UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Clase:Transposones y Secuencias
de Inserción

Curso: Genética Microbiana

Semestre 2014-II
 CONTENIDO
• Antecedentes
• Características generales
– Tipos de transposones
– Tipos de transposición
• Mecanismos moleculares de la
transposición.
– Intermediarios comunes en la transposición
• Integrones
• Transposones en la naturaleza
 Antecedentes
Barbara McClintock (50s), transposones
(elementos controlantes) presentes en el maiz
le dan inestabilidad genética causando
variación somática.

Dra. Barbara McClintock Citogenetista, trabaja en la

1902-1992
variabilidad genética del maíz
Una «variación genética» en una célula durante el
desarrollo de la testa del grano, hace que todo el
linaje celular somático la herede, y esto da lugar a la
aparición de manchas en la superficie

Premio Nobel en 1983

30 años después de
haber publicado su
trabajo.
 Transposones en bacterias
• 60s, inestabilidad en bacterias en relación a la
adquisición de resistencia a antibióticos.

• 1975, Hedges & Jacob demuestran la

presencia de Transposón (TnA, resistencia a
la Ampicilina por Β Lactamasa TEM2) dentro
del plásmido RP4 (moviliza juntos Ar, Kr, Ter).

– TnA Tn1
– TnK Tn5
– TnC Tn9
Autor: Prof. MSc. Débora Alvarado Iparraguirre
Lab. Microbiología Molecular y Biotecnología
A nivel molecular los transposones son secuencias
genicas que causan mutaciones por inserción.

Mutación por inserción

transposón

La inserción del transposon puede realizarse dentro de:

Secuencias no génicas.

Secuencias genicas, con/sin supresión de su función.

Secuencia reguladora de un gen, produciendo cambios
en su expresión.
 Características generales
1. Transposones son
elementos DNA que “saltan”
o transposan a diferentes
lugares del DNA.

2. Transposición es el
movimiento del transposón.

3. Este proceso requiere de

factores protéicos
particularmente especiales
para cortar y ligar el DNA 
transposasa

4. NO se requiere homología
entre el transposon y la
secuencia blanco.
Los transposones bacterianos contienen repeticiones
invertidas terminales (ITRs) en cada extremo.
Las transposasas son codificadas por secuencias dentro
del transposón.
ITRs-closely
related rather
than identical

ITRs-define
the ends of
transposon

Recognition of
the ends-
critical in
transposition;
point mutations
Autonomous abort it
unit-sponsors
its own
transposition
1. Los transposones
más pequeños se
llaman-secuencias IS3
de inserción o
elementos IS.) El
número identifica All ISs contain one
el tipo. 750-2000 ORF=TNP; IS1 is an
bp. exception- frameshift
reads both frames
2. La mayoría de
bacterias
contienen varios
elementos IS y
frecuentemente
más de una copia
en el cromosoma.

3. Durante la
inserción, se
duplica una
pequeña porción
de la secuencia Direct
blanco.. repeat Direct
repeat
La longitud más común para las repeticiones
directas es 9 pb
Los transposones
tienen repeticiones
invertidas terminales
y crean repeticiones
directas de DNA
flanqueante en el
sitio blanco.

Nota:
1- Los sitios blanco
tienen sólo 4-13 pb.
2- Los blancos pueden
ser al azar, “hotspots” o
preferidos (doblez de
Fig.
DNA; secuencias 16.2,
consenso; región Genes
inactiva). VIII
1. Tasa de transposición:
~10-3-10-4 por generación

2. Tasa de mutación espontánea:

~10-5-10-7 por generación

3. Tasa de reversión (por excisión precisa del

elemento IS)
~10-6-10-10 por generación
~103 veces menos frecuente que la inserción.

Evento importante para la evolución de los

microorganismos
Tipos de transposones
Transposones no compuestos
 Elementos IS del mismo tipo pueden formar un
transposón más grande llamado Transposón compuesto

Central region carries

Inverted IS drug resistance Inverted IS
elements (Arm L) elements (Arm R)

IS elements as direct IS elements as direct

repeats (Arm L) repeats (Arm R)
Elementos IS sólo portan
enzimas necesarias para La
direct direct
transposición (transposasa,
resolvasa).

Módulos IS – idénticos (ambos

funcionales: Tn9; Tn903) o
cercanamente relacionados
(difieren en habilidad
funcional : Tn10; Tn5)

Nota: los transposones que

portan marcadores de
resistencia se designan “Tn#”.
 Un módulo IS funcional puede transposar de manera
independiente o como una unidad de transposón compuesto
 Los dos módulos IS10 pueden mobilizarse a alguna región
del DNA que se una entre ellos
Tetr
Tn10
IS10L IS10R
IS10L Tetr IS10R

Resultado 1

Transposón se transposa
nuevamente
Transposón se
integra en el
DNA circular

Resultado 2 Se forma un nuevo transposón

IS10L por movilización del módulo
IS10R
IS10 en orientación
alternativa.
 La repeticiones
directas se generan
por introducción de
cortes escalonados
cuyos extremos
libres se ligan al
transposón.

La repetición del blanco

ATGCA
es característica de TACGT
cada transposón;
refleja la geometría de
la enzima de corte
Tipos de Replicación
 La transposición causa
reacomodos del DNA por
recombinación homóloga entre
copias de un transposón.
 Recombinación usando
enzimas celulares
Rearreglos del DNA del
hospedero-(cuando un Tn IS1 IS1
inserta una copia en un
segundo sitio cerca de
su localización original)

Recombinación recíproca entre

las dos copias del transposón
Single copy on
Lost from chromosome
1. Repeticiones directas o the cell
en la misma orientación
dan como resultado la
excisión del transposón (u
otro material entre las
repeticiones directas).
 (1) (2)

Reciprocal recombination
2. Las repeticiones between two copies of the
invertidas dan como transposon

resultado la (2)
inversión del
transposón. (1)

(2) (1)
 Mecanismo Molecular de la transposición
Transposición 3’-OH ends
generated
No replicativa:
Modelo “Cut &
Paste”
Transestrification in
Acción de la which the 3’-OH end
transposasa directly attacks the
target DNA (within
nucleoprotein complex)
Ambas bandas
transposan

Transposon deja
al DNA donador
 sólo una copia
del transposón
sale.
Transposición 1. Acción de la
Replicativa transposasa

Nota: los cortes

están en diferentes
bandas
2. Unión a los extremos del blanco
Strand transfer
complex=crossover complex
3. Formación del co-integrado y
resolución (resolvasa TnpR)
Fusion of two original molecules;
requires host replication
functions

Two copies of transposon;

crossover formed by
Homologous transposase

Resolution
requires
resolvase
original

duplicated
Intermediarios comunes para L3 R3

la transposición 22 bp MuA also

consensus binds to
Mu se integra por transposición no replicativa. Durante internal
el ciclo lítico el número de copias es amplificada por site-
transposición replicativa. needed for
complex
L2 R2
Un transposón Mu pasa a través de 3 formation
but not
estados estables: L1 R1 strand
cleavage

1. Transposasa MuA se enlaza a los

extremos como un tetrámero
formando una sinapsis.
2. Las subunidades de MuA actúan
en trans para cortar cerca a R1 cuts in transfers
y a L1 trans in trans

3. MuA actúa en trans para cortar

Fig.
el DNA sitio blanco y media en 16.12,
trans la transferencia de las Genes
VIII
cadenas.
La proteína MuB asiste a la reacción,
influencia la elección del blanco.
Mu Tn se mueve >10-15 kb lejos del sitio
original (inmunidad del blanco).

MuB se enlaza al complejo DNA MuA-

Mu; MuA provoca que MuB hidrolice
ATP
MuB es liberado del DNA donador dando
preferencia para la transposición al blanco.

MuB se enlaza no especificamente al

DNA blanco y estimula la actividad de
recombinación de MuA en el complejo
de transposición.
 L3 R3

22 bp
Considerar factores del consensus MuA also
binds to
huesped en el proceso de internal
site-
transposición needed for
complex
L2 R2
formation
but not
L1 R1 strand
cleavage

El complejo de transferencia
de cadena puede ser blanco
cuts in transfers
para replicación (transposición trans in trans
replicativa) o para reparación
(transposición no replicativa)
 additional nicking

common structure

Non-replicative
Breakage & reunion

Replicative
 Integrones

No se muestran genes de la transposición

Estructura de un integron
Intl: gen integrasa reconoce sitios 59be
en genes de resistencia.
Attl: secuencia que une genes de
resistencia por recombinación
Pant: promotor de genes de resistencia
P2:: promotor mas fuerte

Integron de clase I:
5
-CS: secuencia conservada 5

3
-CS: secuencia conservada 3

Integración de un gen de resistencia
Integron Compuesto
 Transposición en la Naturaleza
• Transposones pueden modular la expresión
genética
• Contribuyen a la plasticidad génica
– Tienen una clara influencia sobre la estructura de los
genomas durante la evolución.
• Juegan un rol principal en la adaptación
bacteriana
– Contienen con frecuencia genes de resistencia a
antibióticos.
– La Transposición junto con la conjugación lideran la
transferencia de la resistencia a antibióticos de una
bacteria tipo a otra.
Utilización de los
transposones IS
Secuencia de inserción
IS6110 del complejo
Micobacterium tuberculosis
tiene 1361 pb.

En un inicio se uso para

detectar Mtb en muestras
clínicas por amplificación
del DNA.

Marcadores moleculares
mediante el método
IS6110-RFLP de IS6110
de Mtb para diferenciar
cepas.
IS6110-RFLP (restriction
fragment length
polymorphism) del gen
IS6110 contribuyo en
estudios epidemiológicos.

Pero fue desplazado por

MIRU-VNTRs
(Mycobacterial
interspersed repetitive
Units-Variable Number
tandem) considerado en la
actualidad como referencia
en estudios
epidemiológicos
Facultad de Ciencias Biológicas-UNMSM
«El pasaje de la vida», hace mas de una
década era poco transitada …

GRACIAS POR SU ATENCIÓN