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Los estudios epidemiológicos de poblaciones humanas han identificado varios factores de "riesgo"
genéticos o ambientales que se asocian significativamente con la prevalencia de EAC ( Tabla 2 ).
Aquí hemos evaluado exhaustivamente la consistencia de los hallazgos en ratones y humanos en
términos de los efectos de estos factores de riesgo en la aterosclerosis.
Dislipidemia
Los niveles altos de colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C), VLDL-C y triglicéridos y
los niveles bajos de colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C) están fuertemente
relacionados con el CAD humano (
Panel de expertos sobre detección, evaluación y tratamiento del colesterol alto en la sangre en
adultos, 2001
), y en las lesiones ateroscleróticas sin calcificación, los niveles elevados de HDL incluso llevaron a
una regresión parcial del tamaño de la lesión (
).
). La inducción de la presión arterial alta en modelos de ratón se inició por una ingesta excesiva de
sal, la regulación positiva del sistema renina-angiotensina-aldosterona, perturbaciones genéticas o
constricción mecanicista de las arterias renales. Aunque las causas de la hipertensión en esos
modelos son diferentes, la aceleración de la aterosclerosis fue un hallazgo consistente (
).
Ma et al., 2008
).
De fumar
Fumar acelera el desarrollo de CAD en humanos (
).
Araujo, 2010
). Los modelos de ratones expuestos a partículas ambientales concentradas a largo plazo menores
de 2,5 μm (que simulan el aire contaminado) mostraron una aceleración de la aterosclerosis y la
inflamación vascular (
).
Diabetes tipo 1
La diabetes tipo 1 (T1D) promueve la progresión de la CAD humana (
Schnell et al., 2013
). La T1D en modelos de ratón fue inducida por estreptozotocina o por infección viral. Ambos
métodos resultaron en la formación acelerada de la lesión (
).
Diabetes tipo 2
La diabetes tipo 2 (T2D) es un factor de riesgo de la CAD humana (
Reaven, 2003
Rey, 2012
).
Angustia
La angustia, aguda y crónica, es un factor de riesgo para el desarrollo y la progresión de la CAD
humana (
). En un modelo de estrés crónico en ratones, los ratones fueron expuestos repetidamente a agua
helada. Los animales desarrollaron lesiones ateroscleróticas más avanzadas y complejas (
).
Trimetilamina-N-óxido
El TMAO, derivado de la colina o la carnitina en la dieta a través de la acción de la microbiota
intestinal, ha demostrado recientemente ser un factor de riesgo para la EAC y la insuficiencia
cardíaca (
). Las cepas puras de ratones exhiben variaciones en los niveles de TMAO cuando se mantienen en
una dieta occidental, y estas se asocian significativamente con la aterosclerosis (
). Los modelos de ratones experimentales revelaron que la suplementación dietética con colina
(que puede procesarse a TMAO) o TMAO en sí promovió la aterosclerosis (
).
Trombosis
La trombosis está significativamente relacionada con la CAD humana (
Davies, 1996
).
).
Bacteriemia indebida
La bacteriemia indebida se asocia con la EAC. La enfermedad periodontal proporciona la entrada
más común para tales patógenos (
). Los modelos de infección oral con patógenos periodontales mostraron aterosclerosis acelerada
en ratones (
).
Insuficiencia renal
La insuficiencia renal acelera la progresión de la CAD humana, especialmente cuando la carga de
calcificación es alta (
).
Síndrome metabólico
El síndrome metabólico, caracterizado por resistencia a la insulina, obesidad, presión arterial
elevada y dislipidemia, es un factor de riesgo para el desarrollo de la CAD humana (
). Varios modelos de ratones con síndrome metabólico muestran una formación acelerada de
lesiones (
).
Obesidad
La obesidad es un factor de riesgo establecido para la EAC en humanos. La obesidad también se
asocia positivamente con la aterosclerosis en ratones con dietas altas en grasa y colesterol (
). Los ratones con deficiencia de leptina ( Lep ob / ob ) tienen un fenotipo obeso distinto, pero están
protegidos contra la aterosclerosis (
,
Nishina et al., 1994
). Este efecto puede estar relacionado con el aumento de tamaño de las lipoproteínas en ratones
obesos Lep ob / ob , lo que lleva a una menor penetración de las paredes arteriales (
Wu et al., 2005
).
Diferencias de sexo
En los seres humanos, los hombres muestran un inicio más temprano de CAD en comparación con
las mujeres. En los ratones, por otro lado, la aterosclerosis es generalmente más prominente en
las hembras, aunque esto depende del modelo de ratón y la dieta utilizada. La mayor
susceptibilidad a la aterosclerosis en ratones hembras se ha atribuido en parte a los genes
codificados por los cromosomas sexuales (
). El TMAO se produce por oxidación de la trimetilamina circulante, catalizada por la enzima flavina
monooxigenasa 3 (FMO3). En ratones, la expresión de FMO se suprime dramáticamente por la
testosterona y, por lo tanto, los niveles de TMAO son mucho más bajos en los machos en
comparación con las hembras (
).
). En el caso de la aterosclerosis, los grandes metanálisis han identificado un total de 57 loci que
cumplen con un nivel de umbral ajustado de Bonferroni, y aproximadamente 100 loci adicionales
muestran una asociación sugestiva (
). En contraste con los rasgos mendelianos (en los que aproximadamente el 85% de las variantes
causales afectan a las secuencias de codificación), los rasgos de enfermedades complejas comunes
parecen deberse principalmente a variaciones en las regiones no codificantes que afectan la
expresión génica (
,
Seifert et al., 2016
). En general, dentro de la región de desequilibrio de ligamiento (LD), los loci contienen múltiples
genes. El gen causal puede incluso estar fuera de la región de LD si está regulado por un
potenciador dentro de la región asociada con la enfermedad. Por lo tanto, un desafío en la
actualidad es identificar las variantes genéticas causales y los genes causales en cada locus. Para
nuestra comparación con los ratones, hemos utilizado dos conjuntos de genes GWAS humanos
diferentes, que se describen a continuación ( Tabla S2).
El primer conjunto de genes (244 genes GWAS) se basa en anotaciones de 169 loci GWAS
significativos y sugerentes conocidos, que incorporan conocimiento y enfoques basados en datos (
). Esta lista de genes es un conjunto de genes curados de forma conservadora que probablemente
proporcione los genes CAD humanos más confiables basados en el enfoque GWAS.
El segundo conjunto de genes (880 genes GWAS extendidos) también se basa en los loci GWAS (
) pero además incorpora aspectos funcionales que utilizan loci de rasgos cuantitativos de
expresión (eQTLs) y anotaciones ENCODE, de manera que se incorporan genes adicionales que no
cumplen con un nivel de significación de todo el genoma (p <5E − 8). La extensión de los genes
aumenta la probabilidad de incluir genes falsos positivos, pero ofrece una mejor oportunidad para
inferir mecanismos biológicos y vías que contribuyen a la CAD (
).
Quizás un análisis más significativo es preguntar qué fracción de los genes GWAS humanos que se
han estudiado en modelos de ratón producen un resultado consistente. Dado que los resultados
del GWAS humano se publicaron muy recientemente, solo una fracción de los candidatos
humanos se ha estudiado en ratones. Además, debemos tener en cuenta que un resultado
negativo en el mouse puede no ser publicado. Sin embargo, encontramos que de los 244 genes
GWAS humanos significativamente o sugestivos, 46 ya se han estudiado por su efecto sobre el
tamaño de la lesión en ratones y 45 de estos afectaron significativamente la aterosclerosis en
modelos de ratones ( Figuras 1 y 2 ), dejando alrededor de 190 candidatos humanos. Genes que
aún no han sido estudiados ( Figura S1 ). La información detallada se proporciona en la Tabla
S2.. Dado que es poco probable que muchos de los genes GWAS humanos en nuestra lista sean
causales, tal grado de superposición parece sorprendente. Sin embargo, la mayoría de los genes
superpuestos se consideraron previamente (antes de GWAS) como fuertes candidatos en función
de sus funciones en el metabolismo de los lípidos, la presión arterial o la inflamación y, por lo
tanto, se estudiaron en ratones ( Figura 1 ).
De las 178 vías CAD humanas, 72 (40.2%) vías fueron idénticas a nuestras vías de ratón. Un factor
limitante es la diferente nomenclatura de Biocarta, KEGG y Reactome, que hace imposible una
comparación directa. Para abordar esta limitación, analizamos la superposición de genes incluidos
en estas vías y consideramos aquellas vías altamente significativas que compartían mutuamente
más del 50% de sus genes o que incluían al menos el 90% de sus genes en una ruta de las otras
especies. Al utilizar estos criterios, observamos que el 55,1% (98 vías únicas) de las vías asociadas
con la CAD humana se superponen con las vías de aterosclerosis del ratón y el 53,2% (140) de las
vías del ratón se superponen con las vías asociadas con el GWAS humano de la CAD.
Para las rutas basadas en datos del mouse, solo cinco se superponen menos del 30% con las rutas
humanas. Estas vías específicas para ratones incluían diabetes, biología del desarrollo y regulación
de la expresión génica en células beta. La última ruta, por ejemplo, consta de 20 genes y
comparte Akt1 , Akt2 , Akt3 , Foxo1 , Hnf4a , Hnf4g e insulina con rutas asociadas con CAD
humanas conocidas, mientras que los genes Foxa2 , Foxa3 , Gck , Iapp , Mafa , Neurod1 , Nkx2-
2 , Nkx6-1 , Pax6 ,Pdx1 , Pklr , y Slc2a2No estaban presentes en las vías humanas. En total, 37 vías
humanas mostraron una superposición de menos del 30%. Estos incluyeron el metabolismo de las
poliaminas, el transporte de zwitterión de anión de catión orgánico, la biosíntesis de pantotenato
y CoA, el metabolismo de fenilalanina, el metabolismo de aminoácidos de azufre y la
aminoacilación de ARNt. Dos vías inesperadas, la vía de interacción del receptor de ligando
neuroactivo y la vía de señalización de la neurotrofina, mostraron una superposición de alrededor
del 50% entre ratones y humanos. Dado que la mayoría de los modelos de ratón no desarrollan
infartos de miocardio, fue interesante examinar si las especies diferían en vías relevantes como la
coagulación o la degradación del colágeno. Sin embargo, no se observaron tales diferencias
significativas. En general, estos hallazgos destacan una alta consistencia biológica entre las
especies, por solo 42 (11.
Una forma de visualizar la concordancia de las vías asociadas a la aterosclerosis entre el humano y
el ratón es resumirlas en grupos. Utilizamos un análisis de componentes principales para reducir la
alta dimensionalidad de los datos para agrupar las vías según la superposición de sus genes
constituyentes ( Figura S2 ). En esta representación, cuanto más cerca estén las vías, mayor será el
porcentaje de genes compartidos. Dividimos los grupos de acuerdo con las funciones de sus genes,
con las siguientes categorías: antígeno, apoptosis, cáncer, ciclo celular, adhesión focal, sistema
inmunológico, inflamación, metabolismo de lípidos y lipoproteínas, función y proliferación de las
plaquetas y transcripción.
Problemas de confusión
Al evaluar la relevancia de los estudios en ratones para la CAD humana, hay una serie de posibles
factores de confusión que deben considerarse. A continuación, discutimos brevemente los más
significativos.
). Estudios recientes han examinado la cuestión del gen pasajero en estudios de funciones
inmunes y metabolismo óseo (
).
Consideraciones estadísticas
Fenómenos como "maldición del ganador", el concepto de que el primer informe probablemente
tendrá un tamaño de efecto mayor que los estudios posteriores, y el "sesgo de publicación", el
concepto de que la literatura estará sesgada porque es más probable que se publiquen resultados
positivos resultados negativos, indudablemente han sesgado los resultados de los estudios de
genes candidatos. Por ejemplo, a partir de la década de 1980 con el desarrollo de métodos para
examinar la variación genética a nivel de ADN, muchos estudios de un número relativamente
pequeño de pacientes y controles (típicamente cientos) informaron asociaciones "significativas"
de variantes de ADN con enfermedades comunes. Pocos de los muchos cientos de hallazgos
reportados podrían replicarse en los GWAS más grandes e imparciales (
). Una situación similar puede aplicarse a las investigaciones de genes candidatos en ratones que
utilizan tecnologías knockout o transgénicas, particularmente dada la gran variación no genética
de los ensayos de lesiones de aterosclerosis en ratones (
). De hecho, hay numerosos ejemplos de la falla en replicar los hallazgos de dichos estudios, como
los que involucran Abcg1, SRA y CD36 (
Witztum, 2005
).
). Por otro lado, la mayoría de los estudios en humanos utilizaron definiciones clínicas para la
aterosclerosis.
Discusión
La mayor parte de nuestra comprensión actual de los mecanismos subyacentes a la aterosclerosis
se deriva de estudios con modelos de ratón. Un tema importante se relaciona con la relevancia de
los modelos de ratón para la patobiología humana, particularmente porque los datos de ratón se
están utilizando para desarrollar objetivos farmacológicos, y los modelos de ratón también se usan
para probar compuestos terapéuticos en estudios preclínicos. La reciente identificación de loci
humanos asociados con CAD o lípidos plasmáticos en GWAS grandes (
Goodarzi, 2016
La relevancia de los modelos animales para los trastornos humanos comunes ha sido cuestionada,
en gran medida por el hecho de que las dianas farmacológicas desarrolladas en modelos animales
no muestren eficacia en los ensayos en humanos (
,
Perrin, 2014
). Una explicación, por supuesto, es que hay diferencias significativas entre las especies. Otra
explicación plausible es que hay falsos positivos en los datos del mouse, como se explicó
anteriormente. Un tercero se refiere al diseño experimental. En particular, no está claro que los
ratones knockout sean apropiados para modelar las variaciones genéticas sutiles que subyacen a
las formas comunes de aterosclerosis. Finalmente, la mayoría de los estudios con ratones se
realizaron en un solo fondo genético (generalmente, la cepa C57BL / 6J), lo que puede limitar
gravemente la amplitud de las conclusiones que se pueden extraer (
). A pesar de estas limitaciones en los estudios con ratones, nuestra comparación entre especies
reveló muchas vías convergentes y apoya el valor de los modelos de ratones en la revelación de
procesos mecanicistas críticos de la aterogénesis.
Es probable que centrarse en las rutas patógenas en lugar de los genes individuales sea una forma
más productiva de traducir la información de modelos animales a estudios humanos. De interés
inmediato es determinar con más detalle los factores que regulan estas vías e identificar los
tejidos en los que contribuyen a la aterosclerosis. Además, las rutas convergentes y divergentes
entre las especies reveladas en nuestra revisión comparativa pueden ayudar a guiar la selección de
los modelos apropiados en futuros estudios preclínicos. Además de la progresión de la lesión,
algunos estudios han sugerido una superposición de genes que controlan la regresión de la lesión
en ratones y humanos, lo que sugiere una posible vía para la investigación terapéutica (
). Dadas las muchas ventajas de los ratones para estudiar la aterosclerosis, incluido el acceso a los
tejidos y la capacidad de controlar el medio ambiente, los estudios en ratones probablemente
continuarán abriendo el camino hacia la comprensión mecanicista.
Contribuciones de autor
MVS realizó la búsqueda bibliográfica de genes de ratón. Todos los autores participaron en los
análisis de los datos y revisaron críticamente el manuscrito, que fue escrito por MVS, HS y AJL.
Expresiones de gratitud