UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN

MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA

ACADÉMICA

FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO

Fecha: Abril 2011 Código: GRL-006 Página 1 de 12 Versión: 4.0

INFORMACIÓN BÁSICA

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: EXTRACCIÓN DE ADN PRACTICA No. 11

ASIGNATURA: Biología

TEMA DE LA PRÁCTICA: Extracción sencilla de ADN (ácido desoxirribonucleico) de material

vegetal
LABORATORIO A UTILIZAR: Biología

CONTENIDO DE LA GUÍA

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO.

 Extraer ADN de material vegetal
 Discutir la diferencia entre la molécula de ADN y ARN
 Reconocer procesos básicos como claves en el desarrollo de cualquier actividad

INTRODUCCIÓN.
Los ácidos nucleídos, ADN (ácido desoxirribonucleico) y ARN (ácido desoxirribonucleico) son
polímeros especializados en almacenar, transmitir y expresar la información genética en secuencias
de aminoácidos, las cuales luego de algunos procesos (Traducción) conforman las proteínas de una
célula.

MARCO TEORICO

Cada molécula de ADN está constituida por dos cadenas o bandas formadas por un numeroso
grupo de compuestos químicos llamados nucleótidos. Estas cadenas forman una estructura (de
escalera retorcida) que se llama doble hélice. Cada nucleótido está formado por tres unidades: una
molécula de azúcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos
nitrogenados llamados bases: Adenina (abreviada como A), Guanina (G), estas son Purinas, Timina
(T) y Citosina (C), estas son pirimidínicas; La molécula de desoxirribosa ocupa el centro del
nucleótido y está rodeada por un grupo fosfato a un lado y una base al otro. El grupo fosfato está a
su vez unido a la desoxirribosa del nucleótido contiguo de la cadena. Estas subunidades enlazadas
desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases están enfrentadas por parejas
(Figura 1).
Deben considerarse también a la hora de seleccionar una metodología de extracción los diversos y
versátiles sistemas comerciales tipo kits para la extracción de DNA y RNA existentes en el mercado.
Muchos de ellos se basan en procedimientos cromatográficos para la purificación. Posteriormente a
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la extracción del ácido nucleico de interés es necesario evaluar la cantidad y calidad del mismo.
Con una electroforesis en gel de agarosa podemos conocer la calidad de la muestra. Si el DNA no
ha sufrido roturas veremos una única banda de alto peso molecular. Para el caso de muestras de
RNA la corrida electroforética de preparaciones de buena calidad mostrará claramente los
diferentes RNAs ribosomales y de transferencia.

(http://www.biol.unlp.edu.ar/bioquimica3/TP4-09.pdf) Bioquimica III

Figura 1. Estructura molecular del ADN,y enrollamiento molecular / tomado
de:http://3.bp.blogspot.com/-
ylsJX3a4Koc/TWquit5UmnI/AAAAAAAAAIM/8qpqgT4tn3k/s1600/cromosom_ADN01%255B1%255D
.jpg
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La estructura del ADN es de doble cadena, lo que

probablemente da una mayor protección a la información
contenida en la molécula. La estructura del ARN es
monocatenaria aunque, puede presentarse en forma
lineal como el ARNm o en forma plegada cruciforme
como ARNt y ARNr (Figura 2).

Figura 2. Representación de las cadena de ARN y ADN,

tomado de: http://www.biotecnologica.com/wp-
content/imagenes/2007/06/rna.png

Otra diferencia entre ADN y ARN es su componente de pentosa (azúcar), el ADN cuenta con
desoxirribosa y el ARN con ribosa, el ADN está compuesto por Adenina, Timina Guanina y Citosina,
el ARN sustituye la Timina por Uracilo (Figura 3).

CONSULTA PREVIA

Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Práctica de Laboratorio. Apóyate para ello de
las  ayudas  visuales  brindadas…Debe  responder  a  la  pregunta:  ¿Por  qué  el  ADN  es  la  Clave  de  la  
diversidad de la Tierra? Elabóralo en Cmaptools.

http://www.youtube.com/watch?v=nje9i7CRkt8&feature=related El ADN
http://www.youtube.com/watch?v=-EGKrYdQEHQ&feature=related Replicación del ADN
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METODOLOGIA
Se desarrollara en grupos de cuatro personas como máximo, en los espacios de los laboratorios de
Biología, siguiendo el procedimiento indicado en la guía de trabajo.
Esta práctica se realizara para estudiantes del área de salud e ingenierías incluyendo psicología
El tiempo de extracción es relativamente corto comparado con procesos de extracción de ADN
Animal. Por ello la descripción de cada proceso como se describe a lo largo del procedimiento a
seguir, involucra la atención sobre cada uno de los 8 pasos. Los cuáles serán considerados clave
en el análisis final.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR.

Materiales Y Equipos Reactivos Material Estudiante*

Mortero y pistilo (6)
Beaker 200 ml. (3)
Centrífuga. (1)
Probeta 25 ml. (5)
Marcador para vidrio y colores
(anaranjado, azul, morado, rojo,
Agua destilada (300 ml.)
negro, blanco) entre otros
(INDISPENSABLE)
Isopropanol (o Alcohol
Cinta de enmascarar
isoamílico) a 0·C. (50 ml.)
Guantes (2 pares por estudiante)
Gafas de protección, Gorro y Bata
Azul de metileno. (2 ml.)
Manga larga de material no
inflamable.
Bisturí por grupo

Cubeta con hielo (1) Cloruro de Sodio (Sal) (5 gr.)

Pipeta 10 ml. (5) Bicarbonato de Sódio (5 gr.)

Tubos de Ensayo (21) gradillas Champú (Jabón líquido) (5 ml.)
(6) Ojala sin color alguno o blanco.
Agitador de vidrio (5)
Balanza digital (1) L Banano 1 unidad

Bisturí (1 por grupo)

1 cebolla pequeña por grupo

Tomate 1 unidad

Germen de trigo

Arvejas frescas (desgranadas)

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Cada uno de los materiales vegetales solicitados deben ser medidos para que no se genere
desperdicio del mismo al momento de terminar con la práctica.
 Los estudiantes que no porten sus implementos de Bioseguridad individuales y materiales
por equipo no serán admitidos a la sesión de trabajo práctico.
 Recuerden traer las cantidades solicitadas en recipientes aislados para no contaminar un
contenido mayor al solicitado en el laboratorio.

PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO

ESPECIALIZADO.

Con precaución y cuidado al manipular la balanza digital normal y la balanza de precisión.

(Tararla adecuadamente)

Al igual que el Bisturí – evitando cortar hacia el interior.

Desechar adecuadamente los excedentes de Alcoholes en los recipientes adecuados (Fenoles)

Reactivos y Reacción
Agua destilada: Agua a la que se le han eliminado iones e impurezas mediante destilación.
Isopropanol o acohol isoamílico:H3C-HCOH-CH3.Es un alcohol incoloro, inflamable, de olor intenso,
compuesto no polar, en la práctica permite la precipitación del ADN.
Azul de metileno (Cloruro de Metilionina):C16H18ClN3S, es un compuesto de variadas aplicaciones,
entre estas la capacidad de teñir tejidos viables, en la práctica tiñe las fibras de ADN.

PROCEDIMIENTO:
1. Preparación de la solución tampón.
En un beaker de 200 ml mezclar: 120 ml de agua destilada, 4.5 gr de Sal, 5 gr de Bicarbonato de Sodio, 5
ml de Champú.

2. Preparación del material biológico

Se corta en cuadritos el material vegetal (cebolla), también realiza el mismo procedimiento con el
banano y cualquier otra muestra. Se le añade un poco de agua destilada y a continuación se tritura
utilizando el mortero, hasta dejar sin partículas el macerado.
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3. Mezcla del puré con el tampón frío

En una probeta de 25 ml se depositan 5 ml del macerado obtenido en el paso anterior y se añaden10 ml
de la
Solución tampón frío. Se agita fuertemente durante 2 min.

10 l 5 ml
15 ml

4. Centrifugación por 10 minutos a baja velocidad

El contenido de la probeta se separa en los dos tubos de ensayo pequeños, de manera que los dos
tengan la misma cantidad. A continuación estos tubos se ponen en la centrífuga durante 5 min.

Nota: Los jabones utilizados como la para lavar la vajilla emulsionan los lípidos de las membranas
celulares y las rompen.

5. Recoger el sobrenadante
Tras la centrifugación se recoge el sobrenadante (con cuidado de no agitar el precipitado) de cada
uno de los tubos de ensayo hasta completar 5 ml; para ello nos ayudamos de una pipeta. Este
sobrenadante se pone en otro Tubo de ensayo limpio.
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Pipeta

6. Añadir el alcohol isoamilico o isopropanol

Se añade 10 ml de alcohol isoamílico o isopropanol frío lentamente al tubo que contiene el
sobrenadante, se dejacaer el isopropanol o alcohol isoamílico sobre las paredes de la probeta. Se
debe dejar escurrir lentamente el el alcohol por la pared interna del tubo, teniendo este inclinado. El
alcohol quedara flotando sobre el tampón.

7. Recoger el ADN con una varilla de vidrio

Tras añadir el alcohol (isopropanol o isoamílico) en nuestra muestra han quedado dos fases, una
superior (contiene el alcohol) y otra inferior. Se introduce la pipeta en la interface entre el alcohol y
el resto de la muestra y se va extrayendo con cuidado, en este material se encuentra el ADN

Alcohol

ADN

Sedimento

8. Añadir una gota de azul de metileno

El método que hemos utilizado para extraer al ADN no es del todo eficiente, ya que en la muestra
todavía queda ADN sin extraer. Al añadir el azul de metileno, en la interface, se teñirán las fibras de
ADN que no hemos conseguido extraer.
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BIBLIOGRAFIA
MADER, S. 2008. Biología. 9na Edición. McGraw Hill. México, D.F.
MATTA, N; GARCIA, M. 1997. Curso libre juvenil en Biología. Facultad de Ciencias. Departamento
de Biología. Universidad Nacional de Colombia.
PERSON, 2010.Biologia. México, D.F.
Cibergrafía
http://www.biol.unlp.edu.ar/bioquimica3/TP4-09.pdf

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Firma: Docentes Laboratorio de Firma: Equipo Docente Firma: Equipo de laboratorio de

Biología Laboratorio de Biología Biología

Nombre: Equipo Laboratorio de Nombre: Equipo Docente Nombre: Equipo de Laboratorio

Biología Laboratorio de Biología de Biología y Gerencia de
Laboratorios

Fecha Enero 2013 - Rediseño Fecha: Enero 2013 Fecha: Enero 2013
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INFORME DE LABORATORIO

GRUPO:

ESTUDIANTES:


 NOTA:

CARRERA:

Formule tres objetivos que desee cumplir con la Práctica de Laboratorio

1.
2.
3.

Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Práctica de Laboratorio.

Apóyate   para   ello   de   las   ayudas   visuales   brindadas…Debe   responder   a   la   pregunta:   ¿Por qué el
ADN es la Clave de la diversidad de la Tierra? Elabóralo en Cmaptools.

http://www.youtube.com/watch?v=nje9i7CRkt8&feature=related El ADN
http://www.youtube.com/watch?v=-EGKrYdQEHQ&feature=related Replicación del ADN

RESULTADOS:

1. Analiza y describa lo observado en los procedimientos realizados, desde el paso 3 al 8. –

deben ser específicos en Cuanto a las pruebas y cada proceso para permitir al final observar
la evidencia de la Presencia de ADN Vegetal obtenido.
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2. Explica apoyándote además de un gráfico sobre de la acción del detergente (líquido) sobre
las células vegetales. ¿Qué efecto o fenómeno realizan componentes lipídicos de la
membrana al adicionarles detergente?.

CUESTIONARIO

1. Realiza un cuadro comparativo entre ADN y ARN

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2. Consulta acerca de la Clonación como mecanismo de mediación en pacientes con cáncer

ante la pérdida de algún órgano.

CAUSAS DE ERROR.

CONCLUSIONES
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APLICACIÓN PROFESIONAL DE LA PRÁCTICA REALIZADA

BIBLIOGRAFIA UTILIZADA