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Efectividad de productos sintéticos sobre formas

inmaduras de Fasciola hepatica en ratones CD-1
infestados artificialmente

Article · January 1999

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Ervelio Olazabal
Universidad Central "Marta Abreu" de las Villas
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Medicentro 1999;3(3) http//:capiro.sld.cu/medicentro/v3n399/fasciola.htm

Efectividad de productos sintéticos sobre formas inmaduras de Fasciola

hepatica en ratones CD-1 infestados artificialmente.
Por:
Ervelio E. Olazábal Manso*, Héctor Quiroz Romero** , Froylan Ibarra Velarde*** , Rafael
Castillo Bocanegra**** Alicia Hernández Quintanilla****

* Doctor en Ciencias Veterinarias. Profesor Auxiliar de Parasitología Veterinaria.

Centro de Bioactivos Químicos, UCLV. Carretera a Camajuaní km 5, Santa Clara, Villaclara,
Cuba. E-mail ervelio@cbq.vcl.sld.cu.
Dirección particular: Calle 1ra edificio 3 apto 3 entre 2da y Carretera de maleza Santa Clara,
Villaclara.

** Profesor Titular en Parasitología Veterinaria

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM. Circuito Exterior, Ciudad
Universitaria c.p.04510, México D.F.

*** Investigador Titular. Doctor en Ciencias Veterinarias

Instituto Nacional de Investigaciones Forestales (INIFAP) km 11.5 Carretera Cautla,
Colonia Progreso, Jiutepec, Morelos. c.p. 62500 Estado de Morelos, México.

**** Profesores
Facultad de Química, UNAM. Circuito Exterior, Ciudad Universitaria c.p. 04510, México D.F.

RESUMEN
Este ensayo fue realizado para evaluar la actividad fasciolicida de 5 productos químicos
derivados benzimidazólicos nuevos utilizando 100 y 200 mg/kg de peso por vía oral y el
Triclabendazol a 40 y 80 mg/kg de peso en tamizaje primario con formas inmaduras de Fasciola
hepatica, de 2 semanas de edad, en ratones invadidos artificialmente. Como criterio de
efectividad se analizó el promedio de F. hepatica en el grupo tratado comparado con el control,
así como el índice hepático, el grado de lesiones del bazo y las muertes ocurridas en cada grupo.
Se obtuvo que tres de los compuestos benzimidazólicos demostraron una efectividad no
significativa al compararlos con el control infestado y no tratado ( 71.83% Beta y AHC-15;
64.79% AHC-56 ). El Triclabendazol a 80 mg/kg de peso tuvo 100% de efectividad, mientras que
a 40 mg/kg de peso disminuyó a un 53.52%.
Palabras claves: Fasciola hepatica, Benzimidazoles, Triclabendazol, ratones CD-1
 INTRODUCCIÓN
Para la evaluación de sustancias potencialmente fasciolicidas es necesario partir de un tamizaje
inicial que se realiza en animales de laboratorio con vistas a que sea barato y rápido. En este
sentido el ratón ha sido utilizado como un modelo útil 1 y actualmente muchos investigadores
usan estos modelos para las evaluaciones de fasciolicidas 2. Por otra parte, aunque existe una gran
variedad de productos fasciolicidas, estos no tienen una actividad adecuada sobre las formas
juveniles y adultas del parásito, siendo además caros. Es por ello que la búsqueda de nuevos
productos que posean una buena efectividad tanto contra las formas maduras como las inmaduras
y que al mismo tiempo sean de bajo costo y de síntesis no complicada, es una necesidad para
satisfacer las demandas de productos que afecten lo menos posible, los gastos ocasionados por los
tratamientos fasciolicidas. Debido a lo señalado anteriormente en la Facultad de Química de la
Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) se está trabajando desde hace algunos años
en el desarrollo de nuevos productos bencimidazólicos, que cumplan estas características, basado
en que el mejor producto fasciolicida que existe en el mercado es el Triclabendazol por su buena
efectividad contra formas inmaduras y maduras 3, y que el mismo es un producto derivado
benzimidazólico, quedando justificada por estas razones el desarrollo de nuevos productos por
esta vía que ya cuenta con un aval de efectividad demostrado en evaluaciones clínicas en el
hombre y los animales 3,4.
En el presente trabajo se someten 5 productos sintéticos de la Facultad de Química de la UNAM y
el Triclabendazol a una evaluación de efectividad sobre Fasciola hepatica inmaduras de dos
semanas de edad.

MATERIAL Y MÉTODO
Durante el transcurso del ensayo se utilizaron ratones CD-1 procedentes del bioterio de la
Facultad de Medicina de la UNAM, que se ubicaron en sus lugares habituales en el vivario del
Departamento de Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UNAM.
Los ratones tenían un peso de 20 g verificado antes de comenzar el experimento, de sexo machos
y en buen estado de salud. Se utilizaron un total de 54 ratones, 17 controles y 37 tratados ( 7
grupos ) de acuerdo con la fórmula de Goldin et al. 5 donde A= B * √ C , siendo A= Número de
ratones en el grupo control, B= Número de ratones en cada grupo y C= Cantidad de grupos.
Cuatro grupos se inocularon con los productos sintetizados y codificados por la Facultad de
Química de la UNAM, México D.F. a 100 mg/kg de peso y por vía oral con los compuestos
AHC-T, AHC-15, AHC-16, AHC-56, el compueso Beta fue aplicado por vía oral a 200 mg/kg de
peso, un grupo fue tratado con Triclabendazol ( TCBZ ) lote 8173, producido por la CIBA

2
GEIGY de México D.F. a 80 mg/kg de peso, otro con TCBZ a 40 mg/kg de peso y un grupo se
mantuvo como testigo inoculado con metacercarias y sin tratar. Los productos fueron diluídos en
un excipiente que contenía 5% de DMS y 95% de aceite de oliva a la concentración de 10 y 20
mg/mL siendo utilizados inmediatamente después de preparados. Cada ratón recibió un volumen
de 0,2 mL de cada producto con una jeringa de 1 mL y una cánula esofágica, correspondiéndose
con 1/100 partes del peso del cuerpo en dosis única a los 14 días de inoculados los ratones con 5
metacercarias de Fasciola hepatica de dos semanas de edad, por vía oral, procedentes de un
biotopo artificial en el INIFAP. La necropsia de los animales se efectuó el día 7 después de
administrar el producto según lo establecido por Corba et al.6. Se registraron las muertes y en los
casos que no hubo autolisis se realizó la necropsia.
La efectividad se midió en base a:
1) Presencia o no de F. hepatica en su forma juvenil demostrable mediante examen laboratorial
utilizando la necropsia helmintológica el día 7 posterior a la aplicación del tratamiento
.Comparación de la cantidad de F. hepatica encontradas en el grupo control
( inoculado sin tratar ) mediante la fórmula de Steward 7:
XC-XT
E = ---------- * 100
XC
Donde E = Porcentaje de efectividad, XC = Número promedio de F. hepatica en el grupo
control, XT= Número promedio de F. hepatica en el grupo tratado.
Considerándose efectivo cuando E fue superior a 90%. y existió una diferencia significativa
P<0,05 entre el número de parásitos del control y el grupo tratado 8.
2) Determinación del índice hepático mediante la fórmula A= (B/C) * 100. Donde A= Indice
hepático, B= peso del hígado, C= peso del cuerpo9.
3) Grado de las lesiones en el hígado y volumen del bazo 10.
Se obtuvo la ganancia media, utilizando la ganancia total (peso final- peso inicial ) dividida entre
el número de días existentes dentro del período inicial y final del experimento.
Se aplicó un análisis de varianza clasificación simple y t de student para determinar la diferencia
estadística entre el número de Fasciola de los grupos tratados y el control inoculado sin tratar.

3
 RESULTADOS
En tabla 1 se puede observar que el TCBZ a la dosis de 80 mg/kg de peso la ganancia media fue
negativa (-6.22 g), aunque el índice hepáticodel fue más bajo (91.77), así como el peso medio del
bazo (0.09 g). Los productos con mayores ganancias de peso fueron el Beta ( 4.52 g) y el AHC-56
(4.88 g), pero este último tuvo un índice hepático alto ( 137.2 ), ocupando el segundo lugar
después del AHC-16 con un índice hepático de 138.5.
En la tabla 2 se destaca que en el grupo del TCBZ a 80 mg/kg de peso hubo una muerte, no se
encontraron Fasciola, la efectividad fue de 100% y sólo se encontró un 20% de la superficie del
hígado afectada. El producto menos efectivo fue el AHC-16 ( 0% ) y el AHC-T ( 29.58% ),
muriendo 2 y 3 ratones respectivamente. La intensidad de invasión del AHC-16 fue más alta
(1.50 ), así como la extensidad de invasión ( 66.67%); aunque el AHC-56 alcanzó 75% de
afectación de la superficie del hígado.
Se encontraron diferencias estadísticas P< 0.05 entre el TCBZ a 80 mg/kg de peso y todos los
demás tratamientos. No se encontraron otras diferencias estadísticas.
DISCUSION
El TCBZ a la dosis de 80 mg/kg de peso afectó la ganancia de peso de los ratones al compararlo
con el grupo sin inocular ( tabla 1 ), además hubo un efecto satisfactorio sobre el peso del bazo y
el índice hepático que fue el menor de todos, mientras que no ocurrió así con el TCBZ a la dosis
de 40 mg/kg de peso, en el que hubo una pequeña ganancia, mientras que si aumentó el peso del
bazo, aunque fue inferior al grupo inoculado y el grupo sin inocular, siendo evidente la diferencia
entre la dosis de TCBZ a 40 mg/kg de peso y 80 mg/kg , ya que en la primera hubo un 100% de
efectividad y en el segundo solamente 53.52 ( tabla 2 ). Estos resultados son interesantes ya que
Coles11 evaluó el TCBZ en ratas con una sola dosis oral simple, encontrando un 99% de
mortalidad en F. hepatica adultas de la rata a la dosis de 40 mg/kg de peso, evidenciándose que
existe una diferencia entre el efecto producido por este medicamento sobre F. hepatica maduras
en las ratas y las inmaduras en los ratones de este experimento; lo que ha sido reportado en ovinos
donde las dosis efectivas para Fasciola de 4 semanas fue de 10 mg/kg de peso y para F.
hepatica de 12 semanas solamente 2 mg/kg de peso12, pudiendo estar asociado este efecto con el
mecanismo de acción del TCBZ13.
Al mismo tiempo se observa que la dosis utilizada en los rumiantes para diferentes fasciolicidas
es 4 a 8 veces más baja que en los roedores, aspecto que puede estar relacionado con el
metabolismo más elevado en los roedores y que fue observado por Babicek y Danek(14), quienes
encontraron que las dosis efectivas 100% en las ratas de Oxyclozanida y Rafoxanida fueron de
400 mg/kg de peso, sin embargo las dosis efectivas para Fasciola inmaduras en ovinos es de 15, 5
y 7,5 mg/kg de peso respectivamente12.

4
 Aunque en los nuevos compuestos evaluados no se encontraron productos que pudieran clasificarse de
efectivos contra las formas inmaduras de Fasciola hepatica, teniendo en cuenta los criterios de
efectividad y de diferencia estadística significativos para P<0,05 de acuerdo con lo señalado por Wood
et al.8, si es necesario destacar que algunos productos manifestaron una reducción en el número de F.
hepatica que pudiera aumentar si se incrementa la dosis utilizada como el Beta que tuvo un 71,83% de
efectividad con un solo ratón muerto y el AHC-15 con una efectividad similar al anterior pero sin
muertes, ya que las dosis administradas fueron de 200 y 100 mg/kg de peso respectivamente y como se
señaló anteriormente para la Oxyclozanida y la Rafoxanida las dosis pueden llegar hasta 400 mg/kg en
los ratones y después ser muy inferiores en los rumiantes14.
Fue muy llamativa la ganancia de peso obtenida con el producto AHC-56 ya que el promedio fue de
4.88 g; muy superior al grupo sin inocular y sin tratar( 4.14 g), aunque el índice hepático fue alto y la
efectividad fue de 64.79 %. Correspondiéndose el incremento del índice hepático con las lesiones en el
hígado, típicas de esta parasitosis, debido a la migración del parásito joven por el parénquima de este
órgano 15 que incluyen en algunos casos riesgos de neoplasias 16. No obstante, se debe tener en cuenta
que para seleccionar un fasciolicida este debe tener una efectividad alta y no ser tóxico 8,17 .
De todo lo analizado anteriormente se evidencia que los productos Beta, AHC-T, AHC-15, AHC-16 y
AHC-56 no tienen una efectividad significativa sobre F. hepatica inmaduras de 2 semanas de edad a las
dosis ensayadas, mientras que el TCBZ tiene una efectividad del 100% sobre F. hepatica a la dosis de
80 mg/kg de peso y a la dosis de 40 mg/kg de peso su efectividad disminuye a una efectividad de
53.62%.
AGRADECIMIENTOS
Los autores expresan su agradecimiento a la Academia del Tercer Mundo, al CONACYT de México y
a la UNAM de México, quienes financiaron la investigación y ofrecieron las facilidades para el
desarrollo de la misma.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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5
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Med Parazitol (Mosk) 1996;(1):25-26.

6
 SUMMARY
This assay was developed to evaluate the flukicide effectiveness of five new benzimidazolic
derivatives utilizing 100 and 200 mg/kg body weight by oral application as well as
Triclabendazol 40 and 80 mg/kg body weight in primary screening with immature stages of
Fasciola hepatica in mice invaded artificially . The criteria of activity was analyzed by the
Fasciola average in the treated group compared with the control group as well as the liver index,
spleen lesions and death in each group. The results showed that three new compound did not have
a significant effect compared with the control group infested and no treated ( 71,83% Beta and
AHC-15 ; 64,79% AHC-56 ) . Triclabendazol 80 mg/kg had 100% effectiveness and at 40 mg/kg
body weight doses decrease in a 53,52%.
Key words: Fasciola hepatica, benzimidazole, Triclabendazole, mice CD-1

7
Tabla 1. Efecto del trtatamiento con Triclabendazol y compuestos benzimidazólicos nuevos
en ratones invadidos con Fasciola hepatica sobre la ganancia de peso, el peso del bazo y el
indice hepático

Grupos de Dosis Ganancia Peso del bazo (g) Indice hepático

tratamientos
mg/kg Media(g) ES Promedio ES %
TCBZ 80 -6.22 5.23 0.09 0.01 91.77
TCBZ 40 1.87 1.23 0.22 0.03 117.4
Beta 200 4.52 1.54 0.43 0.18 113.7
AHC-T 100 -7.83 3.18 0.18 0.11 108.9
AHC-15 100 1.08 4.42 0.29 0.1 110
AHC-16 100 -0.94 4.09 0.32 0.09 138.5
AHC-56 100 4.88 5.01 0.35 0.2 137.2
Inoculados 0.23 2.61 0.34 0.16 113.1
Sin 4.14 1.33 0.3 0.08
inocular.

8
 Tabla 2. Efecto del tratamiento con Triclabendazol y compuestos benzimidazólicos nuevos a
las dos semanas postinvasión con Fasciola hepatica en ratones; sobre las muertes, hallazgos
de parásitos, efectividad de los productos y la extensión de las lesiones en el hígado

Grupos de Réplicas Muertos Hallazgos de Fasciola en Media E% I.I. E.I. Higados

tratamientos la necropsia Fasciola % afectados
hepatica %
TCBZ 6 1* 0, 0, 0, 0, 0, 0 0.00a 100.00 0.00 0.00 20.00
TCBZ 6 0 1V, 1V, 0, 0, 0, 0 0.33b 53.52 1.00 33.33 50.00
Beta 6 1* 1, 0, 0, 0, 0 0.20b 71.83 1.00 20.00 60.00
AHC-T 5 3* 1, 0 0.50b 29.58 1.00 50.00 50.00
AHC-15 5 0 1, 0, 0, 0, 0 0.20b 71.83 1.00 20.00 60.00
AHC-16 5 2* 2, 1, 0 1.00b 0.00 1.50 66.67 66.67
AHC-56 4 0 1, 0, 0, 0 0.33b 64.79 1.00 25.00 75.00
Inoculados 17 0 1V, 1V, 1V, 1V, 1V, 1V 0.71b 1.33 52.94 58.82
2V, 2V, 2V, 0,0,0,0,0,0,0,0
a,b. = letras diferentes en una misma columna difieren para p< 0.05, V =Fasciolas vivas, I.I.= Intensidad de Invasión, E.I.%

=Extensidad de Invasión, *= No se pudo realizar la necropsia, E%= Efectividad %

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