Enzimas

I. ENZIMAS

•Son Proteínas que catalizan la velocidad de las reacciones

químicas que suceden en la célula.
•Hacen posible que en condiciones fisiológicas tengan lugar
reacciones que sin catalizador requerirían condiciones
extremas de presión y temperatura o tiempos muy largos.
•Las sustancias cuya transformación química es acelerada
por acción de una enzima se llaman sustratos.
 II. PROPIEDADES GENERALES
. a. Estructura globular.
Son generalmente proteínas
globulares con tamaños que
van desde unos 60 hasta
mas de 2500 aminoácidos.

•b. Alto poder catalitico.

Catalizadores inorgánicos.
102-103 veces, y las
enzimas. 106-1020
•Ejplo. Catalasa (hidratación
del CO2)– acelera 107 veces
 c.- Acción a condiciones ambientales
• Producción de NH3 por síntesis química.

• Fijacion biológica de nitrógeno.

– Proceso enzimatico

– Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)

– pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5
– Presión atmosférica normal
 d.- Especificidad.
•Catalizan reacciones específicas. Ejplo. Acción de la enzima
maltasa.

•Se debe a que la reacción enzima-sustrato sucede en un lugar

específico denominado centro activo.
•En él se encuentran los residuos catalíticos que participan en
la reacción enzimática.
•Ej. Acción de la quimotripsina sobre el ester etílico de tirosina.
 Características del centro activo
•Tienen una estructura tridimensional en forma de hueco,
donde debe encajar al sustrato.

•Tipos de aminoacidos en la enzima:

•Aminoácidos estructurales.
•Son los más abundantes y dan la forma de la enzima.
•En la lisozima de 129 aminoácidos, 124 son estructurales.
•Aminoácidos de fijación.
•Son los que establecen enlaces débiles con el sustrato y lo
fijan.
•Se encuentran en el centro activo de la enzima
•Aminoácidos catalizadores.
•Estan en el centro activo y son los que provocan la
reacción. Generalmente son aminoacidos ionicos o polares.
De los 20 aminoácidos
proteínicos, sólo los que
tienen cadenas laterales
polares y con carga, son
catalíticos. Estos son:
serina, treonina y tirosina
(hidroxilo); cisteína (tiol);
glutamina y asparagina
(amida); glutamato y
aspartato (carboxilato); lisina
(amina); arginina (guanido),
e histidina (imidazol).
III. MECANISMO DE ACCION DE ENZIMAS
•Para que se produzca una reacción, las moléculas reactantes deben
chocar entre sí, pero solo son efectivos los choques que tienen la
energía suficiente y la orientación correcta para reaccionar (formar o
romper los enlaces) (estado de transicion).
•Los catalizadores actúan proporcionando un mecanismo (alternativo)
con menor energía de activación. Por tanto, más choques
moleculares tienen la energía necesaria para alcanzar el estado de
transicion.
•Ejemplo, la descomposición del agua oxigenada (H2O2) puede ocurrir
–sin catalizador Ea= 18 Kcal/mol
–con catalizador inorgánico (platino) Ea= 12 Kcal/mol
–con una enzima específico (catalasa) Ea= 6 Kcal/mol

•Las enzimas disminuyen la

ΔG o energía de activación.
•La energía libre de activación
ΔG, es la cantidad de energía
requerida para llevar 1 mol de
reactante al estado de
transición.
•a.- Disminución de la energía de activación.

•La acción de la enzima es:

–Atrae al sustrato al centro activo, por afinidad química, y asi
aumenta la concentración efectiva de sustratos en el centro
activo (aumenta la probabilidad de choque)
–Orienta al sustrato (reactante) en su centro activo con una
orientación adecuada hacia los grupos catalíticos del enzima,
de modo que se produzca la reacción.

–Las colisiones al azar de moléculas reaccionantes en un medio

liquido son poco probables, y la orientación de los grupos
reaccionantes, en la mayor parte de los casos no es la
adecuada, por lo que deben consumir mucha energía.
–El centro activo del enzima, disminuye los requerimientos de
energía, pues fija a los sustratos mediante interacciones débiles,
dándole una orientación precisa y facilitando la reacción.
 b.- Acción de los
grupos catalíticos.
Los mecanismos son:
ácido-base, y formación
de complejos. En
ambos casos, los
grupos cataliticos del
centro activo provocan
la rotura o formacion de
enlaces en el sustrato,
y su consecuente
reaccion quimica.

•Este efecto se ilustra con

un diagrama de perfil de
energía.
•El gasto energético en
estos procesos, es menor
a la energía de activación
de la reacción por catalizar.
MODELOS DE INTERACCIÓN (ESPECIFICIDAD)
•Hay dos modelos propuestos sobre la forma en que el
sustrato se uniría al centro activo del enzima: el modelo
llave-cerradura, y el modelo del ajuste inducido
•a.- Modelo de llave y cerradura.
•La estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias
•Este modelo es válido en muchos casos, pero no es
siempre correcto
b.- Modelo del ajuste inducido
•El centro activo adopta la conformación idónea sólo en
presencia del sustrato.
•La unión del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a
la formación del producto.
 COFACTORES Y COENZIMAS
•Algunas enzimas denominadas enzimas heteroproteínas, están
formados por dos componentes, uno de naturaleza proteica llamado
apoenzima y otro no proteico, que puede ser inorgánico (cofactor), o
bien orgánico (coenzima)
•El conjunto de los dos componentes, apoenzima y coenzima, forma
la enzima completa u holoenzima.
•Solo algunas enzimas holoproteínas, están constituidos solo por
secuencias de aminoácidos, como la lisozima.
Algunos iones metálicos son cofactores. En el ser humano, los
cofactores mas frecuentes son: hierro, magnesio, manganeso,
cobalto, cobre, zinc y molibdeno. Todos ellos, son esenciales en
la dieta debido a su papel como cofactores.
Los iones metálicos en general proporcionan cargas positivas, y
los metales de transición actúan como ácidos de Lewis (aceptores
de pares electrónicos).
 Coenzimas y vitaminas
•Muchos coenzimas provienen de vitaminas, que, en
cantidades mínimas, son necesarias para el funcionamiento
de muchos organismos.
•Su importancia biológica se debe a que tales organismos
no las pueden sintetizar y deben adquirirlas del exterior.
•La mayoría de las vitaminas hidrosolubles, a excepción de
la vitamina C, forman parte de alguno de los coenzimas
conocidos.

Por ejemplo la coenzima NAD, es

una molécula derivada de la
vitamina B5 (acido nicotínico), es
precursor de los cofactores NAD+ y
NADP+ y contribuye en la catálisis
de las reacciones de oxidoreduccion
intracelulares.
 La coenzima se encuentra en dos formas: NAD+ y NADH.
El NAD+ es un agente oxidante que acepta electrones e H+ de
otras moléculas y se reduce a NADH, que puede ser utilizado
despues como donador de electrones.

•La conversión del piruvato en lactato en microorganismos lácticos,

sucede gracias al NAD como transportador de electrones.
•Del par de electrones que libera el sustrato, uno es transferido al
nitrógeno cargado positivamente del anillo nicotinamida del NAD+, y
un átomo de hidrógeno es transferido al carbono opuesto a este
nitrógeno.
•La reacción es reversible, cuando el NADH es re-oxidado a NAD+,
transfiriendo su electrón a otra molécula.
 IV. NOMENCLATURA
Hay varias formas de nombrar una enzima:
•Nombres particulares
•Nombre sistemático
•Código de la comisión de enzimas

•NOMBRES PARTICULARES.
•Antiguamente, los enzimas recibían nombres
particulares, asignados por su descubridor.
•Ejemplos: amilasa, pepsina, tripsina, glucoquinasa etc.

•NOMBRE SISTEMATICO
Consta de 3 partes: El sustrato, el tipo de reacción
realizada y la terminación "asa“. ejemplo: la glucoquinasa.
ATP: glucosa fosfo transferasa
Glc + ATP  Glc-6P + ADP
Glucosa fosfato isomerasa.
 Codigo: Comisión de enzimas
La enzima es identificada por un código numérico:
•Encabezado por las letras EC (Enzyme Commission)
•Seguidas de cuatro números separados por puntos.
–el primer número indica una de las seis clases de enzima,
–el segundo se refiere a distintas subclases.
–el tercero se refiere al grupo químico específico que
interviene en la reacción.
–El cuarto al orden de descubrimiento.

Ej.: la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa)

Glc + ATP  Glc-6P + ADP
EC. 2..7..1..2.
2: Transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa
 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreducción, es decir, transferencia
de hidrógeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, según la
reacción general:
AH2 + B A + BH2
Ared + Box Aox + Bred
•La oxidación-reducción en sistemas biológicos implica
reacciones de transferencia de electrones acompañadas del
cambio compensatorio de la cantidad de hidrógeno y de oxígeno
en la molécula.
•Ejemplo: las reacciones redox facilitadas por las
deshidrogenasas, como la deshidrogenasa alcohólica que
cataliza la oxidación de etanol en acido acetico.
•Las oxigenasas, las oxidasas y las peroxidasas, utilizan O2
como aceptor de electrones.
 Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del
hidrógeno) de un sustrato a otro, según la reacción:
A-B + C A + C-B
•Los grupos transferidos son: aldehídos, acilos, glucosilos,
carbonilo, fosfatos (kinasas)
Ejemplo: glucoquinasa (ATP:glucosa fosfo transferasa), que
cataliza la reacción:
glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

•En el metabolismo por

glucólisis, esta enzima
fosforila a una molécula
de glucosa, a partir de
ATP, con lo cual se inicia
la degradacion de la
glucosa, para obtener
energía.
 Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrólisis, especialmente de los
enlaces como C-O, C-N y O-P por la adición de agua
A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa (B-D-galactosidasa), que cataliza la
reacción:
lactosa + agua glucosa + galactosa
Transforman polímeros en monómeros. Actúan sobre
enlaces: éster, glucosídico, peptídico, C-N, etc.
 Clase 4. LIASAS
(adición o ruptura de dobles enlaces)
•Catalizan la ruptura de enlaces C-C, C-O, C-N y otros
enlaces para formar un doble enlace o se añaden a un doble
enlace.
•Requieren de la participación de un solo sustrato para
efectuar una reacción en un sentido y de dos para realizar la
reacción contraria. Descarboxilasas, aldolasas, hidratasas,
deshidratasas, desaminasas y sintetasas. .
•Descarboxilasas, son liasas carbono-carbono que agregan
o remueven carboxilos de diferentes compuestos orgánicos.

•Ejemplo: La piruvato
carboxilasa, que cataliza la
decarboxilación del ácido
pirúvico a acetaldehído y
dióxido de carbono
 Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversión de isómeros:
A B
Según el tipo de reordenamiento intramolecular, pueden ser:
Epimerasas si catalizan la inversión de átomos de carbono
asimétricos y mutasas si catalizan la transferencia intramolecular
de grupos funcionales.
Ejemplo: la enzima glucosa isomerasa, que cataliza las reacción:
gliceraldehído-fosfato dihidroxiacetona-fosfato

La fructosa tiene capacidad edulcorante 30% mayor que la

sacarosa, 2.5 veces mayor que la glucosa y es 2 veces más
soluble que la glucosa
 Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis
simultánea de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi
Ligasas y sintetasas.
Ejemplo: ADN-ligasa, que une los nucleótidos a la cadena del ADN,
con consumo de ATP. Forma enlaces covalentes entre el extremo 5’
de una cadena polinucleotídica y el extremo 3’ de otra cadena
polinucleotídica.
 Clases y subclases E. C. para enzimas
1. ÓXIDORREDUCTASAS
(Reacciones de oxidación-reducción)
1. Actúan sobre CH-OH
2. Actúan sobre C=O
3. Actúan sobre CH=CH
4. Actúan sobre CH-NH2
5. Actúan sobre CH-NH
6. Actúan sobre NADH o NADPH
7. Actúan sobre otros compuestos nitrogenados
8. Actúan sobre un grupo sulfuro
9. Actúan sobre un grupo hemo
10. Actúan sobre difenoles
11. Actúan sobre peróxido de hidrógeno
12. Actúan sobre hidrógeno
13. Actúan sobre donadores sencillos con incorporación de 0, (oxigenasas)
14. Actúan sobre donadores complejos con incorporación de 02
15. Actúan sobre radicales superóxido
16. Oxidan iones metálicos
17. Actúan sobre CH2
18. Actúan sobre ferredoxina reducida
19. Actúan sobre flavodoxina reducida Otras óxidorreductasas
2.TRANSFERASAS
(Transferencia de grupos 3.HIDROLASAS
funcionales) (Reacciones de hidrólisis)
1. Grupos con un carbono 1. Ésteres
2. Grupos aldehído o cetona 2. Enlaces glucosídicos
3. Grupos acilo 3. Enlaces éter
4. Grupos glicoxilo 4. Enlaces peptídicos
5. Grupos alquilo o arilo 5. Otros enlaces C-N (diferentes
6. Grupos nitrogenados del peptídico)
7. Grupos que contienen fósforo 6. Anhídridos de ácido
8. Grupos que contienen azufre 7. Enlaces C-C
8. Enlaces haluro
9. Enlaces P-N
10. Enlaces S-N
11. Enlaces C-P
 Ligasas:
•EC 6.1, Forma uniones oxígeno-carbono.
4. LIASAS –EC 6.1.1 Forman aminoacil-ARNt y
(Adición a dobles compuestos relacionados.
enlaces) –EC 6.1.2 Forman ácido-alcohol (sintasas
1.Liasas C-C éster).
2.Liasas C-O •EC 6.2, Forman uniones carbono-azufre.
3.Liasas C-N –EC 6.2.1 Ligasas ácido-tiol.
4.Liasas C-S •EC 6.3, Forman uniones carbono-
5.Liasas C-haluro nitrógeno.
6.Liasas P-O –EC 6.3.1 Ácido-amoniaco (sintasas amida).
7.Liasas C-P –EC 6.3.2 Ligasas ácido-aminoácidos
(péptido sintasas).
5. ISOMERASAS –EC 6.3.3 Ciclo-ligasas.
1.Racemosas y epimerasas –EC 6.3.4 Otras ligasas carbono-nitrógeno.
2.Isomerasas cis-trans –EC 6.3.5 Carbono-nitrógeno ligasas con
3.Oxidorreductasas glutamina como amido-N-donador.
intramoleculares •EC 6.4, Forman uniones carbono-carbono.
4.Transferasas •EC 6.5, Forman ésteres fosfóricos.
intramoleculares •EC 6.6, Forman unión nitrógeno-metal.
5.Liasas intramoleculares –EC 6.6.1 Forman complejos de
coordinación
Clases de Enzimas:
No. Clase Tipo de reacción que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreduct De óxido reducción Peroxidasa
asas (transferencia de e-) Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrólisis, con transferencia de Pirofosfatasa
grupos funcionales del agua Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, (Sintasas)
generando un doble enlace, o Descarboxilasa
Adición de un substrato a un pirúvica
doble enlace de un 2o.
Substrato. (Sintasa)
5 Isomerasas Transferencia de grupos en el Mutasas
interior de las moléculas para dar Epimerasas
formas isómeras Racemasas
6 Ligasas Formación de enlaces C-C, C-S,
C-O y C-N. Mediante reacciones Sintetasas
de condensación, acopladas a la
ruptura del ATP
 V. BASES DE CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.
La velocidad de una reacción se define como el cambio de
la concentración de un reactante o producto por unidad de
tiempo. La velocidad inicial Vo de la reacción S ~ P, donde S
son moléculas de sustrato y P de producto,
respectivamente, es:

FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD

1.Concentración de Enzima. En presencia de exceso de
sustrato, la actividad es proporcional a la concentración
enzimática
2.Concentración de sustrato
3.pH
4.Temperatura
5.Presencia de actuadores o reguladores.
2. Concentración de sustrato
•Las reacciones enzimáticas se saturan con el sustrato
(son autosaturantes)
•La maxima velocidad de reaccion no depende solo de una
mayor concentracion de sustrato, sino principalmente de
que todos los centros activos esten actuando
 3. Efecto del pH
La actividad enzimática pasa por un máximo (pH óptimo).
El pH óptimo de las enzimas varía ampliamente. Para la
pepsina, del estómago es de 1,5, para la arginasa es de 9,7.

La mayoría de enzimas tienen un óptimo alrededor del pH

fisiológico de, ~7.0
•Explicación: El sitio activo de la enzima contiene
frecuentemente grupos ionizables que deben en la forma
iónica pueden unirse los sustratos o catalizar la reacción.
•Si varia grandemente la concentración de iones H+, la enzima
se desnaturaliza.
 4. Temperatura
En la acción de la
temperatura hay dos efectos:
1.Aceleración de la reacción
según la ecuación de
Arrhenius. (dentro del
margen de actividad)
k = A exp (-Ea/RT)
Para casi todas las enzimas,
un incremento de 10°C
duplica la velocidad de
reacción.
2. Desnaturalización térmica
de la proteína.
Para muchas enzimas la
región de inactivación
térmica está muy próxima de
la temperatura óptima.
 CINÉTICA DE REACCIONES CON UN SÓLO
SUBSTRATO
•Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, propusieron un
modelo de dos etapas para relacionar la velocidad de reacción
con la concentración de substrato. Considerando la formación de
un complejo ES intermedio.

•La ecuación ignora la reversibilidad del paso en el que el

complejo ES se convierte en enzima y producto. Esta
simplificación es posible si se mide la velocidad de reacción
cuando la [P] es aún muy baja (velocidad inicial). Se asume que
la k_¡ es despreciable en comparación con la k¡, Y que la
velocidad de formación de ES es igual a la velocidad de su
degradación durante la mayor parte del curso de la reacción.
 Velocidad de reaccion VS concentracion
•La ecuación de Michaelis-
Menten describe como varía
la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas de
acuerdo a la concentración de
sustrato:

1. Vmax = velocidad máxima teórica = la velocidad cuando

todos los centros activos están ocupados con sustrato
(nunca alcanzada en la realidad)
2, Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) =
concentración de S a la que la V es 1/2 Vmax.
 Características de Km:
Es una medida de la afinidad del enzima por el S.
Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por el S.
–Una Km pequeña, refleja una gran afinidad por el sustrato, ya
que bajas concentraciones de sustrato son suficientes para saturar
al 50% de la enzima – es decir, para alcanzar ½Vmax.
–Una Km grande, refleja una baja afinidad de la enzima por su
sustrato, ya que son necesarias grandes concentraciones de
sustrato para saturar el 50% de la enzima.
 Km de algunas enzimas

ENZIMA SUSTRATO Km (mM)

Catalasa H2O2 25.0

Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa 1.5
Anhidrasa carbónica HCO3- 9.0
Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108.0
N-Benzoiltirosinamida 2.5
-Galactosidasa D-Lactosa 4.0
Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
 Vmax
•Vmax es la velocidad máxima
teórica de la reacción. Se alcanza
cuando todos los centros activos
están ocupados.
•Para alcanzar la velocidad
máxima se requiere que [S] >> [E]
y que TODAS las moléculas de
enzima estén unidas al sustrato.
•Vmax se alcanza asintóticamente
a medida que la concentración de
sustrato aumenta
 CALCULO DE PARÁMETROS DE LA
ECUACIÓN
•Los valores de la Km y de Vmáx, se determinan midiendo
las velocidades iniciales de reacción a varias
concentraciones de sustrato.
•Los valores aproximados de la Km y de la Vmáx pueden
obtenerse construyendo la hipérbola de Michaelis y
Menten.
• Un método más exacto de estos valores se obtiene con
una transformación algebraica de los datos a través de una
linearizacion.
 Linearización de Lineweaver-Burk .

•Artificio matemático que

permite deducir gráficamente
los valores de km y Vmax.
•El artificio consiste en
convertir a la ecuación M-M
en la ecuación de una recta,
de forma Y = A + BX, donde:
•Y = 1/v,
•A = 1/Vm,
•B = km/Vm, y
•X = 1/[S]
 Ploteo de Eadie-Hostee
•El ploteo se realiza vi contra vi/[S], con
ese fin se multiplica ambos miembros de
la inversa de la ecuación M-M por
vi.Vmax obteniéndose:
•Vmax (vi) = Km.Vmax(vi) + Vmax(vi)[S]
• vi Vmax[S] Vmax [S]
•
• Vmax = Km.vi + vi
• [S]
•Ordenando:
• vi = Vmax - Km.vi
• [S]
•Esta es una ecuación de línea recta de
la forma Y = a – bX.
•Pendiente= –Km,
•Ordenada en el origen= Vmax.
 Ploteo de Hanes- Wolf

•[S] = Km. + [S] . 1 .

• Vi Vmax Vmax

[S]
V 1
a x
Vm

Km
V max

 [S]

0
 Ploteo Eisentahl-Cornish
• Vmax = vi + vi.Km
• [S]

V max

[S]
Km
 Limitaciones de Cinética Michaeliana
•Para utilizar la ecuación de Michaelis-Menten deben
asumirse:
•1. La concentración de sustrato [S] es mucho mayor que la
concentración de enzima [E], de manera que la proporción
de ES, es relativamente pequeña.
•2. [ES] no cambia en el tiempo (la velocidad de reaccion se
mantiene constante). La reacción esta en equilibrio.
•3. Deben usarse velocidades iniciales (vo). Es decir que
la velocidad de la reacción debe determinarse tan pronto
como el sustrato y la enzima se mezclan. En dicho tiempo,
la concentración de productos es despreciable, y por lo
tanto, la reacción inversa de productos a sustratos puede
ser ignorada

•Existen enzimas que no siguen la cinética Michaeliana

como las enzimas alostericas
 Actividad enzimática
•La actividad enzimatica: expresa la cantidad de sustrato
convertido por unidad de tiempo, teniendo en cuenta el
volumen y las condiciones ambientales.
•La actividad enzimática se mide en unidades internacionales
(IU), que es la cantidad de enzima que produce 1 µmol de
producto por minuto.
•En el SIU es el katal (kat), que es la cantidad de enzima que
transforma 1 mol de sustrato por segundo.
•1 kat = 1 mol sustrato convertido x s-1 = 6x107 UI
•1 UI = 1 μmol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat

•Actividad específica. Es la actividad de una enzima

por miligramo (mg) de proteína, y da una idea de la pureza de
la enzima.
•se suele expresar en: μmol x min-1 x mg-1.
REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

•INHIBIDOR: molécula o ion que al unirse a la enzima

produce una disminución en la velocidad de la reacción
catalizada.
•Los inhibidores y los activadores, se usan en la
formulación de: medicamentos, antibióticos, insecticidas,
herbicidas. Etc.
 VI. INHIBIDORES
•Son moléculas que al unirse a la enzima produce una
disminución en la velocidad de la reacción catalizada.
•Los inhibidores se usan en la formulación de: medicamentos,
antibióticos, insecticidas, herbicidas. Etc.
IRREVERSIBLES. Si la REVERSIBLES.
inhibición es permanente •La unión del inhibidor y
• Se unen por medio de enlaces la enzima es reversible.
covalentes, que modifica la • Al quitar el inhibidor del
enzima. medio, se recupera la
Ejemplo. Las toxinas actividad.
bacterianas, neurotoxinas, DDT,
cianuro, ácido acetilsalicílico y Se unen a la enzima por
gases nerviosos. el mismo tipo de
•Mercurio, plomo, y compuestos interacciones que se
arsenicales. producen entre las
•Ión cianuro, CN-: Se fija con enzimas y los sustratos.
gran afinidad al Fe del complejo
citocromo oxidasa.
 a.-Inhibidores reversibles
•Hay 3 tipos: Competitivos, No Competitivos y Acompetitivos.
•Inhibidores competitivos
•Tienen gran parecido estructural con el sustrato natural.
•Compiten con el sustrato por ocupar el sitio activo de la enzima.
•Una característica de este inhibidor, es que se revierte
aumentando la concentración de sustrato.

•
ejemplo 1. Aplicación farmacológica de las sulfamidas o sulfas.
 Efecto antibiótico de sulfas
•Las bacterias sensibles requieren
del (para amino benzoico) PABA
para producir ácido dihidrofólico,
un paso en la producción de
purinas y la síntesis de ácidos
nucleicos.
•Las sulfamidas son análogos
estructurales del PABA, inhibiendo
competitivamente a la enzima
dihidropteroato sintasa, y bloquea
la síntesis del ácido fólico
 Ejemplo 2. Efecto reversible metanol/etanol
•El alcohol metílico, se produce durante la fermentacion alcohólica
del zumo de frutas con alto contenido de pectina, generando una
mezcla de etanol y metanol.
•El metanol tiene efectos tóxicos postingesta, por formacion
metabolica de formaldehído y ácido fórmico, que son tóxicos y
ocasionan cefaleas, y hasta convulsiones, coma y muerte.
•La enzima alcohol deshidrogenasa, metaboliza al metanol y al
etanol, pero es 22 veces más afín por el etanol que por el metanol,
razón por la cual se utiliza el etanol como antídoto de esta
intoxicación, y se evita la formación de los metabolitos tóxicos del
metanol. (fuente: Llinás Chica, Vladimir)
 Cinetica competitiva
•En la Inhibición competitiva el sustrato (S) y el I compiten por la
enzima libre, pudiendo unirse uno o el otro, pero no ambos
simultáneamente.
•La unión de E a I conduce a la formación de un complejo no
productivo.
•La ecuación cinética disminuye Km.
 b. Inhibición No Competitiva
•El inhibidor se une a un lugar diferente del centro activo, y
provoca la distorsión del centro activo, alterando la
conformación de la enzima, lo que impide la formación del
producto.
•Los inhibidores no competitivos tienen escaso o nulo
parecido con el sustrato, pudiendo unirse solo con la enzima
o con el complejo ES, interfiriendo con la acción de ambos.
•Ejemplo: El Yodoacetato es un agente alquilante que actúa
como inhibidor de la enzima deshidrogenasa gliceraldehído-
3-fosfato, de la via glicolitica. Se une a SH de cisteína del
enzima y modifica el centro activo, dando un derivado
(carboximetilado) con un grupo SH. Es tóxico para los
mamíferos, por que inhibe el metabolismo de la glucosa que
genera energía.
 Cinética No competitiva
•Dado que una fracción de moléculas de la enzima es inactiva, no se
alcanza Vmax (Vmax disminuye), pero Km permanece constante.
• V = Vmax. S . .1. • Km se mantiene
• Kmax+S (1+I/Ki)

•Los inhibidores no competitivos son a menudo intermediarios

metabólicos y regulan la progresión de las vías metabólicas.
 c.- Inhibición acompetitiva
•Es un t5ipo de inhbicion no competitiva.
•El inhibidor se une solo al complejo ES para dar siempre un
complejo inactivo EIS, estabilizándolo e impidiendo la
formación de P.
•Esta forma de inhibición es poco frecuente en las
reacciones monosustrato, pero es frecuente en las
reacciones con dos sustratos.
•En este caso: Km y Vmax disminuyen.
•Su representación en la forma linearizada toma la forma:
Diferenciación de tipos de inhibiciones reversibles.

•APLICACIONES:
•Muchos medicamentos son inhibidores enzimáticos.
 b.- Inhibidores irreversibles: Venenos
•Los insecticidas mas usados son organofosforados y carbamatos.
•Los organofosforados son ésteres de fosfato con O sustituido por S, u
otros radicales.
•Con enlace P-C fosfonato,
•Con enlace P-N fosforamido,
•Con enlace P-S fosfotiolato.

•gases nerviosos. (sarín, tabún, etc.)

Todos son inhibidores
de la enzima
acetilcolinesterasa
 Organofosforados.
•Los impulsos nerviosos son activados por la acetilcolina, que
genera un circuito eléctrico de transmisión de señal entre una
sensación (nervio sensitivo) y un movimiento muscular (motor)
(Fernandez et al, 2010)

La acetilcolinesterasa es una
enzima que hidroliza la
acetilcolina, interrumpiendo el
impulso nervioso.
Acetilcolina --- colina + acetato
•Los organofosforados tienen un grupo ester fosfato, que forma un
enlace estable con los restos de serina (grupos OH) en el centro
activo de la enzima.
•Al inhibir la enzima acetilcolinesterasa en las terminaciones
nerviosas, se acumula acetilcolina, en las uniones neuroefectoras,
lo que altera el funcionamiento del impulso nervioso.

•Acción del fluorofosfato de di isopropilo DIPF

•El DIPF inhibe también a otras enzimas serínicas, como
quimotripsina, tripsina, fosfoglucomutasa, etc.
 Antídotos. Atropina, Oximas, PAM
•Son sustancias que tienen
mayor afinidad por el veneno
que con la serina.
•Ejemplo: PAM (piridín-2-
aldoxim-metayoduro).Tiene un
ion amonio cuaternario que se
une al lugar aniónico del centro
activo de la E inhibida.
•El grupo hidroxilamina del PAM
ataca al fosforilo, formando un
complejo y liberando la E.
•En intoxicación con
Carbamatos, está
contraindicado utilizar oximas
como antídoto. En cambio se
usa atropina.
 VII. REACCIONES CON MÁS DE UN
SUSTRATO
•Algunas enzimas catalizan reacciones con dos o mas
sustratos que se influyen mutuamente.
•A + B--- C + D
•En la mayoría de estas reacciones hay transferencia de
un grupo funcional específico desde un sustrato hacia el
otro (p. ej., grupos fosfato o metilo), o bien se realizan
reacciones de oxidación-reducción en que los sustratos
son coenzimas redox (p. ej., NAD+/NADH o FAD/FADH2
•Entre ellas están las transferasas que transfieren un grupo
especifico desde un sustrato a otro.
•(ATP:glucosa fosfo transferasa), que cataliza la reacción:
•glucosa + ATP ------ ADP + glucosa-6-fosfato

•Mecanismos para explicar este tipo de reacciones. La

mayoría pueden clasificarse en dos tipos:
a)Por formación de complejo ternario;
b) Reacciones ping-pong
a.- Reacciones mediante formación de un complejo
ternario.
El complejo ternario puede formarse de manera aleatoria, o
en un orden determinado.

Mecanismo aleatorio. Los substratos A y B forman un

complejo con la enzima. Cualquiera de ambos puede
combinarse con para formar el complejo ternario EAB,
que conduce a los productos X e Y y a regenerar la
enzima:
Mecanismo ordenado. Un substrato (A) se une inicialmente con la
enzima formando el complejo EA. El segundo substrato sólo se une al
complejo EA para conducir al complejo ternario EAB:

b.- Reacciones sin formación de un complejo ternario. Ping-pong.

Se forma un complejo de la enzima con un sustrato (EA), que libera
el producto X, quedando como EA' (Ejplo, un acil-enzima), el
segundo sustrato se une al complejo (ejemplo, transfiriéndose el
grupo acilo). EC 2.3
 VIII. ENZIMAS ALOSTERICAS
•Son enzimas generalmente multimericas con sitios de unión a
sustratos (centro activo) y efectores (sitio alostérico).
•La actividad catalítica puede modularse (aumentar o disminuir)
mediante unión de moléculas efectoras, en sus sitios alostéricos,
lo que induce cambios de conformación que pueden incrementar
o reducir su velocidad de unión al sustrato.
•Presentan una cinética sigmoidal, indicativa de efectos
cooperativos en la unión del sustrato. (No Michaeliana)
 Enzimas alostericas
•Los efectores pueden ser activadores o inhibidores.

•Control por inhibicion.

•Mediante interacción de los sustratos y productos de cada
reacción con la enzima
• hexoquinasa
•Glucosa + ATP ----------> Glucosa-6-fosfato + ADP

•
•El propio producto de la reacción puede inhibir
competitivamente a la enzima
•Un ejemplo es el control de la glicolisis en la enzima
fosfofructokinasa por la concentración del ATP
 Ejemplos de cinetica.
•1. En una reacción enzimática que transcurre con una
concentración de enzimas de 0,015g/l, se obtienen lo siguiente:
•[S] (g/l) 20 15 10 7.0 5.0 4.0 3.0 2.5
•v(g/l-min)1.14 1.01 0.87 0.72 0.59 0.5 0.44 0.35
•Deduzca el modelo que representa la cinética del proceso.
•Representando
gráficamente se tiene:
 Deducción de los, coeficientes de la ecuación de
Monod.

S v (g/l-min) 1/S 1/v

20 1.14 0.05 0.877
15 1.01 0.066 0.990
10 0.87 0.10 1.149
6.5 0.70 0.15 1.428
5.0 0.59 0.20 1.695
4.0 0.50 0.25 2.000
3.3 0.44 0.30 2.273
2.5 0.35 0.40 2.857
 Grafica Linewaber-Burk

•Interacción.=
1/v
1/vmax=0.614
•vmax = 1.628 g/l-
3.0000
min.
•Pendiente:
y = 5.3879x + 0.6147
2.5000 R² = 0.9914

Km/vmax. = 5.387
•Km = 8.776 g/l
2.0000

1.5000 •El modelo será.

•V =
1.0000
Vmax.S/(Km+S)
0.5000 •V =
0.0000
1.628S/(8.776+S)
0.000 0.050 0.100 0.150 0.200 0.250 0.300 0.350 0.400 0.450

•Comprobar por
Eadi-Hostie
 Lienalizacion de Eadie-Hostfee

• V = Vmax – Km.V/S

v/S
0.160

0.140

0.120

0.100

0.080

0.060
y = -0.1148x + 0.1861
0.040 R² = 0.9758

0.020

0.000
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
 Ejercicio 2
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una
reacción catalizada enzimáticamente sobre un solo sustrato,
obteniéndose los siguientes resultados
Concentración de sustrato Concentración del inhibidor
(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción  (mol L -1 min-1)

0.05 0.33 0.20 0.14

0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De que manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores

para Vmáx, y Km.
 SOLUCIÓN A) La manera más sencilla de deducir cómo
actúa un inhibidor es graficar 1/n0 en función de 1/[S]0 para
cada concentración del inhibidor.

Gráfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la gráfica se puede observar que la pendiente de
las curvas se modifica con los cambios en la concentración
del inhibidor pero no la intersección en el eje 1/n0 (1/Vmax).
Por ello los datos anteriores indican que el inhibidor I está
actuando como un inhibidor competitivo.

B) De la intersección en el eje 1/v0 se puede estimar Vmax=

1(mmol L -1 min-1) y de la intersección con el eje 1/[S]0 los
valores de Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol L
-1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y K =0,3 (mmol L -1) con
m
1(mmol L-1)
 REFERENCIAS
•Muñoz Clares Rosario A., Díaz Sánchez Ángel G., Montiel
Carmina. Como convertir a un inhibidor competitivo en
incompetitivo: el caso de las betaínas aldehído
deshidrogenasas. Mensaje bioquímico, Vol. XXXIII. ISSN-
0188-137X. 2009. UNAM. México D. F., México.
•Fernández Daniel G., Mancipe Liliana C. y Fernández
Diana C. Intoxicación por organofosforados. Universidad
Pedagógica y Tecnológica de Colombia UPTC. Revista de
la facultad de medicina. Pp 64-92. Volumen 18. No. 1 -
Enero - Junio de 2010.
•Villavicencio Núñez Marino. Bioquímica. Edición
CONCYTEC. Lima, 1993.
•Stryer Lubert. Bioquímica. Editorial REVERTE S.A. 1990.