PRÁCTICA N°4

SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

OBJETIVOS:
Conocer e identificar las diferentes técnicas de siembra y aislamiento de muestras microbianas en
medios de cultivo.
Conocer e identificar los tipos y características de crecimiento bacteriano en medios de cultivo para su
identificación final.

INTRODUCCIÓN

Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para caracterizar su crecimiento,
hacer su identificación y determinar sus actividades metabólicas. Un medio de cultivo es una solución
acuosa de de cultivos puros de bacterias, diferentes compuestos que contiene todos los elementos
indispensables.
Generalmente las bacterias son inoculadas o introducidas en medios líquidos solidificados con agar para
su propagación y/o conservación, así como para estudiar sus características de crecimiento. Es
importante recordar que la inoculación de los microorganismos en los medios de cultivo, siempre
debelan realizarse en zona aséptica (cerca del mechero o en campana de flujo laminar), condiciones que
limitan la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes.
Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de microorganismos a partir de muestras complejas
(suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay una gran diversidad microbiana, así como para comprobar
la pureza de los cultivos obtenidos. Los cultivos puros están formados por un solo tipo de
microorganismo; y son indispensables para conocer las características morfológicas, propiedades de
tinción, actividad bioquímica, patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies
microbianas.
El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por métodos de dilución, en medios sólidos por
estría en placa o en medios líquidos.
En el primer caso se considera que cada célula bacteriana que se separa dará origen a una población
que formará una colonia característica, visible a simple vista.
La limitación principal de estas técnicas de dilución, es que no es práctica para el aislamiento a partir de
mezclas donde el microorganismo de interés se encuentra en pequeñas cantidades, donde solamente se
obtendrán las bacterias dominantes.
Para favorecer el aislamiento de cultivos de baja densidad, se aplican métodos de cultivo especiales, en
los que se utilizan medios que contienen nutrientes especiales, antibióticos, altas concentraciones de
sales y/o condiciones de pH, luz o temperatura para favorecer el crecimiento del microorganismo de
interés y se conocen como selectivos o de enriquecimiento.
En ocasiones se pueden agregar a los medios de cultivo otros componentes como: sangre, colorantes,
indicadores, etc. para distinguir especies bacterianas diferentes por la forma en que metabolizan los
sustratos que se manifiesta por cambios en la apariencia o modificación del pH del medio de cultivo.
Estos medios se conocen como medios diferenciales y son de gran utilidad para la caracterización e
identificación de especies bacterianas.
MATERIALES
 Agar TSA en placas y tubos.
 Caldo nutritivo.
 Mechero.
 Asas de siembra.
 Aguja de kölle.
 Hisopos.
 Solución salina fisiológica.
 Tubos de ensayo
 Láminas portaobjetos.

PROCEDIMIENTO
 Identificar la técnica adecuada para la siembra y proceder a realizarla ya sea en un medio
líquido o sólido. Siempre con el asa o aguja de siembra esterilizada antes y después de su uso.
 La boca de los tubos se flamean al destaparlos y antes de volver a tapar.
 Las manipulaciones de siembra se deben realizar en el área de seguridad que brinda el mechero.
 Una vez realizada la siembra y rotuladas las placas y tubos, proceder a incubar en la estufa a
37°C por 24 horas, al cabo de las cuales se hace la lectura correspondiente.

LECTURA E INTERPRETACIÓN DE COLONIAS

Si se han seguido correctamente las técnicas de siembra y cultivo, sobre algunos planos del medio, se
podrá visualizar masas microbianas definidas y separadas entre si, llamadas colonias en medio sólido; y
turbidez, sedimento, película o flóculos en medio líquido.
Cada colonia es el resultado de la multiplicación logarítmica de una bacteria depositada en un punto del
medio sólido, que en condiciones óptimas de crecimiento forman una progenie con sus características
de especie o de grupo, las cuales nos permitirán su identificación.
Las principales características morfológicas que presentan las colonias son:
FORMA: Circular, elíptica, puntiforme y filamentosa.
ELEVACIÓN: Plana, convexa, acuminada, umbilicada.
BORDE: Entera, ondulado, dentado, filamentoso.
SUPERFICIE: Lisa, rugosa, granulada.
TAMAÑO: Diámetro en milímetros.
CONSISTENCIA: Cremosa, membranosa, mucosa.
CROMOGENENESIS: Pigmentación verde, amarilla, roja, etc.
GRADO DE TRANSPARENCIA: Transparente, translúcido, opaco.
CUESTIONARIO
1. Cuál es el fin de usar una siembra por estría simple?
2. Cuál es el objetivo de la siembra por estría por dispersión o agotamiento?
3. Para qué sirve la siembra por puntura?
4. De sus placas y tubos sembrados, describa las características morfológicas de las colonias
encontradas.
5. Esquematice las observaciones de la práctica.