Actividad Momento 3

Informe práctica de laboratorio

Curso académico:

Química Metabólica

Tutor

Jairo Moreno Granados

Estudiante

Alicia maría Casas.

CC.39.407.638

Grupo:

35200_41

Programa agronomía

Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD

Cead Turbo

Apartado Mayo - 20 15
 Introducción

La ureasa es una enzima amidohidrolosa, cataliza la hidrólisis de la urea

produciendo gas carbónico, hidróxido de amonio, los principales inhibidores son
los metales pesados como la plata (Ag+1) el mercurio (Hg+2) también el ácido
hidroxámico y latiourea. La enzima ureasa, hidroliza la urea produciendo amonio
que contiene NNP y CO2. A través de esta se puede tomar una muestra de la
actividad ureásica (AU), a través de este método se puede analizar el Nitrógeno
No Proteico tanto en suelo, pastos, sangre, orina y otros elementos de origen
biológico Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando
dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa. Esta actividad
enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo
para diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo
retardado.
La ureasa es una exoenzima que cataliza la reacción de hidrólisis de la urea, el
principal producto celular nitrogenado de la degradación de las proteínas y los
ácidos nucleicos, el cual es más fácil de eliminar que otras formas de nitrógeno
como el amoniaco porque es soluble en agua y menos tóxico Science in School,
2008). En dicha reacción, la urea se rompe para formar dióxido de
Carbono y amonio, como se describe en la siguiente reacción Quintero-Lizaola et
al., 2005
H2 NCONH2 + H2 O → 2NH3 + CO2
La ureasa se encuentra principalmente en semillas, microorganismos e
invertebrados. En las plantas, es un hexámero (consiste en seis cadenas
idénticas) y se encuentra en el citoplasma. En las bacterias, consiste en dos o tres
subunidades diferentes. Para su activación necesita unir dos iones de níquel por
subunidad Science in School, 2008. Su pH óptimo es 7.4, y su temperatura óptima
60 °C Kandeler y Gerber, 1988.
Las reacciones de hidrólisis se producen cuando los compuestos orgánicos
reaccionan con el agua. Se caracterizan por la división de una molécula de agua
en un grupo de hidrógeno e hidróxido con uno o ambos de estos apegándose a un
producto orgánico de partida. La hidrólisis, por lo general, requiere el uso de un
catalizador ácido o base y se utiliza en la síntesis de muchos compuestos útiles. El
término "hidrólisis" significa literalmente dividir con agua; el proceso inverso,
cuando el agua se forma en una reacción, se llama condensación .
 Mapa conceptual

1.2 MENTEFACTO CONCEPTUAL

MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Tabla 1: lista de equipos utilizados

Materiales y Equipos requeridos

Materiales Equipos
Materiales Equipos

Tubos de ensayo Gradilla

__________________________________________________________________
Pinzas para bureta Erlenmeyer de 125 ml

_________________________________________________________________

Pipeta de 5 y 10 ml Matraz aforado de 100ml

Baño termostato Beaker de 400 ml

Bureta de 25ml Soporte universal

2.2 tabla 2: lista de reactivos utilizados

Reactivo Fórmula Concentración
Ureasa 0.1 % H2N-CO- % en buffer fosfato de pH= 7.0
NH2
Urea CO(NH2)2 0,25 M
Cloruro de Mercurio HgCl2 1%
Cloruro de HCL 0,1 N
hidrogeno
Indicador Tashiro x x
Agitar vigorosamente los tubos (10seg) ,adicionar 2 gotas de indicador de
Tashiro y volver a mezclar(15seg) un color azul- verdoso indicará prueba
positiva para la actividad ureásica en la RBE ;posteriormente, sacar el
blanco y depositar la solución en un Erlenmeyer.
2.3 tabla 3: técnicas analíticas utilizadas

Alistar el montaje de titulación: lavar, purgar, cargar y enrasar la bureta con

HCl 0,1N, Colocar el Erlenmeyer que contiene la solución blanco, debajo la
bureta y adicionar lentamente el HCl, hasta que aparezca y permanezca un
color rosado-violáceo. Esto indica que los equivalentes-gramo del hidróxido
de amonio fueron neutralizados por los equivalentes-gramo del ácido
clorhídrico. Registrar en su tabla de datos, los mL de HCl gastados en la
titulación del blanco. Repetir el procedimiento anterior, con el tubo St y
anotar los mL empleados de HCl, Continuar el proceso con los tubos 1, 2, 3
y 4; registrar los mL gastados de HCl en la tabla de dato.
2.3.1 Tablas de datos

Tubos Tipo de muestra datos agro

climatológicos
o complementarios
1 harina Propiedades
maíz blanco nutricionales de la harina
de maíz cabe destacar
que tiene los siguientes
nutrientes: 2,40 mg. de
hierro, 8,29 g. de
proteínas, 18 mg. de
calcio, 9,42 g. de fibra,
120 mg mg. de
magnesio, 50 ug. De
vitamina A, 0,44 mg. de
vitamina B1, 0,13 mg. de
vitamina B2, 0,82 mg
2 forraje Cosechado para
pasto estrella ensilado y henificación
en mezcla con
leguminosas para corte
forraje verde. Es una
especie de gran valor

3 suelo franco
para el control de
erosión en suelos
pobres y en zonas de
ladera. El pasto Estrella
está muy bien adaptado
a los climas cálidos y
medios
Suelos fértiles apropiados
para cultivos y de
características relativas de
material arcilloso, limoso y
arenisca con propiedades
químicas y físicas óptimas
para el desarrollo del agro.

2.3.2 Flujo grama

Muestreo

Pesada

Extracción

Viraje de color

Datos
Resultado Cálculos
3.1 TABLA DE DATOS

Tubos Tipo de Muestra mL gastados de HCl 0,1N

B Blanco 5
St Ureasa Estándar 8
1 Suelo 10
2 Forraje ó harina 12

Indicador Descripción Valor

Wm1
Wm2 Peso muestra de harina ó
forraje
Vf s
Vf H Volumen de filtrado para harina

3.2 ecuaciones de cálculo

(𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝑆𝑡−𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝐵)×0,1×1000µ𝑚𝑜𝑙

AU = 2×𝑡(𝑚𝑖𝑛)
× 𝐹𝑑

10𝑚𝐿
𝐹𝑑 =
5𝑚𝐿
3.2.2. Actividad Ureásica de la harina
(𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 (1)−𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝐵)×0,1×1000µ𝑚𝑜𝑙
AU= × 𝐹𝑑
2×𝑡(𝑚𝑖𝑛)

10𝑚𝐿 10𝑚𝐿 100𝑔

𝐹𝑑 = × ×
5𝑚𝐿 5 𝑉𝑆 (𝑚𝐿) 2.067𝑊ℎ𝑎𝑟𝑖𝑛𝑎

10000
𝐹𝑑 = = 193.51
51.675

(10𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 (1)−5𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 𝐵)×0,1×1000µ𝑚𝑜𝑙

AU= × 193.51
2×0.5
 AU=96755

Actividad Ureásica en el suelo (tubo 2)

𝐻𝐶𝐿 (2) − 𝑚𝐿𝐻𝐶𝐿 𝐵 × 0.1 × 1000𝑈µ𝑚𝑜𝑙

𝐴𝑈 = × 𝐹𝑑
2 × 𝑡(𝑚𝑖𝑛)

10𝑚𝐿 10𝑚𝐿 100𝑔

𝐴𝑈 = × ×
5𝑚𝐿 5 𝑉𝑆 (𝑚𝐿) 1.33𝑊𝑆𝑈𝐸𝐿𝑂

10000
𝐴𝑈 = = 300.75
33.25
12𝐻𝐶𝐿 (2) − 5𝑚𝐿𝐻𝐶𝐿 𝐵 × 0.1 × 1000𝑈µ𝑚𝑜𝑙
𝐴𝑈 = × 300.75 = 210525
2 × 0.5

Actividad Ureásica del forraje

𝐻𝐶𝐿 (2) − 𝑚𝐿𝐻𝐶𝐿 𝐵 × 0.1 × 1000𝑈µ𝑚𝑜𝑙

𝐴𝑈 = × 𝐹𝑑
2 × 𝑡(min)

10𝑚𝐿 10𝑚𝐿 100𝑔

𝐴𝑈 = × ×
5𝑚𝐿 5 𝑉𝑆 (𝑚𝐿) 3. 35𝑊𝐹𝑂𝑅𝑅𝐴𝐽𝐸
10000
𝐴𝑈 = = 119.4
83.75

8𝐻𝐶𝐿 (2) − 5𝑚𝐿𝐻𝐶𝐿 𝐵 × 0.1 × 1000𝑈µ𝑚𝑜𝑙

𝐴𝑈 = × 119.4 = 35820
2 × 0.5

3.3 TABLAS DE RESULTADOS

Actividad Ureásica RESULTADOS

HARINA 193.51

SUELO 300.75

FORRAJE 119.4
 3.4 GRÁFICAS ESTADÍSTICAS

RESULTADOS
350

300
300.75
250

200
193.51 RESULTADOS
150

100 119.4
50

0
HARINA SUELO FORRAJE

3.5DISCUSIÓN E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

La actividad ureásica será mayor en la muestra de suelo, de acuerdo a los mL de

HCl gastados en la titulación del amonio producido, La actividad ureásica será
menor en la muestra de harina, La actividad ureásica del forraje será intermedia
Teorías Científicas

1. Teoría Cinético Molecular (TCM)

2. Teoría cinética del Complejo Activado (TCA)
 1. CONCLUSIONES

Los CNE son reservas energéticas en plantas

la muestra no sostenía gran cantidad de CNE.

El método Fenol-sulfúrico, deshidrata los azucares y esta

reacción da como resultado una sustancia de color naranja.

para medir la intensidad del color se usa el método

espectrofotométrico

El color desarrollado durante el procedimiento puede ser estable

por varias horas.
 2. bibliografía

Granados, J.,(2010),Módulo Bioquímica Metabólica, Unidad 2, cap. 2; ECAPMA;

UNAD

Granados, J., (2010), Protocolo prácticas de laboratorio, Pág. 3-8; ECAPMA;

UNAD Granados.

García,J.,(2000),Fisicoquímica Aplicada; Cap. 11, Ed Átropos, Bogotá, Colombia

www.iesabastos.org/archivos

Laboratorio de Bioquímica Vegetal Actividad ureásica (AU) Prof: Jairo Granados.,

MSc
Principios o leyes Científicos

1. Ley Cinética de Michaelis-Menten

2. Leyes de la Cinética Química
3. Ley Cinética de Arrhenius

RESULTADOS

INTERPRETACION Y DISCUSION

TABLA DE DATOS
Actividad Biológica y enzimática en suelos afectados por sales del alto valle
de rio negro y Neuquén

EXPERIMENTO
 Diagrama uve heurístico del experimento

Preguntas centrales
Fundamentación conceptual a. ¿Cómo se extrae y
Dimensión metodológica.
cuantifica La AU en
muestras Biológicas?

Teorías científicas b. ¿Cuál es la AU En las

muestras analizadas? Conclusiones
Principios / leyes
1. ley cinética de .c. ¿A qué se atribuye las
diferencias existentes
Michaelis-Menten entre los valores de AU, en
las muestras analizadas? Interpretación/Discusión
2. leyes de la
Química cinética
Actividad biológica y Resultados y Gráficas
3. ley cinética de enzimática en suelos
arrhenius afectados por sales del
alto valle de rio negro y Tabla de datos
EXPERIMENTO
Neuquén
Conceptos claves
Experimento Transformación de
Mapa conceptual
datos (Cálculos)
Bibliografía