesiva local (F) en la dirección normal a la superficie. Los esfuerzos cortantes
debidos al flujo de fluido generan una fuerza (F) en la celda que es paralela a la superficie. Las bacterias
experimentan las propiedades reológicas de su matriz extracelular circundante, que fluye y / o se deforma
con la aplicación de fuerzas. El flujo de fluidos (advección) y el movimiento browniano (difusión)
transportan compuestos solubles que son liberados y / o internalizados por bacterias.

Sosteniendo apretado

La tensión de corte generada por el flujo en una interfaz sólido-líquido puede superar fácilmente las fuerzas
adhesivas que anclan las células en una superficie, potencialmente separándolas de los sustratos (De La
Fuente et al., 2007). En el flujo, una celda experimenta una fuerza de arrastre que se estima bien como
Fdrag = Ass, donde A es el área de la celda expuesta al flujo (aproximadamente el producto de longitud y
anchura para una bacteria con forma de varilla) y ss es la cizalla local Estrés en la superficie (Berg, 1993).
En un canal microfluídico con sección transversal rectangular de altura h y ancho w, y dado el caudal Q (en
m3 por segundo), la tensión de corte en la pared se puede estimar en ss = 6Qm / wh2 donde m es la
viscosidad del fluido. Aunque la tensión de corte depende en gran medida de la geometría del flujo,
generalmente es mayor en entornos con velocidades de flujo más altas. Por lo tanto, la fuerza de arrastre
en una celda unida generalmente aumenta con la intensidad del flujo, y la resistencia de unión requerida
para que una celda resista la remoción por cizallamiento dependerá de los flujos que caracterizan su nicho
ambiental (Bakker et al., 2004). Las fuerzas de adhesión celular varían desde unos pocos hasta cientos de
picos de Nueva York (pN), que es suficiente para mantener la unión en una variedad de entornos de flujo.

Estas fuerzas también dependen en gran medida de la química (Garrett et al., 2008) y de las propiedades
mecánicas del sustrato (Lichter et al., 2008).

Algunas bacterias, como la prótesis Caulobacter crescentus, se destacan entre los modelos microbianos
de resistencia al cizallamiento con su adherencia a la superficie extremadamente fuerte. Las células
individuales de C. crescentus construyen un soporte adhesivo, que se compone de una sustancia pegajosa
que se localiza en los polos de las células, para resistir fuerzas tan grandes como 1 mN, que las hace
efectivamente irreversiblemente unidas a la superficie (Tsang et al., 2006). Las células de C. crescentus
pueden soportar tensiones de corte tan altas como 1 MPa (su área de superficie típica es del orden de 1
mm2). No está claro por qué C. crescentus evolucionó con una fuerza de fijación tan extrema, dado que se
espera que la tensión de corte típica en sus entornos naturales de agua dulce sea de una magnitud
inferior. Una hipótesis es que un vínculo tan fuerte impide el pastoreo de los depredadores (Parry, 2004).

Bonos de captura

Paradójicamente, existen múltiples ejemplos en los que el aumento de la tensión de cizallamiento mejora la
unión de la célula a las superficies. Por ejemplo, Escherichia coli está sujeta a flujos que abarcan una
amplia gama de enfermedades ya que coloniza diferentes tejidos del hospedador (Thomas et al., 2004), y
ha desarrollado fimbrias adaptables que contrarrestan la eliminación por flujo para optimizar la colonización
en estos diversos entornos ( Thomas, 2008). Las fimbrias bacterianas típicas no logran mantener la
adherencia tras la aplicación de una fuerza suficientemente grande, mientras que entre muchas cepas de
E. coli, la unión de fimbrias tipo I se incrementa a medida que aumenta la carga de tracción (Thomas et al.,
2008) (Figura 3A). En estos casos, las fimbrias tipo I están cubiertas con una proteína de punta llamada
FimH que se une específicamente a la manosa que recubre las superficies de muchos tejidos. Bajo
tensión, la FimH unida a manosa cambia la conformación, adoptando un fuerte estado de unión (Le Trong
et al., 2010) (Figura 3A). Esta unión dependiente de la fuerza se conoce como un enlace de captura, lo que
aumenta la confiabilidad de la unión de la celda a la superficie en entornos de flujo fuerte, pero también
conduce a una adherencia de "pegar y rodar" donde las celdas se mueven lentamente en la dirección del
flujo mientras que quedando adherida a la superficie (Thomas et al., 2004).
Por lo tanto, los enlaces de captura pueden ser beneficiosos durante la colonización gastrointestinal,
permitiendo que las células permanezcan en un microambiente beneficioso al anclarse al epitelio y
modular su resistencia al corte en respuesta a las condiciones de flujo. En particular, las cepas
uropatogénicas de E. coli poseen mutaciones en FimH que reducen la dependencia de la adhesión al
esfuerzo de cizallamiento, lo que indica que el beneficio de un enlace de captura se puede perder en un
entorno de flujo pulsátil de baja frecuencia (Thomas et al., 2004). Las células de E. coli pueden fortalecer
aún más el acoplamiento al aprovechar la deformación mecánica de las fimbrias tipo I. Estas fibras se
extienden bajo fuerzas de tensión, de modo que la fuerza aplicada a una sola celda unida se distribuye
entre múltiples fimbrias, disminuyendo la carga experimentada por cada fibra y mejorando la capacidad de
una celda para permanecer unida a una superficie (Whitfield et al., 2014). ).

El esfuerzo cortante también mejora las propiedades de unión de Pseudomonas aeruginosa, que exhiben
tiempos de residencia más largos en superficies cuando se someten a flujo que en condiciones estáticas
(Lecuyer et al., 2011). Sin embargo, a diferencia de E. coli, la P. aeruginosa emplea un mecanismo que es
independiente de la química de la superficie. De hecho, cuando se somete a cizallamiento, la adhesión de
P. aeruginosa aumenta tanto en el vidrio como en los sustratos elastoméricos. El aumento dependiente del
flujo en el tiempo de residencia de P. aeruginosa disminuye en los mutantes que carecen de pili polares
tipo I y IV (cupA1 y pilC), flagella (flgK), o la capacidad de sintetizar ciertos componentes de la matriz de
EPS (pelA). Aunque estas observaciones no eliminan por completo la posibilidad de unión mediante
enlaces de captura, los hallazgos sugieren un mecanismo alternativo de adhesión dependiente del
cizallamiento mediante el cual participan múltiples estructuras adhesivas para aumentar la unión a la
superficie.

Estos dos ejemplos no son raros entre las bacterias, ya que se ha observado adherencia al cizallamiento
en una variedad de otros contextos. Por ejemplo, otras estructuras fimbrales de E. coli pueden formar
enlaces de captura con ligandos distintos (Nilsson et al., 2006; Tchesnokova et al., 2010), y un mayor
esfuerzo por cizallamiento promueve la adhesión de grupos de células de Staphylococcus epidermis a las
superficies recubiertas con fibrinógeno humano (Weaver et al., 2011) y de S. aureus a las fibras del factor
de von Willebrand mecanosensible (Pappelbaum et al., 2013).
 Figura 3. Bacterias que aprovechan el flujo de fluidos a escala de una sola célula (A) E. coli utilizan un
mecanismo de adherencia para mejorar la adhesión a las superficies en condiciones de flujo. (Izquierda)
Por encima de una tensión de corte crítica, es más probable que las células permanezcan unidas a una
superficie en comparación con las células que experimentan una tensión de corte más baja, como lo
demuestra el pico en el número de células adheridas a la tensión de corte finita (Nilsson et al., 2006 ).
(Derecha) La proteína de cobertura fimbrial FimH cambia la conformación cuando la fimbria está bajo
tensión, lo que aumenta su afinidad por la manosa unida a la superficie (Le Trong et al., 2010). La
mecánica de FimH es análoga a un juguete con trampa para dedos, donde la extensión mejora la unión
mediante torsión. (B) (Izquierda) P. aeruginosa se adhiere a superficies con pili polar, y las células migran
a través de la motilidad de contracción en la dirección opuesta al flujo. (Derecha) El flujo reorienta las
células en la dirección opuesta al flujo (Shen et al., 2012); Las sucesivas extensiones de pili y retracciones
promueven la migración en sentido ascendente. (C) (Izquierda) C. crescentus se reorienta en la dirección
del flujo cuando crece en superficies (Persat et al., 2014). (Derecha) Las fuerzas hidrodinámicas actúan
sobre el cuerpo celular curvo de C. crescentus, unido a un polo, para orientar su polo libre hacia la
superficie. Por lo tanto, las nuevas células nacen cerca de la superficie y se pueden unir mejor
inmediatamente después de la separación de la célula madre. Una celda recta que se divide en flujo tiene
su polo orientado lejos de la superficie, lo que reduce la probabilidad de adherencia a la superficie después
de la separación, lo que reduce la velocidad de colonización de la superficie.

Migración Upstream

Algunos mecanismos de interacción de la superficie bacteriana permiten simultáneamente la fijación y la

locomoción de la superficie. Los pili tipo IV, por ejemplo, son estructuras de la superficie celular que se
polimerizan y despolimerizan rápidamente (Burrows, 2012), y las células los utilizan para moverse sobre
superficies a través de la extensión sucesiva del pilus, la unión de la punta y la retracción, lo que en
general se denomina motilidad de contracción (Gibiansky et al., 2010; Mattick, 2002). P. aeruginosa y
muchas otras bacterias utilizan la motilidad de la contracción para explorar las superficies antes de formar
biopelículas (Zhao et al., 2013). La extensión y retracción de Pili también promueven el contacto íntimo
entre las células individuales y el huésped durante la infección (Comolli et al., 1999).

Una característica arquitectónica sorprendente de los pili de tipo IV y otras estructuras adhesivas (por
ejemplo, flagelos y anclajes) es su ubicación estricta en los polos de muchas celdas en forma de varilla. En
entornos con flujo, una célula unida a una superficie a través de un apéndice polar experimentará fuerzas
que tienden a alinear el cuerpo celular con el campo de flujo vecinal. En P. aeruginosa, que se adhiere a
las superficies utilizando su pili polar tipo IV, este fenómeno produce el sorprendente comportamiento
impulsado por el flujo del movimiento hacia arriba. Bajo flujo, unido al pilus 2013), y puede ser una
característica general de las especies adheridas a la superficie que poseen pili polar motorizado.

Forma de la celda

Las bacterias poseen una amplia variedad de morfologías celulares, y cada especie mantiene una forma
característica mediante la coordinación precisa de mecanismos complejos de síntesis de pared celular
(Typas et al., 2012). La función de la forma de la célula es probable que dependa del entorno típico de
cada especie, pero los fundamentos de esta relación entre la forma y el nicho de la célula siguen siendo
desconocidos en la gran mayoría de los casos (Young, 2006). En algunos casos, sin embargo, hay
sugerencias sobre cómo la forma de la célula puede constituir una adaptación a condiciones ambientales
específicas. Por ejemplo, la forma helicoidal de Helicobacter pylori mejora la motilidad de la natación en
hidrogeles, una característica que ayuda a las células en las capas de moco penetrantes durante la
infección estomacal (Sycuro et al., 2012). En contraste, la bacteria curva C. crescentus aprovecha su forma
y la mecánica de su entorno hidrodinámico para mejorar la colonización de la superficie (Persat et al.,
2014). Como se mencionó anteriormente, las células de C. crescentus se adhieren a las superficies
mediante un sujetador polar. En el flujo, las celdas unidas a la superficie se orientan en la dirección del
flujo (Figura 3C). La tensión de cizallamiento genera un par de torsión en sus cuerpos celulares curvados,
que los hace girar de tal manera que sus polos no unidos se dirigen hacia el sustrato. En consecuencia, las
células madre depositan células hijas recién nacidas en la superficie inmediatamente río abajo, lo que
conduce a la colonización de la superficie río abajo y la formación de un biofilm. De hecho, es menos
probable que los mutantes rectos de C. crescentus tengan su progenie inmediatamente adherida a la
superficie después de la división, y tales mutantes se pierden con mayor frecuencia en el flujo en masa
(Persat et al., 2014). Por lo tanto, C. crescentus puede haber evolucionado su forma curva para mejorar la
colonización de la superficie en entornos con flujo, lo que indica que la morfología bacteriana es
potencialmente un resultado de la adaptación a entornos mecánicos específicos.

Como se describió anteriormente, las bacterias adoptan muchos fenotipos que pueden conferir ventajas de
aptitud cuando las células están asociadas con un sustrato. La transición de un estado de natación
planctónica a un accesorio de superficie es presumiblemente una decisión reguladora costosa en términos
de costo energético y de oportunidad potencial. En varios casos notables, las bacterias coordinan las
transiciones entre la unión y el desprendimiento de las superficies, haciendo un uso específico de señales
mecánicas transducidas a través de estructuras de la superficie celular. La motilidad de natación permite
que las células exploren la mayor parte de un fluido, pero se vuelve innecesaria en gran medida después
de la fijación a la superficie. En consecuencia, muchos sistemas flagelares poseen un mecanismo para
desactivar la rotación en respuesta a fuerzas mecánicas. En un entorno de número de flujo de Reynolds
bajo, un objeto que se mueve muy cerca de un límite experimenta una fuerza viscosa más grande en
comparación con la que experimentaría lejos de la superficie (Goldman et al., 1967). En relación con el de
una célula planctónica, el flagelo rotativo de una célula unida a la superficie experimenta una fuerza de
arrastre significativamente mayor, lo que aumenta la carga en los motores flagelares. E. coli aprovecha
este efecto hidrodinámico y altera la rotación flagelar (Lele et al., 2013). Más generalmente, muchas
especies bacterianas exhiben cambios de comportamiento tras la inhibición de la rotación flagelar. La
secreción de EPS, por ejemplo, está fuertemente modulada en respuesta a la carga en flagelos por B.
subtilis y V. parahaemolyticus (Belas, 2014; Guttenplan et al., 2010). De manera similar, C. crescentus
estimula el despliegue de su soporte mediante un mecanismo dependiente de flagelo cuando se adhiere a
las superficies, fortaleciendo la adhesión cuando es necesario (Li et al., 2012). Trabajos recientes han
sugerido que las bacterias también poseen los medios para traducir el contacto superficial en cambios
fisiológicos en la expresión génica independientemente de la función flagelar (Siryaporn et al., 2014). Sin
embargo, las contribuciones de la mecánica en todos los ejemplos anteriores quedan por determinar
cuantitativamente.

Notamos que otros sistemas podrían potencialmente permitir que las bacterias detecten mecánicamente
las superficies. Por ejemplo, los canales mecanosensibles que protegen la integridad de la pared celular
tras el shock osmótico (Phillips et al., 2009) también pueden ser sensibles a la deformación mecánica de la
pared celular y desencadenar respuestas celulares específicas de la superficie, similares a las que ocurren
entre los eucariotas. (Vogel y Sheetz, 2006). Análogamente a las interacciones flagelos-superficie, los pili
tipo IV son estructuras celulares activadas mecánicamente que podrían representar mecanosensores
ideales debido a que su función es altamente dependiente del contacto con la superficie (Skerker y Berg
2001). En conjunto, estos mecanismos probablemente promueven la colonización de superficies y ayudan
a regular la transición del estado unicelular a un estilo de vida multicelular.

Mecánica a nivel de estructuras multicelulares.

En ambientes favorables, las células asociadas a una sola superficie crecen y se dividen o se agregan,
iniciando así la formación de estructuras sésiles y multicelulares conocidas como biopelículas (Hall-
Stoodley et al., 2004). Cuando se nuclean desde una única célula fundadora, las biopelículas a menudo
son genéticamente homogéneas (van Gestel et al., 2014), aunque sus tamaños finitos y organizaciones
espaciales generan microambientes distintos para las células individuales dentro de ellas. Por ejemplo,
algunas células ocupan espacio cerca del sustrato, mientras que otras se localizan en el exterior del
biofilm, adyacente al fluido circundante (O’Toole et al., 2000). La disponibilidad de nutrientes que limitan el
crecimiento y otros solutos a menudo varía a lo largo de gradientes de concentración bruscos en función
de la profundidad del biofilm; como resultado, una población de biopelículas genéticamente homogéneas
puede exhibir fenotipos fuertemente heterogéneos (Stewart y Franklin, 2008). De esta manera y muchas
otras, las restricciones físicas y mecánicas afectan el comportamiento bacteriano dentro de las
biopelículas. Actualmente solo existe una comprensión cuantitativa y cualitativa limitada de los efectos de
la mecánica en el desarrollo bacteriano multicelular. Aquí destacamos trabajos recientes que exploran la
influencia de la mecánica en las biopelículas, con énfasis en la reología de la matriz, el flujo de fluidos y el
transporte molecular.

Reología

La matriz de biopelículas es un material complejo y heterogéneo similar a un gel cuyos componentes

varían de una especie bacteriana a otra. Las propiedades biofísicas de la matriz tienen implicaciones para
las bacterias que residen en las biopelículas, incluida su organización espacial e interacciones ecológicas.
Por ejemplo, la matriz es densa y, por lo tanto, solo es poco permeable al fluido circundante, lo que
garantiza que el flujo se produzca principalmente alrededor de las biopelículas (de Beer et al., 1994;
Stewart, 2012). Una consecuencia de esta característica estructural es que las células bacterianas que
residen en el interior de las biopelículas reciben solo aquellos nutrientes capaces de difundirse a través de
la matriz. Además, las células que residen en las capas más externas de biopelículas a menudo agotan
rápidamente estos nutrientes, lo que niega aún más el acceso a las células en el interior. Los gradientes
resultantes en la disponibilidad de nutrientes (y otras concentraciones de soluto) comúnmente generan
heterogeneidad fisiológica dentro de las biopelículas, incluso aquellas que son monoclonales, ya que las
células dentro de ellas se ajustan a sus distintos microambientes locales (Xu et al., 1998).

Macroscópicamente, las biopelículas son ejemplos de materia blanda viva compuesta de células y matriz
de EPS. La matriz muestra propiedades elásticas, plásticas y viscosas, lo que permite que las biopelículas
se distorsionen bajo fuerzas mecánicas. La respuesta mecánica efectiva a las fuerzas en las biopelículas
se parece a la de un fluido viscoelástico (Wilking et al., 2011); La rigidez de la biopelícula se ve afectada
por la química del medio ambiente (Wloka et al., 2004) y el estado de crecimiento de la población
bacteriana residente (Rogers et al., 2008). La expansión de biopelículas también genera tensiones
mecánicas que pueden modificar su propia morfología y organización celular interna. Por ejemplo, en las
biopelículas de Bacillus subtilis que crecen en una interfaz aire-líquido, los esfuerzos de compresión
generados por el crecimiento y la expansión en un espacio confinado llevan a la alteración de la morfología
global de la biopelícula. En particular, las hojas de biopelícula de B. subtilis se comban para generar
películas arrugadas en la superficie del fluido (Trejo et al., 2013).

En las interfaces sólido-líquido, las tensiones generan arrugas en las ubicaciones de la rigidez de la matriz
más débil. La muerte celular reduce localmente el grosor de la biopelícula, lo que enfoca el estrés
mecánico o reduce la adhesión local de la biopelícula, lo que lleva a un pandeo vertical de la matriz (Asally
et al., 2012). Estos cambios morfológicos pueden generar una red de canales llenos de líquido que
aumentan la permeabilidad y permiten el transporte de nutrientes por flujo, mejorando así la disponibilidad
de nutrientes para las células dentro del biofilm en comparación con el transporte puramente difusivo
(Wilking et al., 2013; Figura 4A). De manera similar, la morfología arrugada de las biopelículas de P.
aeruginosa aumenta su área de superficie general, mejorando así la absorción de oxígeno (Kempes et al.,
2014).
Fluir

El flujo alrededor de las biopelículas también puede afectar fuertemente su morfología, deformando sus
estructuras. El esfuerzo de cizallamiento aplicado a las bacterias adheridas puede lavar los compuestos
secretados (Liu y Tay, 2002), lo que afecta la densidad de las biopelículas, limita el crecimiento y, como
resultado, reduce el tamaño general de las biopelículas (Kostenko et al., 2010). Tras la transición de
células unidas a comunidades de biopelículas multicelulares más grandes, los efectos mecánicos pueden
apuntalar la propagación de bacterias a nuevas ubicaciones. Las grandes tensiones de cizallamiento
generadas en condiciones de flujo fuerte pueden conducir a la ruptura de la biopelícula, lo que desaloja las
bacterias de la comunidad (Purevdorj et al., 2002). En consecuencia, las células bacterianas integradas
anteriormente en biopelículas pueden dispersarse a un nuevo territorio y potencialmente colonizar otros
entornos que son más favorables (Stoodley et al., 1999).

Un ejemplo sorprendente del efecto del flujo en la arquitectura de biopelículas aparece en geometrías de
flujo irregulares. En esquinas y curvas en canales curvos, biofilms de varias especies se desarrollan como
serpentinas (estructuras largas y filamentosas suspendidas en el fluido) que nuclean en irregularidades
topológicas de superficie específicas. Rusconi et al. (2010) mostraron que el flujo alrededor de las
esquinas promueve el inicio de la formación de transmisores. Las biopelículas se nuclean en el extremo
corriente abajo de una curva y se alargan en la dirección del flujo hacia la línea central del canal (Figura
4B). Las simulaciones numéricas sugieren que el punto de unión de un transmisor co-localiza con el flujo
de fluido en movimiento en la dirección perpendicular al plano de flujo principal. La intensidad de este flujo
secundario aumenta con los giros más agudos, lo que es consistente con la observación de que las
serpentinas se forman más rápidamente en tales geometrías (Rusconi et al., 2010).

La formación de serpentinas, por lo tanto, depende de las características del flujo junto con la topología de
la superficie. Una característica crítica del crecimiento de la serpentina, en contraste con las biopelículas
asociadas a la superficie, es su extensión espacial en la mayor parte del fluido. Mientras que las
biopelículas asociadas a la pared solo alteran moderadamente el flujo, las serpentinas obstruyen los
canales de flujo cerca de la línea central y, por lo tanto, ralentizan el flujo mucho más dramáticamente que
las biopelículas en las paredes. Este efecto genera una retroalimentación positiva en la que la disminución
del flujo favorece la acumulación de EPS y otros materiales suspendidos, hasta que las serpentinas
obstruyen completamente el canal y detienen el flujo de manera catastrófica (Drescher et al., 2013).
Debido a que los giros y las curvas son comunes dentro de los sistemas de flujo, como la vasculatura de
un animal o un sistema de enfriamiento industrial, anticipamos que la obstrucción inducida por el cable es
un impedimento frecuente en muchos sistemas y redes fluídicas. De acuerdo con esta idea, los
serpentines se forman en elementos de flujo comunes a varios sistemas ambientales, incluidos los filtros,
el suelo y los stents (Drescher et al., 2013). Muchos estudios en este ámbito se han centrado en P.
aeruginosa como organismo modelo (Stoodley et al., 2002); de manera similar, S. aureus forma
serpentinas que obstruyen rápidamente los canales, y lo hace de una manera que depende de la química
de la superficie de nucleación (Kim et al., 2014). Aunque solo se ha investigado recientemente, ahora se
predice que las serpentinas serán comunes cuando las biopelículas encuentren curvas y fluyan.
 Figura 4. Efecto de la mecánica en comunidades multicelulares (A) Las fotografías y las micrografías
electrónicas de barrido muestran canales fluidos dentro de los biofilms generados por la deformación de la
matriz de EPS (Wilking et al., 2013). La evaporación de líquidos a través de la biopelícula genera un flujo
dentro de los canales, lo que lleva a un rápido transporte de nutrientes por advección dentro de la
biopelícula. En ausencia de canales, los nutrientes solo se difunden lentamente en la biopelícula. (B) El
flujo de fluidos promueve las extrusiones de biopelículas en las curvas de los canales que se convierten en
serpentinas tipo fibra que se extienden hacia la línea central del canal (Drescher et al., 2013). Estos
generadores de flujo se forman como curvas de canal e inducen patrones de flujo localizados que pueden
favorecer la acumulación de EPS (Rusconi et al., 2011). (C) La interacción entre el transporte difusivo y
advectivo de un nutriente determina las interacciones entre las células secretoras de enzimas
"productoras" que digieren un sustrato de quitina y las células "engañadoras" mutantes que no secretan la
enzima quitinasa (Drescher et al. ., 2014). Sin flujo, la difusión de oligómeros de quitina liberados (GlcNac)
n permite que las células "tramposas" exploten poblaciones de células productoras de quitinasa. Por el
contrario, el flujo elimina rápidamente el Sol (GlcNac) n liberado de la superficie de la quitina, lo que niega
el acceso a los "tramposos" y hace que la producción de quitinasa secretada sea evolutivamente estable.

Transporte

Las bacterias sobreviven, crecen y se comunican mediante la detección y la importación frecuente de

compuestos presentes en sus entornos. Los nutrientes, las moléculas de señalización y los
antimicrobianos afectan el comportamiento de las bacterias individuales y el desarrollo de sus
comunidades multicelulares. Estas moléculas generalmente alcanzan las células por difusión, pero el flujo
puede modificar dramáticamente la distribución espaciotemporal de dichos compuestos y las
concentraciones efectivas que experimentan las células adheridas a la superficie (Berg y Purcell, 1977;
Squires et al., 2008). En la práctica, la contribución del flujo al proceso de transporte se puede estimar con
el número de clets de Pe´, que mide la contribución relativa al transporte de un soluto por advección
(mediado por el flujo) en comparación con la contribución por difusión (Pe = UL / D). , donde U es un valor
típico de velocidad de flujo, L es la escala de longitud del sistema (por ejemplo, de la biopelícula) y D es la
difusividad del soluto. Por ejemplo, un número de clúes de Pe´ mucho mayor que la unidad significa que
los solutos se mueven principalmente con el flujo. Por el contrario, el transporte de un soluto está
dominado por la difusión cuando el flujo es lo suficientemente lento como para producir un número de
clúes de Pe´ mucho menor que uno.

En muchos casos, los nutrientes no se derivan del fluido a granel que rodea una biopelícula, sino de los
sustratos a los que se unen las células. En tales casos, las células que viven en biopelículas a menudo
digieren los sustratos en los que residen secretando enzimas extracelulares, liberando nutrientes que se
pueden difundir libremente. Este escenario genera un enigma de bienes públicos: las células que secretan
enzimas digestivas pueden ser explotadas por otras especies que no producen la enzima pero que, sin
embargo, se benefician de su producción (West et al., 2006). Trabajos recientes han demostrado que un
entorno de flujo puede ayudar a superar este dilema evolutivo (Driscoll y Pepper, 2010). Fuera de su
huésped humano, el patógeno Vibrio cholerae crece en partículas sólidas de la quitina biopolímero,
secretando enzimas quitinasas que digieren quitina y liberan el producto soluble N-acetilglucosamina
(GlcNac) y oligómeros, que son excelentes nutrientes para el crecimiento. En ausencia de flujo, un
"tramposo" (un mutante que no produce quitinasa) puede limpiar los nutrientes de difusión liberados por la
actividad de la quitinasa del productor y superar al productor porque el tramposo no paga el costo de
producir quitasa (Figura 4C ). En contraste, el flujo dispersa los nutrientes generados por los productores
lejos de los gránulos de quitina, limitando el crecimiento exclusivamente a los productores de quitinasa y
sus descendientes, que residen en la superficie de la quitina; los mutantes que hacen trampa están
esencialmente muertos de hambre del sistema (Drescher et al., 2014).

De manera similar, el flujo transporta moléculas de señalización y otros compuestos secretados que
median interacciones sociales dentro y entre poblaciones bacterianas (Miller y Bassler, 2001). Un ejemplo
importante es cómo el flujo afecta la detección de quórum, un sistema de comunicación bacteriana intra e
inter especies que se utiliza para sincronizar comportamientos colectivos. La detección de quórum se basa
en la producción, liberación y detección de moléculas de señal extracelulares llamadas autoinductores. En
ambientes bien mezclados, las células evalúan la densidad celular midiendo la concentración del
autoinductor local para iniciar comportamientos grupales. Por el contrario, en un entorno heterogéneo, por
ejemplo, en una población sésil en flujo, la advección y la difusión afectan las concentraciones locales del
autoinductor. Las bacterias pueden, de hecho, usar sistemas de detección de quórum para detectar el flujo
en su entorno, explorando así su entorno vecinal por su potencial de crecimiento o por otras señales
(Cornforth et al., 2014).

Escalas de conexión

Comprender completamente el comportamiento bacteriano requiere esfuerzos para abordar la asociación

común e íntima de las células con las superficies. Debemos considerar las células individuales, su
morfología y sus respuestas a señales ambientales y fuerzas mecánicas como las descritas anteriormente:
adhesión a la superficie en presencia de flujo, transporte de solutos y propiedades reológicas de
biopelículas. La división celular y la secreción de la matriz se combinan para promover la formación de
biopelículas en la escala de cientos a millones de células para las cuales el flujo, el transporte y la reología
se retroalimentan en la dinámica de la población dentro de las poblaciones de biopelículas. Aclarar las
consecuencias de la mecánica de las células bacterianas en aislamiento y como miembros de colectivos
es, por lo tanto, fundamental no solo para comprender las transiciones entre el comportamiento bacteriano
individual y multicelular, sino también para la evolución bacteriana en el sentido más amplio.

Los fenómenos analizados en las secciones anteriores, que se refieren en gran medida al comportamiento
de células individuales, influyen en las transiciones de la ocupación de la superficie por bacterias
individuales a la formación de grandes comunidades multicelulares. Una adaptación que primero parece
beneficiar solo a las células individuales podría influir en la aptitud de sus descendientes muchas
generaciones después (Odling-Smee et al., 1996). Un buen ejemplo de dicha adaptación es el aumento de
la capacidad de C. crescentus para colonizar las superficies en flujo como se describió anteriormente. La
curvatura celular aumenta la velocidad de unión a la superficie por parte de las células hijas, lo que
aumenta la velocidad de colonización de la superficie y, en última instancia, permite la captura de un
espacio de nicho aumentado en una biopelícula tridimensional que puede extender muchas longitudes de
las células lejos del sustrato. Las poblaciones de células curvadas forman biopelículas robustas más
rápidamente que las células rectas, de modo que la curvatura se puede ver como adaptativa no solo en la
escala de una única bacteria colonizadora sino en la escala de poblaciones clonales que descienden de las
células fundadoras asociadas a la superficie. De manera similar, la motilidad aguas arriba de células de P.
aeruginosa únicas proporciona una ventaja a nivel de grupo cuando compite con células planctónicas y
otras especies durante la colonización de redes fluídicas (Siryaporn et al., 2015).

Al formar biopelículas, las bacterias implementan programas de expresión génica individuales que, en
última instancia, contribuyen a las propiedades de toda la comunidad. A medida que las células
individuales responden o modifican las características químicas y mecánicas de su entorno, expresan
fenotipos y generan configuraciones de grupos celulares que contribuyen a la supervivencia colectiva. Por
ejemplo, se ha propuesto una rotación flagelar alterada al contacto con la superficie como una señal que
induce la formación de biopelículas, ya que la motilidad y la secreción de EPS están correlacionadas
negativamente (Blair et al., 2008; Krasteva et al., 2010). Por lo tanto, el contacto con la superficie genera
una señal mecánica que desencadena una cascada de señalización intracelular que conduce a muchos
fenotipos, que culminan en una adhesión estable al sustrato. Tras el crecimiento y la división, las bacterias
modifican su entorno mecánico mediante la secreción de EPS que ayuda a mantener la coherencia
espacial de los linajes clonales dentro de los biofilms nacientes (Millet et al., 2014; Nadell y Bassler, 2011)
y desalienta la invasión de las células planctónicas (Nadell et al. , 2015). Estos y otros estudios recientes
en conjunto sugieren que los biofilms a menudo surgen del comportamiento de células individuales que
son localmente cooperativas dentro de su cepa o linaje clonal y competitivas a nivel mundial con otras
cepas y especies con las que pueden estar creciendo (Mitri y Foster, 2013).

Posteriormente a la formación de comunidades multicelulares, la estructura del biofilm y las propiedades

mecánicas se retroalimentan sobre las fuerzas y concentraciones de soluto experimentadas por las
bacterias que viven en el biofilm para influir aún más en sus comportamientos individuales y colectivos. Por
ejemplo, debido a que la advección es despreciable dentro de la matriz, el transporte de soluto ocurre
principalmente a través de la difusión, lo que a su vez conduce a gradientes de concentración
heterogéneos de compuestos solubles secretados o absorbidos por bacterias individuales (Stewart, 2003).
Como hemos descrito anteriormente, estas distribuciones de solutos influyen aún más en la dinámica
competitiva dentro y entre los linajes celulares en competencia dentro de las biopelículas. La estructura del
biofilm y las propiedades de difusión también influyen en la acumulación de autoinductores implicados en
la activación regulada por el quórum de fenotipos de grupo como la virulencia en P. aeruginosa (De Kievit
et al., 2001). En V. cholerae, por el contrario, la detección de quórum se retroalimenta en la estructura y la
reología del biofilm para reprimir el EPS a alta densidad celular, iniciando así la dispersión del patógeno
(McDougald et al., 2012).

¿Las células individuales perciben activamente las fuerzas mecánicas? ¿Cuál es la relevancia de estas
características en contextos ecológicos realistas? ¿Cómo se forman las biopelículas en entornos
complejos y diversos, como el tracto digestivo? ¿La mecánica de órganos afecta el desarrollo de la
población bacteriana? Estas y muchas otras preguntas son extensiones naturales de exploraciones
experimentales pasadas y actuales del comportamiento bacteriano. Resolver las conexiones entre la
mecánica y la biología en el mundo bacteriano requerirá enfoques integradores que combinen los
principios de genética, bioquímica, química, biología evolutiva, física e ingeniería.

La mecánica específica de la superficie es ubicua en el mundo bacteriano, y los ejemplos anteriores

resaltan el papel esencial que desempeñan en muchos elementos de los procesos bacterianos. Los
conocimientos adquiridos a partir de una visión de las bacterias informada por la mecánica, a su vez,
mejorarán nuestra capacidad para controlar los microbios en entornos donde pueden ser útiles o
perjudiciales para los humanos. Por ejemplo, una mejor comprensión de cómo los mecanismos mecánicos
contribuyen a regular la virulencia puede proporcionar enfoques alternativos para combatir las infecciones
y ayudar a superar el aumento de la resistencia a los antibióticos. De manera más general, la mecánica
bacteriana representa una interesante dirección de investigación para los biólogos que buscan comprender
la fisiología bacteriana en entornos realistas y para los ingenieros y físicos que buscan desarrollar nuevas
herramientas y modelos para interactuar con la microbiología y desarrollar una comprensión totalmente
interdisciplinaria del comportamiento bacteriano.