PRÁCTICA Nº 6

OBJETIVO:

El alumno conozca la metodología para la determinación de glucosa sérica, así

como los valores de referencia, la importancia en el organismo y las enfermedades
causadas.

MATERIAL

3 Tubos de ensaye Aplicadores

1 Tubo sin anticoagulante Gasas

1 Micropipeta Jeringa de 5 mL

Puntillas Torundas

Pipeta de 1 mL

REACTIVOS

Reactivo de trabajo

Patrón: Solución de glucosa

3 mL de sangre

EQUIPO

Espectrofotómetro

Centrífuga

Baño maría 37ºC

PROCEDIMIENTO:

1. Obtener una muestra de sangre y agregarla en un tubo sin anticoagulante.

2. Colocar el tubo (con la muestra de sangre) a baño maría y dejarlo ahí durante 6 minutos
3. Pasado el tiempo se introduce el tubo en la centrífuga durante 15 minutos a 3000 rpm. ,
con el fin de separar el suero.

4. Retirar el tubo de la centrifuga. Se empleará solamente el suero para realizar la

determinación.

5. Rotular tres tubos de ensaye como: blanco, patrón y muestra. La muestra se refiere al
suero a valorar.

6. De acuerdo a la siguiente tabla agregar las cantidades indicadas a cada tubo según
corresponda:

Blanco Patrón Muestra

Reactivo de trabajo (mL) 1,0 1,0 1,0

Patrón (L) ____ 10 ____

Muestra (L) ____ ____ 10

7. Incubar los tres tubos a 37 ºC (baño maría) dejándolos reposar durante 10 minutos.

8. Transcurrido el tiempo del baño maría, traspasar las soluciones de los tubos a las
cubetas espectrofotométricas. Enseguida, Prender el espectrofotómetro y calibrar con el
tubo del blanco a una longitud de onda de 505 nm.

9. Leer la absorbancia del patrón y la muestra frente al blanco. Anotar los resultados para
los cálculos correspondientes y comparar con los valores de referencia.
Nota: El color es estable como mínimo 30 minutos, por lo que la absorbancia puede ser
leída dentro de ese lapso.
FORMULA PARA CÁLCULOS:

Amuestra
× [ Patrón ]
Glucosa en la muestra (mg/dL)= Apatrón

Donde:
Amuestra: absorbancia de la muestra de suero.

Apatrón: absorbancia del patrón.

Patrón: concentración del patrón. Equivalente a 100 mg/dL.

VALORES DE REFERENCIA

Suero o plasma:

60-110 mg/dL