INTRODUCCIÓN

Los sistemas vivientes se configuran por medio de una variedad enorme de

reacciones bioquímicas, casi en su totalidad mediadas por un conjunto de
catalizadores biológicos notables denominados enzimas.

Las enzimas son el grupo más variado y especializado de las proteínas, su

función es actuar como catalizadores, permitiendo que las reacciones que
trascurren en los seres vivos puedan desarrollarse a un ritmo adecuado, controlan
la velocidad de las reacciones metabólicas, haciendo que la energía se libere
lentamente de manera que las reacciones que ocurren no dañen las células.
Cada una de las miles de reacciones que ocurren en un organismo está
controladas por enzimas diferentes. Las enzimas son sustancias proteicas que no
se consumen en las reacciones que participan, son específicas, lo que significa
que solamente pueden catalizar un tipo de reacción actuando sobre un sustrato
especifico.

La actividad enzimática se ve influenciada por diversos factores: temperatura, pH,

concentración de sales, y algunas enzimas necesitan coenzimas (no son de
naturaleza proteica, son vitaminas, pero al igual que las enzimas no cambian
durante una reacción). Durante esta práctica se trató de poner en manifiesto
alguno de los factores que afectan la actividad enzimática.
 OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Analizar e interpretar el efecto de diversos factores (acción de la temperatura, pH

entre otros) en la actividad enzimática de la amilasa salival, la renina y la catalasa
de origen animal y vegetal, teniendo en cuanta las diferentes reacciones que se
producen, al interactuar el sustrato con la enzima correspondiente.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal y vegetal.

 Comprobar que solo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan
ópticamente catalizando una reacción enzimática con un sustrato.
 Interpretar con claridad los mecanismos subyacentes de la acción
enzimática sobre sustratos específicos.
 MARCO TEÓRICO

Las enzimas son catalizadores específicos y potentes que posibilitan la

coexistencia de un elevado número de reacciones químicas dentro de la célula. En
la mayoría de los casos son de naturaleza proteica, pero también se conoce
algunas que son RNA. Muy a menudo, los grupos funcionales de la enzima son
complementados con cofactores: iones inorgánicos (metales) o moléculas
orgánicas (coenzimas), que contribuyen a ampliar el espectro de mecanismos
posibles. Hay diversos factores químicos que puedan justificar las altas
velocidades alcanzadas por las enzimas en las condiciones de pH y temperatura
propias de las células. La complementariedad de la enzima con la geometría del
estado de transición de la reacción es la causa más notable de su poder catalítico.

Como compuestos catalizadores, las enzimas son específicas. Cada enzima actúa
sobre una sustancia específica denominada sustrato y cataliza exclusivamente
una reacción. Por ejemplo la sacarosa (azúcar de mesa) es el sustrato de la
enzima sacarosa, que cataliza la hidrolisis de la sacarosa para forma glucosa y
fructosa.

Como catalizadores las enzimas aceleran las reacciones químicas. La molécula de

enzima tridimensional posee un sitio activo, es decir una región que interactúa
con una sustancia química especifica. La enzima orienta al sustrato en una
posición que aumenta la posibilidad de que se produzca una reacción, la
capacidad de una enzima de acelerar una reacción sin necesidad de que se
produzca un aumento de la temperatura es esencial para los sistemas vivos
porque un incremento importante de la temperatura destruiría las proteínas
celulares. Por tanto, la función crucial de las enzimas consiste en acelerar las
reacciones bioquímicas a una temperatura compatible con el funcionamiento de la
célula.

Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de

activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la
tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de las reacciones
en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacción, pero
consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reacción que se
produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el
equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada. Al
igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las
reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio químico. Sin embargo, las
enzimas difieren de otros catalizadores por ser más específicas. Las enzimas
catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioquímicas distintas. No todos los
catalizadores bioquímicos son proteínas, pues algunas moléculas de ARN son
capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la
que reside la actividad peptidiltransferasa).También cabe nombrar unas moléculas
sintéticas denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones
químicas como las enzimas clásicas.

 Acción de la amilasa sobre almidón: La amilasa es una hidrolasa que

digiere el glucógeno y el almidón para formar azucares simples. En
fisiología humana tanto procedente de la saliva como la pancreática son
α- amilasas. La ptialina o amilasa salival (es una enzima presente en la
saliva de las personas que actúa sobre almidón dando una mezcla de
glucosa y maltosa).

𝐚𝐦𝐢𝐥𝐚𝐬𝐚
𝑨𝒍𝒎𝒊𝒅𝒐𝒏 → 𝑮𝒍𝒖𝒄𝒐𝒔𝒂 + 𝑴𝒂𝒍𝒕𝒐𝒔𝒂

 Acción de la renina sobre la caseína de la leche: La coagulación

enzimática de la leche en la obtención del queso es un proceso complejo en
el que la caseína, principal componente proteico de la leche, es
desnaturalizada por acción de las enzimas del cuajo (renina), precipitando y
formando la cuajada. La caseína se encuentra en la leche en forma de
partículas coloidales de fosfocaseinato de calcio. Estas partículas se
encuentran en equilibrio en el seno de la leche como micelas dispersas en
fase liquida. La renina es responsable de la acción proteolítica ejercida
sobre la caseína, la renina actúa sobre el fosfocaseinato de calcio
rompiendo enlaces peptídicos y transformándolo en fosfoparacasinato de
calcio, lo que provoca la precipitación y formación de coágulos.
 Acción de la catalasa (origen animal o vegetal) sobre el peróxido de
hidrogeno: La catalasa se encuentra en las células de tejidos animales y
vegetales. La función en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molécula que es toxica que es el
peróxido de hidrogeno (agua oxigenada), la catalasa, la descompone en
agua y oxígeno.
La reacción de la catalasa sobre el peróxido de hidrogeno, es la siguiente.

𝒄𝒂𝒕𝒂𝒍𝒂𝒔𝒂
𝟐𝑯𝟐 𝑶𝟐 → 𝟐𝑯𝟐 𝑶 + 𝑶𝟐
 MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:
Pastilla de cuajo, 30mL de leche, crayón graso o maskin tape, guantes
desechables, papa y rábano, trozo de hígado y riñón de res , cuchilla de afeitar
nueva, 3 pinzas de tubo de ensayo,12 tubos de ensayos,4 goteros, 4 pipetas
graduadas de 5mL y 1 vidrio de reloj.

REACTIVOS A UTILIZAR:

 Solución de Almidón al 1%
 Solución de Lugol
 Reactivo de Benedict
 Ácido Clorhídrico al 10%
 Agua oxigenada .
 PROCEDIMIENTOS
1. ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN

2. ACCIÓN EN ZIMÁTICA DE LA RENINA SOBRE CASEÍNA DE LA LECHE

Se Disolvieron ½ de pastilla
En el tubo 1 se agrego En tubo se coloco 5mL de
cuajo renina y enumerar 3
5mL de leche mas renina leche más renina y unas
Tubos de asayo de ensayo
gotas de HCl al 10%

Y En tubo tres se coloco 5ml

de leche y renina calentda
 3. ACTIVIDAD DE LA CATALASA DE TEJIDO VEGETAL SOBRE AGUA
OXIGENADA

Se hicieron varios corte de higado,

Luego en otra caja de petri de
riñón, papa, znahoria y espinaca y se
estos cortes se agrego HCl y
le agrego Peroxido
peóxido

Los cortes en caja de petri diferente se

llevo a calentamiento y se agrego
peroxido

1. ACCIÓN DE LA RENINA SOBRE CASEÍNA DE LA LECHE

Luego de la determinación de la actividad enzimática de la renina cobre la
leche se obtuvieron los siguientes resultados (ver anexo 2).

TUBO COMPONENTES DESCRIPCIÓN

1 Leche + renina No se observó un cambio significativo, la leche se

cortó pero muy lentamente.

2 Leche + renina + Al agregarle HCL y renina se observa que la

HCL 10% actividad de la enzima se acelera, haciendo que la
leche se corte en un periodo de tiempo más corto
con respecto al tubo 1.
 Leche mas renina No se observo reacción
en calentamiento

3
Cuando la leche se corta, separan el suero y el contenido proteico, generalmente
por la intervención de un ácido el cual se ve por la formación de un precipitado de
color blanco y un sobrenadante de color amarrillo-verdoso. Con base a todo lo
anterior se logró evidenciar que la actividad enzimática en los dos tubos fue muy
distinta, en el tubo 1 (Leche + renina) la actividad enzimático fue lenta con
respecto al tubo 2, esto se debe a que en este último se agregó HCL, el cual actúa
sobre la renina en la leche acelerando la actividad enzimática, haciendo que la
velocidad de reacción sea más rápida.El HCl tiene la función de variar el pH en la
solución observándose la formación del precipitado que nos indica que se está
desarrollando la actividad enzimática con mayor rendimiento
3.1 ACTIVIDAD DE LA CATALASA DE TEJIDO VEGETAL Y ANIMAL
SOBRE AGUA OXIGENADA

A. Actividad de la catalasa de tejido vegetal sobre Agua Oxigenada.

1. Haga un corte fino de rábano y uno de papa, cuyas dimensiones sean

iguales, colóquelos cada uno en diferente vidrio reloj. Agregue tres gotas
de H2O2, ¿Que observa?
R/ se observa un leve burbujeo entre estos vegetales, lo cual significa
Que se está liberando oxigeno del agua.

2. Haga un corte fino de rábano y uno de papa, cuyas dimensiones sean

iguales, colóquelos cada uno en diferente vidrio reloj. Agregue tres gotas
HCl, espere 1 minuto y 3 de H2O2. ¿Qué ocurre en la actividad de la
enzima?
R/ Que se modifique su velocidad de reacción y que sea más lenta.

B. Actividad de la catalasa de tejidos animales sobre Agua Oxigenada.

1. Hacer un corte fino de tejido hepático y renal, cuyas dimensiones sean

iguales, colóquelos sobre diferentes vidrios de reloj, agregue tres gotas
de agua oxigenada ¿Qué deduce?
R/Que en los tejidos animales ahí mayor presencia de catalasa, ya que en esta
reacción se produjo mayor burbujeo cuando se le agrego el Agua Oxigenada.

2. Haga un corte fino de tejido, hepático y renal, cuyas dimensiones sean

iguales, colóquelos sobre diferentes vidrios de reloj, agregue tres gotas
de HCl, espere 1 minutos y agregue 3 ml de agua oxigenada ¿Qué
sucede?
R/ Que no hubo reacción inmediata, por lo que el HCl reduce la velocidad de la
reacción sobre los tejidos.

TEJIDO/ESCALA 0 1 2 3 4 5
Papa x
Rábano x
Hígado x
Riñón x

Catalasa sometida a calentamiento

TEJIDO/ESCALA 0 1 2 3 4 5
Papa x
Rábano x
 Hígado x
Riñón x

INTERPRETACION DE RESULTADOS

¿Cuál es el tejido con mayor actividad y cuál es que tiene menor actividad?
R/ el tejido que presento mayor actividad de catalasa en el tejido animal fue el del higado
ya que reacciono más rápido que el riñón, y el tejido vegetal entre la papa y el rábano que
presento menor actividad catalítica, fue el de la papa.

¿Qué tienen en común y en qué se diferencian?

R/ tienen en común que todos presentan actividad catalítica cuando esta reacciona con el
peróxido de hidrogeno (H2O2), y se diferencian que en los tejidos animales es más rápida
la reacción de la catalasa sobre el H2O2 , Rompiendo los puentes Hidrogeno-Oxigeno
liberando agua (H2O) y Oxigeno (O2), presentando mayor burbujeo que en los tejidos
vegetales.

Cuando es agregado a heridas produce burbujas. ¿Qué indica esto?

R/esto indica que en el tejido donde se encuentra la herida hay presencia de oxígeno,
actuando la catalasa como catalizador de la reacción sobre el peróxido. En conclusión el
burbujeo que brota sobre la herida no es más que oxigeno saliendo del agua.

En base a sus observaciones ¿Que puede concluir acerca de cómo afecta a la

actividad enzimática el tiempo, la concentración y la temperatura?
R/ el tiempo es un intervalo que tarda en actuar la enzima sobre el sustrato. A mayor
concentración de enzimas menor tiempo durara en actuar la reacción y a menor
concentración mayor tiempo tardara en actuar la enzima sobre el sustrato. En conclusión
el tiempo es inversamente proporcional a la concentración. La temperatura afecta a la
actividad enzimática en que si una enzima se somete a altas y/o bajas temperaturas esta
se desnaturaliza perdiendo sus propiedades proteínicas.

ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN

Análisis de resultados:

Partimos de los tubos de ensayo A y B para realizar todas nuestras pruebas, en el tubo A había
saliva en estado puro, y en el tubo B había saliva acidulada (HCL).
- Tubo A: De este tubo agregamos 2 y 10 gotas de saliva respectivamente en los tubos de
ensayo 1 y 2, seguido agregamos 4mL de almidón y por ultimo añadimos 3 gotas de lugol,
como en estos tubos la saliva estaba en estado puro, la enzima amilasa estaba activa. El
resultado para esta prueba con glucol fue negativo, lo cual era lo esperado debido a que el
glucol se usa para identificar almidón, y como la enzima amilasa se encontraba activa en
estos tubos 1 y 2, esta desdobló la molécula de almidón convirtiéndola en un azúcar
reductor (mayor concentración en el tubo 1).

- Tubo B: De este tubo agregamos 2 y 10 gotas de saliva respectivamente en los tubos de

ensayo 3 y 4, seguido agregamos 4mL de almidón y por ultimo añadimos 3 gotas de lugol,
como en estos tubos la saliva no estaba en estado puro, sino acidulada, la enzima amilasa
no estaba activa, al no estar activa la enzima no habría ningún efecto sobre el almidón y
era de esperarse que el resultado de la prueba con glucol fuera positivo, lo cual ocurrió.
Luego, dividimos los tubos 1-4 en los tubos 5-8 respectivamente. De las pruebas hechas en los
tubos 1-4, quedaron los siguientes resultados: en los tubos 1 y 2 la enzima amilasa realizó el
proceso glucolítico y tenemos presencia de azucares reductoras. En los tubos 3 y 4, al no estar
activa la enzima no hubo ningún proceso enzimático y sigue siendo almidón.

- Tubos 5 y 6: Estos tubos tienen el producto obtenido del tubo 1 y 2 respectivamente. A

estos tubos se les añadieron 3mL de reactivo de benedict, como en estos tubos se
formaron azucares reductoras (acción enzimática de la amilasa sobre el almidón), era de
esperarse que el resultado de la prueba fuera positivo, lo cual fue lo que ocurrió, esto se
pudo evidenciar por el color obtenido después del baño de María (rojizo y verdoso, según
la concentración, mayor en 5).
 - Tubos 7 y 8: Estos tubos tienen el producto obtenido del tubo 3 y 4 respectivamente. A
estos tubos se les añadieron 3mL de reactivo de benedict, como en estos tubos no se
formaron azucares reductoras (la enzima amilasa estaba inactiva), era de esperarse que el
resultado de la prueba fuera negativo, lo cual fue lo que ocurrió, esto se pudo evidenciar
por el color obtenido después del baño de María, el cual es el color de hidrolisis de
almidón.

PREGUNTAS COMPLEMETARIAS

1. ¿qué cambios pueden sufrir en relación a la estructura química y el

número inicial de moléculas, el sustrato y la enzima en una reacción
enzimática?

Los cambios que pueden sufrir el sustrato y la enzima en relación a la estructura

química y el número inicial de moléculas en una reacción enzimática son, respecto
a la estructura química en cuanto al sustrato esta va a cambiar ya que a medida
que avanza la reacción este se va transformando en un producto totalmente
diferente al sustrato y el numero de moléculas depende en gran parte del tipo de
enzima, ya que hay enzimas que pueden agregar un grupo químico al sustrato
para convertirlo en producto, otras le quitan un grupo químico al sustrato para dar
un nuevo producto, otras enzimas solamente cambian la estructura del sustrato sin
alterar su número de átomos, por otro lado, la enzima en cuanto a estructura
química y numero de moléculas permanece constante, ya que esta no participa en
la reacción sino que actua como catalizador del sistema.
 2. si usted hace reaccionar la amilasa con el almidón y espera hasta que
termine la reacción ¿cómo comprobaría que la enzima no ha sufrido
alteración catalítica?

Para comprobar que la enzima no ha sufrido ninguna alteración catalítica se puede

realizar una prueba colorimétrica utilizando la prueba de biuret la cual es
características para la determinación de proteínas siendo en este caso la amilasa
la enzima (donde las enzimas son proteínas).

la entrada de sustrato, al contrario, un efector negativo modificará la estructura de

la proteína de forma que el sustrato no pueda unirse al sitio activo de esta.

3. cite cinco ejemplos de enzimas con sus sustratos respectivos

 Adolasa: participa en la ruptura de la fructosa 1,6 di fosfato en 2

triosas fosforiladas la pdha (fosfodihidroxiacetona) y
pgal(fosfogliceraldehído)

 Amilasa salival: pancreática, intestinal, participa en la lisis del

almidón(polisacárido) en maltosa(disacárido)

 Lactasa: participa en la lisis de la lactosa en glucosa y galactosa

 Pepsina: participa en la digestión química de las proteínas en poli

péptidos o cadenas

 Catalasa: participa en la lisis del h2o2(peróxido de hidrógeno)

CONCLUSIONES

Con la realización de cada uno de los procedimientos detallados en este informe

para el estudio de la actividad enzimática, se logró reconocer y analizar los
mecanismos asociados al proceso en el cual actúa una enzima sobre un sustrato,
mediante la aplicación de los conocimientos adquiridos de manera teórica y el
análisis de pruebas cualitativas descritas anteriormente. También se llevó a cabo
el reconocimiento de la importancia de las enzimas en diferentes procesos
biológicos (como lo es el metabolismo en plantas y animales), los factores que
modifican su actividad y algunos ejemplos de éstas con sus respectivos sustratos.
se logró evidencias como las enzimas con capaces de actuar sobre muchas
sustancia y desfragmentarlas para que nuestro organismo pueda llegar a absorber
nutrientes que se encuentren en estas.

Por lo tanto se comprobó cuán importante son las enzimas en los seres vivos
conocimiento, además de conocer algunas de las características más importantes
de las enzimas y los factores que pueden influir para que estas actúen como la
temperatura, pH entre otros factores.

BIBLIOGRAFÍA

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