Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
PROGRAMA
PROGRAMA DE PRODUCCION Y
SALUD ANIMAL
PROGESTERONA
RIA KIT
Estos kits y protocolos fueron preparados por la unidad de produccion animal, laboratorios de Agricultura,
agencias de laboratorios, Seibersdorf, Austria, en colaboración de la corporación de productos de
diagnostico, Los Angeles U.S.A. con el soporte de los programas de producción animal y sección de
salud de el articulo FAO/IAEA. Division nuclear y técnicas relacionadas en alimento y agricultura.
1. INTRODUCCION
El kit Radioinmunoensayo de Progesterona (RiA) de la FAO y el OIEA fue
desarrollado y validado para el ganado en colaboración con la Corporación de
Productos de Diagnóstico para cumplir los siguientes criterios:
B. Consideraciones de seguridad
El kit contiene material radiactivo y otros ingredientes que requieren ciertas
precauciones:
1). Se ha añadido azida sódica a concentraciones de 0,2 g / dl o menos a
ciertos componentes como agente anti-bacteriano. Para evitar la
acumulación de azidas metálicas explosivas en las tuberías de plomo y
cobre, los reactivos deben desecharse en las aguas residuales sólo si se
diluyen y se enjuagan con grandes volúmenes de agua. Utilizar sistemas
de drenaje sin cobre y sin plomo cuando sea posible y contaminar
ocasionalmente con hidróxido de sodio al 10%, o comercialmente
neutralizar, por ejemplo, Fisher NeutrAzide (Cat No. CS-208).
2). El personal de laboratorio debe estar familiarizado con las precauciones estándar
para el uso de materiales radiactivos, es decir, la protección radiológica, la
manipulación, la eliminación y los procedimientos para completar en caso de
derrames de dichos materiales. En el Apéndice I se ofrece información básica sobre
el tratamiento y la eliminación de 126I.
3). Una Hoja de Datos de Seguridad de Materiales relativa a los componentes del kit
se puede encontrar en el Apéndice II.
Donde,
C. Muestras de leche
El muestreo y el procesamiento de la muestra pueden tener una influencia
importante en las concentraciones de progesterona en la leche. Para
obtener resultados fiables, por lo tanto, es de suma importancia aplicar un
esquema de muestreo lo más coherente posible:
i) Utilizar muestras de leche de la misma etapa de ordeño (preferiblemente
leche compuesta o strippings”o partes”).
ii) Añadir un conservante [1 comprimido de sodio-azida (100 mg) o 1 dicromato
(100 mg) por 10 ml] en la leche entera.
iii) Centrifugar la leche a 2.000G (para el desnatado de la grasa) a la misma
temperatura cada vez (preferiblemente 4 * C, si se dispone de centrífuga refrigerada)
durante 15 minutos. La centrifugación debe hacerse lo antes posible después del
muestreo; Sin embargo, pueden transcurrir unos pocos días entre la recogida y la
centrifugación sin afectar negativamente al valor de progesterona de una muestra.
iv) Saque la leche descremada de la siguiente manera:
a) Si la leche se centrifuga a temperatura ambiente, se coloca en el refrigerador
durante 15 minutos para endurecer la capa de grasa.
b) Utilizar una varilla de vidrio para perforar la capa de grasa.
c) Transfiera toda la muestra de leche descremada al vial de almacenamiento
usando una pipeta pasteur.
v) Las muestras de leche desnatada con conservante se pueden almacenar de
una de las siguientes maneras:
D. MANTENIMIENTO DE REGISTROS
1) MUESTRAS
En el momento de la recolección de las muestras es importante registrar el
número de animal y la fecha en el tubo de recolección (no en la tapa) además
en un diario permanente junto con la información pertinente que se utilizará
más adelante para evaluar el estado reproductivo Del animal. La cantidad
mínima de información que debe registrarse es la fecha del calendario y el
número de identificación del animal. Siempre que sea posible, se registrará
información adicional, como la edad, el sexo, la raza y cualquier otra
información pertinente sobre la historia del animal, como la fecha de cría, la
fecha de parto, el celo observado, etc.
6 .PROCEDIMIENTO RADIOINMUNOENSAYO
1 TC 1000
2 TC 1000
3 B 1000 100
4 B 1000 100
5 STD # 2 ~ B 1000 100
6 STD # 2 ~ 1000 100
7 STD
B #3 ~C 1000 100
8 STD # 3 ~ C 1000 100
9 STD # 4 ~ D 1000 100
10 STD # 4 ~D 1000 100
11 STD #5 ~ E 1000 100
12 STD # 5 ~ E 1000 100
13 STD # 6 ~ F 1000 100
14 STD # 6 ~ F 1000 100
15 STD # 7 ~ G 1000 100
16 STD # 7 ~ G 1000 100
17 !OC ! 1000 100
18 !OC ! 1000 100
19 !OC ! 1000 100
20 !OC ! 1000 100
desconocido 1000 100
!OC ! 1000 100
!OC ! 1000 100
!OC ! 1000 100
!OC ! 1000 100
desconocido 1000 100
!OC ! 1000 100
!OC ! 1000 100
199 !OC ! 1000 100
Dax 200 !OC! 1000 100
F. Cubrir los tubos con parafilm o papel de aluminio e incubar durante la noche
en un refrigerador (4 * c).
Es importante que las condiciones de incubación sean consistentes de
ensayo a ensayo.
En los casos en que se necesita información rápidamente, la etapa de
incubación puede acortarse a 4 horas a temperatura ambiente; Sin embargo,
la variación puede aumentar, y los errores en las estimaciones de muestras
desconocidas y controles de calidad pueden ser más altos de lo normal.
Overnight refrigerated: refrigerado durante toda la noche
Or: o
4 hours room temperature: 4 horas a temperatura ambiente
H. Contar la radioactividad en todos los tubos durante un tiempo fijo (50 segundos o
un minuto) en un contador gamma. Si se utiliza un contador manual de un pozo,
asegúrese de que la posición de los tubos en el pozo se mantenga constante.
TC es una medida del estado del trazador. Un valor de recuento total inferior a
12.000 - 15.000 cpm indica una necesidad de precaución en la interpretación de los
resultados del ensayo
B máx. Es una medida de lo bien que funciona el ensayo (es decir, cómo se une la
progesterona al anticuerpo recubierto sobre los tubos). Si este valor se modifica por
debajo del 20-25%, el rendimiento del ensayo debe considerarse insatisfactorio y el
ensayo se deroga.
K. Usando el papel gráfico logit-log suministrado con los kits, trace el porcentaje
promedio de unión (B / Bo) en el eje vertical (y) y la concentración estándar de
progesterona en el eje horizontal (x). Dibuje una línea recta (mejor ajuste) a través
de los puntos del gráfico.
No dibuje una línea recta entre cada coordenada x, y dibuje una mejor recta a través
de todas las coordenadas. Las concentraciones de progesterona de las muestras y
los Controles de Calidad pueden entonces medirse leyendo su porcentaje de valores
enlazados e interpolando desde la curva estándar hasta la concentración de
progesterona en el eje x (Ver Figura 3).
Alternativa. Se puede utilizar un programa informático apropiado para calcular los
resultados.
Simple: muestra
Percent bound: limite porcentual
Quality control parameters: pzrametros de control de calidad
Samples: muestras
Binding:union
Figura 4 Ejemplo de gráficos de control de calidad internos para las muestras ICC I y
II
Figura 5. Ejemplo de informe de control de calidad externo
(EQC). La muestra de plasma, que contenía 7,70 nmoI / L de
progesterona, fue enviada a laboratorios de contrapartida. El
valor medio reportado por estos laboratorios fue de 7,77
nmol / L (línea horizontal sólida), con intervalos de
confianza (2SD) de 6,53 y 8,89 (líneas horizontales rotas).
Los laboratorios individuales están codificados (números en el
eje horizontal) y están representados por estrellas y
cuadrados en el gráfico. Los laboratorios con resultados fuera
de los intervalos de confianza (outliers) están representados
en el gráfico por cuadros
7. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Concentraciones de progesterona
Las concentraciones de progesterona sérica, plasmática o láctea pueden
utilizarse como una ayuda para controlar el inicio de la pubertad, la actividad
ovárica posparto, los ciclos de celo y el embarazo en animales domésticos.
Se sugiere que los investigadores establezcan sus propias pautas para estos
propósitos basándose en la correlación entre la concentración de progesterona
y los datos fisiológicos / clínicos obtenidos de los registros, la observación del
estro, el apareamiento o Al, la palpación rectal, la ecografía, etc.
La investigación sugiere que existen diferencias en las concentraciones de
progesterona en diferentes estados fisiológicos tanto dentro como entre
diferentes especies y razas. Por lo tanto, no es prudente extrapolar los
hallazgos de un laboratorio a otro. Es una buena idea para cada laboratorio
establecer concentraciones de progesterona indicativas de la función del
cuerpo lúteo en sus propios rebaños animales. Por ejemplo, las
concentraciones de progesterona tienden a ser más bajas en Zebu que en el
ganado europeo, y aún más bajas en los búfalos que en los bovinos tipo Zebu.
8. GARANTÍA DE CALIDAD DE ENSAYOS
2) PRECISION