UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICA

ESCUELA PROFESIONAL DE QUÍMICA

Alumno: Maihuiri Vargas, Hugo Gerson

Asignatura: Laboratorio de Bioquímica
Profesor: Santa Cruz Carpio, Carlos
Reporte: Determinación de V 0 de la enzima amilasa

“El Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

28 de mayo del 2018
Contenido

OBJETIVO...................................................................................................................................................................3

INTRODUCCIÓN.........................................................................................................................................................3

LA FUNCIÓN DE LA AMILASA.....................................................................................................................................3

CURVA ESTÁNDAR DE ALMIDÓN.......................................................................................................................................3

DETERMINACIÓN DE LA V 0 DE LA ENZIMA AMILASA SOBRE EL SUSTRATO DE ALMIDÓN.........................................................3
PREGUNTAS SOBRE EL LABORATORIO................................................................................................................................3

CONCLUSIÓN.............................................................................................................................................................3

REFERENCIAS.............................................................................................................................................................3

Objetivo

 Evaluar la actividad de la enzima amilasa.

 Determinar la velocidad inicial de la enzima amilasa.
 Determinar las concentraciones del sustrato a través del tiempo.

Introducción

En el laboratorio se determinó como primera parte la curva estándar de almidón utilizando el sustrato de almidón
yodo y como enzima a la amilasa que luego se leyó en un espectrofotómetro a una lectura de 640nm. Aquí utilizamos
los valores para sacar la pendiente que nos ayudara a sacar las concentraciones de los sustratos en cada uno de los 6
tubos que se utilizó en la reacción enzimática, luego se realizó otro procedimiento que nos daría como resultado la
velocidad inicial de la enzima amilasa.
La función de la amilasa

Es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón. La cual actúa
desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en
cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así porque se tiñen de rojo si se usa lugol).

gráfica 1 tubos para la determinación de la velocidad inicial.

Curva estándar de almidón

Datos y cálculos de la curva estándar de almidón

Concentración vs Absorbancia
0.3

0.25 f(x) = 0.52x + 0

R² = 1
0.2
Absorbancia

0.15

0.1

0.05

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Concentración

Concentración Absorbancia
 0 0
0.05 0.025
0.1 0.05
0.2 0.111
0.3 0.163
0.4 0.207
0.5 0.2585
pendiente
0.521040956
Tabla 1 datos de la curva estándar del almidón

gráfica 2 muestra la pendiente que será para hallar las concentraciones del sustrato.

Determinación de la V 0 de la enzima amilasa sobre el sustrato de almidón.

Las concentraciones se hallan con ayuda de la pendiente que es de 0.5210

Donde sabemos que la absorbancia tiene la definición de:

A=a.b.c

Donde; a.b=0.5210 que es la pendiente y por despeje se obtiene las diferentes concentraciones de los sustratos de
cada tubo.

Siendo los datos recolectados en la siguiente tabla 2.

Tubos Blanco tubo 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 tubo 6

Absorbancia 0 0.212 0.192 0.168 0.15 0.149 0.13
Tiempo 0 0 min 2 min 4 min 6 min 8 min 10 min
Concentration Sustrato 0 0.4069 0.3685 0.3225 0.22879 0.2859 0.2495
Tabla 2 sobre la evolución de la concentración de sustrato con el paso del tiempo.

Ahora se muestra una gráfica donde se relaciona el tiempo con la concentración de sustrato de almidón.
 Concentración de sustrato vs Tiempo
0.45
0.4
f(x) = - 0.02x + 0.4
0.35 R² = 0.96
0.3

concentración
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 2 4 6 8 10 12
Tiempo (min)

gráfica 3 muestra el descenso de la concentración del sustrato a través del tiempo.

Para hallar la velocidad inicial solo tenemos que sacar la tanα = V 0

El valor es de 0.015

Actividad de la amilasa sobre el almidón.

absorbancia1−absorbancia 2 0.212−0.192
Amilasa UA/dl = x1000 = x 1000=¿ 94.3396
absorbancia 1 0.212

Preguntas sobre el laboratorio

1) ¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?

La enzima amilasa degrada el almidón.

2) ¿Cómo está formado el almidón químicamente?

El producto formado por la polimerización de miles de monómeros de glucosa es el almidón.

3) ¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico?

Una enzima encargada de degradar el almidón.

4) ¿Cuál es el papel que desempeña el almidón en los animales?

Los polisacáridos que ingerimos son de dos tipos principales: almidón amilosa y amilo pectina, de vegetales y granos,
y glucógeno del tejido animal. Los polisacáridos de la dieta menos la celulosa se hidroliza en la boca mediante una
reacción catalizada por la enzima amilasa salival. La velocidad de la hidrólisis catalizada por esta enzima, disminuye
en el estómago por los iones H+1. La glucosa es el principal producto de la hidrólisis del almidón y glucógeno.
Alrededor de un tercio de la glucosa de la dieta a va los músculos esquelético y cardiaco para la producción y
almacenamiento de energía; cerca de otro tercio va al cerebro; el tercio restante va al hígado para almacenarse en
forma de glucógeno. La glucosa de la dieta que se distribuye en los tejidos se utiliza en la biosíntesis de otros
carbohidratos.

5) ¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón?

Porque si la amilasa no actuara sobre el almidón, el almidón no podría ser degradado en moléculas simples, la
glucosa, y no podría ser absorbida por las células.
Conclusión

 Se logró determinar la actividad enzimática siendo de un valor de 94.3396.

 Se logró encontrar la velocidad inicial de la enzima amilasa siendo de un valor de 0.015, que se halló en la
gráfica de concentración vs tiempo.
 La grafica muestra que la amilasa fue consumiendo el sustrato de almidón con el pasar el tiempo.

Referencias
 Química física para las ciencias de la vida - Gordon M. Barrow – editorial reverte – Barcelona – España – 2006
– paginas 370 – 379.
 Efecto de la concentración de almidones resistentes de la papa común (Solanum tuberosum) y criolla
(Solanum phureja) sobre la digestibilidad de nutrientes, energía metabolizable e integridad del tracto
gastrointestinal de pollos de engorde - Daniel Eduardo Rodríguez Aguilar - Universidad Nacional de Colombia
– 2013 – pagina – 24 – 26. http://bdigital.unal.edu.co/39435/1/780209.2013.pdf
 -Amilasa 405 cinética unitest y AA - Método cinético a 405 nm para la determinación de amilasa en suero,
plasma y orina – Rosario – Argentina – 2000 paginas 1 – 2. http://www.wiener-
lab.com/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/amilasa405cinetica_unitest_aa_sp.pdf