Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ingeniería
Escuela de Química
Laboratorio de Bioquímica
Ingeniero: Erwin Ortiz

Propiedades Químicas de los Aminoácidos

SECCIÒN PONDERACIÒN NOTA

C. Introducción 10
D. Objetivos 5
E. Marco Teórico 5
F. Marco Metodológico 5
G. Resultados 15
H. Pruebas de Identificación
I. Interpretación de resultados 30
J. Conclusiones 15
K. Observaciones 5
L. Referencias bibliográficas 5
M. Apéndice
M. Fotografías

Daniel Esteban Argueta Reyes

Guatemala, 24 de Agosto del 2015
Fecha de revisión:_______________ Nota:________ Firma: _________________
 B. INDICE

INTRODUCCIÓN------------------------------------------------------------------------ 2

OBJETIVOS------------------------------------------------------------------------------- 3

MARCO TEÓRICO---------------------------------------------------------------------- 4

MARCO METODOLÓGICO ---------------------------------------------------------- 11

RESULTADOS---------------------------------------------------------------------------- 14

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS-------------------------------------------- 19

COLCUSIONES -------------------------------------------------------------------------- 21

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS-------------------------------------------------- 22

APÉNDICE---------------------------------------------------------------------------------- 23

FOTOGRAFÍAS---------------------------------------------------------------------------- 24

1
 C. INTRODUCCIÓN

En la práctica se realizó siete pruebas de identificación para identificar las

propiedades químicas de los aminoácidos. Las cuales corresponden a la prueba
de Nitroprusiato Sódico, Molish, Azufre reducido, Elrich Diazo, Sakaguchi,
Hoopkins-Cole y Xantoproteica.

Para la realización de las pruebas se empleó tubos de ensayo, y se recopiló la

información por medio de fotografías del proceso, para comparar los cambios
antes y después de la adición de ciertos compuestos. Con ello se distinguieron las
características de cada prueba y los cambios de coloración y fase.

Después de un análisis con los datos teóricos correspondientes se

determinaron algunas propiedades químicas de los aminoácidos; glicina,
asparagina, lisina, arginina, histidina, fenilalanina, cistina, contenidos en frascos de
diversos compuestos.

La práctica se realizó bajo las condiciones de 22.6 0C y 0.84 atm, en la Ciudad

de Guatemala.

2
 D. OBJETIVOS

Objetivo General:

1. Determinar las propiedades químicas de los aminoácidos mediante pruebas

de identificación.

Objetivos Específicos:

1. Caracterizar propiedades de aminoácidos por la prueba del nitroprusiato de

sódico.

2. Determinar las propiedades de aminoácidos por medio de la prueba de

Molish.

3. Caracterizar propiedades de aminoácidos por medio de la prueba de azufre

reducido.

4. Caracterizar propiedades de aminoácidos por medio de la prueba de Elrich

Diazo.

5. Caracterizar propiedades de aminoácidos por medio de la prueba de

Sakaguchi.

6. Caracterizar propiedades de aminoácidos por medio de la prueba de

Hoopkings-Cole.

7. Caracterizar propiedades de aminoácidos por medio de la prueba

xantoproteica.

3
 E. MARCO TEÓRICO

E.1 Información general de los Aminoácidos

Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH). Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son
aquellos que forman parte de las proteínas. Dos aminoácidos se combinan en una
reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro,
liberándose una molécula de agua y formando un enlace amida que se
denomina enlace peptídico; estos dos "residuos" de aminoácido forman
un dipéptido. Si se une un tercer aminoácido se forma un tripéptido y así,
sucesivamente, hasta formar un polipéptido. Esta reacción tiene lugar de manera
natural dentro de las células, en los ribosomas.

Todos los aminoácidos componentes de las proteínas son L-alfa-aminoácidos.

Esto significa que el grupo amino está unido al carbono contiguo al grupo carboxilo
(carbono alfa) o, dicho de otro modo, que tanto el carboxilo como el amino están
unidos al mismo carbono; además, a este carbono alfa se unen un hidrógeno y
una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de estructura
variable, que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los
diferentes aminoácidos. Existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos
de aminoácidos diferentes, pero sólo 22 (los dos últimos fueron descubiertos en
los años 1986 -selenocisteína- y 2002 -pirrolisina-) forman parte de las proteínas y
tienen codones específicos en el código genético.

La unión de varios aminoácidos da lugar a cadenas llamadas péptidos o

polipéptidos, que se denominan proteínas cuando la cadena polipeptídica supera
una cierta longitud (entre 50 y 100 residuos aminoácidos, dependiendo de los
autores) o lamasa molecular total supera las 5000 uma y, especialmente, cuando
tienen una estructura tridimensional estable definida.

4
E.2 Estructura general
La estructura general de un alfa-aminoácido se establece por la presencia de un
carbono central (alfa) unido a un grupo carboxilo (rojo en la figura), un grupo
amino (verde), un hidrógeno (en negro) y la cadena lateral (azul):

"R" representa la cadena lateral', específica para cada aminoácido. Tanto el

carboxilo como el amino son grupos funcionales susceptibles de ionización
dependiendo de los cambios de pH, por eso ningún aminoácido en disolución se
encuentra realmente en la forma representada en la figura, sino que se
encuentra ionizado.

A pH bajo (ácido), los aminoácidos se encuentran mayoritariamente en su

forma catiónica (con carga positiva), mientras que a pH alto (básico) se
encuentran en su forma aniónica (con carga negativa). Para valores de pH
intermedios, como los propios de los medios biológicos, los aminoácidos se
encuentran habitualmente en una forma de ion dipolar o zwitterión (con un grupo
catiónico y otro aniónico).

E.3 Aminoácidos Esenciales y no Esenciales

A los aminoácidos que deben ser captados como parte de los alimentos se los
llama esenciales; la carencia de estos aminoácidos en la dieta limita el desarrollo
del organismo, ya que no es posible reponer las células de los tejidos que mueren
o crear tejidos nuevos, en el caso del crecimiento.

5
Para el ser humano, los aminoácidos esenciales son:
 Valina (Val, V)
 Leucina (Leu, L)
 Treonina (Thr, T)
 Lisina (Lys, K)
 Triptófano (Trp, W)
 Histidina (His, H) *
 Fenilalanina (Phe, F)
 Isoleucina (Ile, I)
 Arginina (Arg, R) *
 Metionina (Met, M)

A los aminoácidos que pueden sintetizarse en el propio organismo se los conoce

como no esenciales y son:
 Alanina (Ala, A)
 Prolina (Pro, P)
 Glicina (Gly, G)
 Serina (Ser, S)
 Cisteína (Cys, C) **
 Asparagina (Asn, N)
 Glutamina (Gln, Q)
 Tirosina (Tyr, Y) **
 Ácido aspártico (Asp, D)
 Ácido glutámico (Glu, E)

Estas clasificaciones varían según la especie e incluso, para algunos aminoácidos,

según los autores. Se han aislado cepas de bacterias con requerimientos
diferentes de cada tipo de aminoácido.

6
E.4 Reacciones de los Aminoácidos
Los aminoácidos sufren en los seres vivos tres reacciones principales que se
inician cuando un aminoácido se une con el fosfato de piridoxal formando una
base de Schiff o aldimina. De ahí en adelante la transformación depende de las
enzimas, que tienen en común el uso del fosfato de piridoxal como coenzima. Las
reacciones que se desencadenan pueden ser:

 La transaminación, que necesita la participación de un α-cetoácido;

 La descarboxilación;
 La racemización, que es la conversión de un compuesto L en D, o
viceversa. Aunque en las proteínas los aminoácidos están presentes
únicamente en la configuración L, en las bacterias podemos encontrar
algunos D-aminoácidos formando parte de péptidos pequeños.

E.4.1 Reacciones de las Pruebas

REACCIÓN DE NITROPRUSIATO SODICO - CISTINA

7
REACCIÓN DE MOLISH - CISTINA

REACCIÓN DE AZUFRE REDUCIDO

8
REACCIÓN DE ELRICH DIAZO

REACCIÓN DE SAKAGUCHI

REACCIÓN DE HOOPKINGS-COLE

9
REACCIÓN XANTOPROTEICA

10
 F. MARCO METODOLÓGICO

F.1 Algoritmo de Procedimiento

F.1.1 Prueba de Nitropusiato Sódico

1. Se rotularon los tubos con los nombres de los aminoácidos.
2.

F.1.2 Prueba de Molisch

1.- Se agregó 1mL de agua destilada a tubo de ensayo.
2.- Se agregó 1mL de producto obtenido.
3.- Se anotaron resultados.

F.1.3 Prueba de Azufre Reducido

1.- Se colocaron 0,5mL de producto en un tubo de ensayo.
2.- Se agregaron 1,5mL de reactivo de Tollens.
3.- Se calentó en baño maría por 5 min.
4.- Se anotaron los resultados.

F.1.4 Prueba de Elrich Diazo

1.- Se colocaron 0,5mL de producto en un tubo de ensayo.
2.- Se agregó 1mL de reactivo de Fehling A.
3.- Se agregó 1mL de reactivo de Fehling B.
4.- Se agitó la mezcla.
5.- Se anotaron las observaciones.

F.1.5 Prueba de Sakaguchi

1.- Se agregaron 2mL de reactivo de Schiff en un tubo de ensayo.
2.- Se agregaron 0,5mL de producto.
3.- Se anotaron las observaciones.

11
F.1.6 Prueba de Ninhidrina
1.- Se colocó 1mL de producto en un tubo de ensayo.
2.- Se agregó 1mL de tintura de yodo.
3.- Se agitó la mezcla.
4.- Se anotaron resultados.

F.1.7 Prueba de Hoopkins-Cole

1.- Se agregaron 350mL de glicerina (C3H8O3) en un beacker de 500mL.
2.- Se colocó el beacker en un soporte universal.
3.- Se sujetó un tubo capilar a un termómetro.
4.- Se introdujo el termómetro en el tubo de ensayo con 2mL de producto.
5.- Se introdujo el tubo de ensayo en el beacker con glicerina.
6.- Se calentó la glicerina.
7.- Se observó el rosario de burbujas en el tubo capilar.
8.- Se anotó el punto de ebullición.

12
F.2 Diagrama de Flujo

Inicio
Agregar 2mL de
Añadir aminoácido
reactivos, Tubos de ensayo
indicadores o
soluciones

Tubo 1 Tubo 2 Añadir reactivos

Añadir especificos
reactivos
específicos de
prueba Baño María

No Calentar por 10 min

Si
¿Reaccionó
inmediatamente
?
No

¿Reaccionó por
completo?

Si

Anotar observaciones

Tomar fotografías

Fin

13
 G. RESULTADOS

Tabla I. Resumen de conclusiones de prueba de identificación.

No. Prueba Conclusión
1 Nitroprusiato sódico - Cistina Positiva
2 Molish - Histidina Positiva
3 Azufre reducido - Cistina Positiva
O
4 Elrich Diazo - Histidina Positiva
5 Elrich Diazo - Fenilalanina Positiva
6 Sakaguchi – Lisina Positiva
7 Sakaguchi – Asparagina Positiva
8 Sakaguchi – Arginina Positiva
9 Hoopkins-Cole - Hidrolizado Positiva
10 Xantoproteica - Hidrolizado Positiva
Fuente: Datos originales.

Tabla II. Prueba de nitroprusiato sódico - Cistina

Reacción:

Observación: Se observó un cambio de coloración de incoloro a un color

amarillo intenso de una sola fase.
Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

14
 Tabla III. Prueba de Molish - Cistina
Reacción:

Observación: Al inicio se tenía una sola fase de coloración

amarillenta, posteriormente se formaron dos fases una
superior de color amarillo y la parte inferior de color
verde.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

15
 Tabla IV. Prueba de azufre reducido - Cistina
Reacción:

Observación: Al inicio se tenía una sola fase incolora, después de un

calentamiento de 6 min a una temperatura de 58.5 0C
se observó la formación de un precipitado de color
gris.
Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

Tabla V. Prueba de Elrich Diazo - Histidina

Reacción:

Observación: Se observó un cambio de coloración de amarillo

intenso a naranja.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

16
 Tabla VI. Prueba de Elrich Diazo - Fenilalanina
Observación: Se observó un cambio de incoloro a un amarillo
intenso con una ligera turbidez y al agregarle el
amonio se formó un precipitado blanco.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

Tabla VII. Prueba de Sakaguchi - Lisina

Observación: Se observó un cambio de coloración de incoloro a
rojizo-marrón.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

Tabla VIII. Prueba de Sakaguchi - Asparagina

Observación: Se observó un cambio de coloración de incoloro a
ligeramente verde amarillento.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

Tabla IX. Prueba de Sakaguchi - Arginina

Reacción:

Observación: Se observó un cambio de coloración de incolora a verde

musgo.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

17
 Tabla X. Prueba de Hoopkins-Cole – Pastilla disuelta (Hidrolizado)
Reacción:

Observación: Se observó una separación de fases una incolora y otra

blancuzca.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

Tabla XI. Prueba Xantoproteica – Pastilla disuelta (Hidrolizado)

Reacción:

Observación: Se observó un cambio de coloración de incoloro a amarrillo,

junto a un precipitado blanco y al aplicarle calor se disolvió.

Conclusión: Positiva
Fuente: Datos originales.

18
 H. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Prueba de Nitroprusiato de Sodio:

En esta prueba se trabajó con cisteína, los reactivos necesarios para la prueba de
nitroprusiato o test de Brand son el nitroprusiato de sodio y el cianuro de sodio. La
reacción depende de la molécula que se pretende identificar, ya sea que esté libre
o formando un compuesto. En el caso de la cistina, al añadir los reactivos de la
prueba de nitroprusiato ocurre una reacción que se puede explicar en dos etapas:
en la primera, durante los diez minutos iniciales, el cianuro reduce la cistina, de
esta manera se rompe el enlace disulfuro y se forman dos aminoácidos de cisteína
que tienen grupos sulfhidrilo libres. En la segunda etapa, el nitroprusiato de sodio
interacciona con la cisteína, produciendo un compuesto soluble de color rojo-
púrpura. Esto se corrobora con las observaciones experimentales realizadas.

Prueba de Molish:

En este caso la prueba de Molish detecta los grupos carboxílicos de los

aminoácidos en este caso de la cistina, debido a ello ocurre un cambio de
coloración.

Prueba de azufre reducido:

De acuerdo a las observaciones se formó un precipitado gris, esto se explica ya

que los Aminoácidos azufrados como metionina, cisteína y cistina se reconocen
por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro
que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.

Prueba de Elrich-Diazo

En este caso se analizaron los aminoácidos; histidina y fenilalanina. La presencia

de anillos aromáticos fenólicos de los aminoácidos o nitrogenados en la cadena
lateral de los aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido
sulfanílico y nitrito de Sodio por formación de sales de Diazonio fuertemente
coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o
formando péptidos y proteínas. Esto se corrobora al observar los cambios de
coloración de las muestras.

Prueba de Sakaguchi:

Para esta prueba se trabajó con los aminoácidos; arginina, asparagina y lisina. En
este caso teóricamente los cambios de coloración observados se deben a que el
19
grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con
soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rosados o rojos.

Prueba Hopkins cole:

Los derivados indol dan productos de condensación cuando se tratan con

aldehídos aromáticos en presencia de ácido sulfúrico o clorhídrico. Los
aminoácidos de la pastillas disuelta, alguno contiene un grupo indol y por eso la
reacción es específica. El resultado positivo de esta prueba se puede evidenciar
con el anillo indolico que degrada el aminoácido a Indol produciendo compuestos
de color amarrillo-anaranjado. Los resultados obtenidos para esta prueba
resultado son correctos ya que en la muestra hay presencia de este, todas las
demás muestras están libres en su estructura de este aminoácido.

Prueba Xantoproteica:

Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido

nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo
cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y
Triptófano. Las pastillas utilizada contenía algunos de estos aminoácidos por lo
cual el resultado positivo concuerda con la teoría.

20
 I. CONCLUSIONES

1. Se determinó que la cistina se reduce con los grupos cianuros.

2. Se determinó que los grupos carboxílicos de la cistina reaccionan por medio

de la prueba de Molish.

3. Se determinó que la cistina rompe lo enlaces sulfuros y precipita sulfuro de

plomo por medio de la aplicación de la prueba de azufre reducido.

4. Se determinó que por medio de la aplicación de la prueba de Elrich Diazo a

compuestos fenólicos o aromáticos se producen sales de diazon.

5. Se determinó que la prueba de Sakaguchi provoca una coloración

característica dependiendo el aminoácido.

6. Se determinó que hay aminoácidos en la pastilla, los cuales contiene en su

estructura el grupo indol. Grupo característico que identifica la prueba de
Hoopkins-Cole.

7. Se determinó que los aminoácidos de la pastilla sufren nitración por medio

de la prueba xantoproteica.

21
 J. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. CAREY, Francis A. “Química Orgánica”. 6ta. Edición. Editorial McGraw-Hill.

México, 2003, Pág. 708-730. ISBN: 9789701056103. Consultado el
10/04/2015.

2. Devlin, T. M. 2004. Bioquímica, 4ª edición. Reverté, Barcelona. ISBN 84-

291-7208-4.

3. KOTZ, John C. TREICHEL, Paul M. “Química y Reactividad Química” Sexta

edición. Thomson. México, 2006. Págs. 170-173. ISBN: 970-686-552-7.
Consultado el 10/04/2015.

4. P. Roca, J. Oliver y A.M. Rodríguez (2003) Bioquímica. Técnicas y

Métodos. Editorial Hélice.

22
 K. APÉNDICE

a) Datos originales.

Hoja de datos originales adjunta al reporte.

b) Muestra de cálculo

Ecuación 1. Molaridad

Donde:

M = Molaridad
n = Moles de soluto
L = Litros de disolución

Ejemplo: ¿Cuál es la molaridad de una solución de 100g de HCl, en 200 ml

de H2O?

Número de Moles es igual a los 100 g / PM (para el caso del HCl, PM = 36

g/mol)
Número de Moles =2.77moles
M(molaridad)=2.77/0.2
M = 13.85M

c) Análisis de Error

La práctica no presentó datos cuantitativos por lo que no se realizó un

análisis de error correspondiente.

d) Datos calculados.

Datos correspondientes a las pruebas de identificación relizadas.

23
 L. FOTOGRAFÍAS

Prueba de Hapkin Cole

Prueba de Sakaguchi

Prueba Xantoproteica

Prueba de Nitropusiato Sódico

24
Prueba de Azufre Reducido

Prueba de Molisch

Prueba de Erich Diazo

25