Revista Científica Agropecuaria 6: 17-23 (2002)

© 2002 Facultad Ciencias Agropecuarias - UNER

MICROPROPAGACIÓN DE PLANTAS ELITE DE ESPÁRRAGO

Pablo D. Asprelli1, Vanina P. Cravero1, Ileana Gatti1, Enrique Luis Cointry1

RESUMEN El espárrago es una especie perenne y dioica en la cual se han desarrollado

distintos tipos de híbridos. El cultivo in vitro de meristemas y la
micropropagación son métodos rápidos y eficientes para multiplicar clones de
genotipos que al ser cruzados generen híbridos con características agronómicas
superiores y homogéneas. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la
capacidad de regeneración in vitro de cuatro plantas estaminadas y seis
pistiladas progenitoras de híbridos con altos rendimientos en dos sistemas
productivos: espárrago blanco y verde. Se determinó un comportamiento
diferencial in vitro de los genotipos para los porcentajes de contaminación de
los meristemas sembrados (MC), desarrollo de vástago (DV) y vástagos
enraizados (EN) y para el número promedio de plántulas por explanto (PP).
Los meristemas de materiales manejados como blanco mostraron valores
mayores de MC (43,3 %). No se manifestó interacción genotipo-manejo para
MC y sí para DV y EN (G=7,51 y G=13,1). PP estuvo condicionado por el tipo
de manejo y por el sexo de los materiales de los cuales se extrajeron los
meristemas. El cultivo in vitro permite adecuar las condiciones de
multiplicación en función de la variabilidad de los materiales y de las
interacciones existentes con los sistemas de producción.

Palabras clave: Asparagus officinalis L. - híbridos selectos - progenitores -

sistemas de producción - micropropagación

SUMMARY Asparagus elite plants micropropagation

Asparagus is a perennial dioecious crop in which different types of hybrids
have been developed. In vitro cultures of meristems is an efficient method that
offers the possibility to rapidly replicate elite hybrids parental plants. The
objective of the present work was to evaluate the in vitro regeneration
capability of four staminated and six pistillated parental hybrid plants with
high yielding in two productive systems, the green and white asparagus
production,. A differential response was observed among genotypes for
percentage of contaminated meristems (MC), shoot development (DV), rooted
shoots (EN) and mean number of platelets per cultured meristem (PP).
Meristems from white spears showed higher contaminated meristems (43.3%)
than those from green spears. Genotype x type of production (white – green)
interaction was only significant for shoot development DV and rooted shoots
EN (G=7.51, 13.1 respectively). Gender of parental plant and type of
production conditioned PP. Genetic variability and type of production should
be considered to adequate best multiplication conditions of in vitro culture in
this specie.
Key words: Asparagus officinalis L. - selected hybrids - parentals - production
systems - micropropagation
__________
1
Cátedra de Genética. Facultad de Ciencias Agrarias. Universidad Nacional de Rosario. Campo Experimental
J. F. Villarino. CC 14 - (S2125ZAA) Zavalla. Santa Fe. Argentina.
 Pablo D. Asprelli et al.
Introducción
El género Asparagus, perteneciente a la familia de
las Liliáceas, comprende casi 100 especies
originarias del sur de Europa, Asia y África
(Reuther, 1992), algunas de ellas con valor
ornamental y sólo una con valor hortícola: el
espárrago (Asparagus officinalis L.).
El cultivo comercial de esta especie, perenne y
dioica, se inicia con la siembra de semillas en
almácigo, para obtener “arañas” (órgano de
reserva) de un año de edad que serán
transplantadas al lugar definitivo durante el reposo
invernal. En el transcurso de la primavera las
yemas de los órganos de reserva se desarrollan
dando origen a la porción comestible o “turión”.
Existen dos sistemas de cultivo: con formación de
camellones (alomado) para la producción de
turiones blancos y sin alomar para turiones verdes.
Durante muchos años se intentó incrementar la
uniformidad del cultivo efectuando la plantación a
partir de porciones de arañas de plantas selectas
obtenidas por división de las mismas. Sin embargo
no se obtuvo el resultado deseado debido a la
susceptibilidad al ataque de hongos y bacterias,
siendo a la vez una práctica lenta cuando se
requiere un gran número de plantas. Por tales
motivos sólo es posible producir dos o tres plantas
por año a partir de cada planta madre (Takatori, et
al., 1968; Yang y Clore 1973).
Por tales motivos, las técnicas de cultivo in
vitro resultan de interés tanto por la posibilidad de
incrementar la tasa de multiplicación, como para
evitar la transmisión de enfermedades
normalmente portadas por la araña. La utilización
de estas técnicas está subordinada a la puesta a
punto de los procedimientos adecuados,
especialmente en lo concerniente a la regeneración
y al origen de los explantos ya que el sistema de
cultivo podría influir en el comportamiento de los
mismos.
En lo referente a los medios de cultivo
utilizados en general, contienen auxinas y
citocininas para controlar la regeneración de tallos
y raíces ya que la respuesta organogénica varía en
función de la suplementación de los medios
basales (Ghosh y Sen, 1992). Así, el agregado de
ancymidol provoca la inhibición de la síntesis de
giberelinas (Coolbaugh y Hamilton, 1976), las
18
cuales inhiben la formación de vástagos y raíces
(Brian et al., 1960; Murashige, 1964; Schraudolp
y Reinert, 1959) y promueven la formación de
callos (Murashige, 1964; Schraudolp y Reinert,
1959).
El presente trabajo tiene como objetivo
determinar la capacidad de regeneración in vitro
de los progenitores de híbridos selectos de manera
de establecer el sistema de cultivo más adecuado
para obtener el material inicial y así lograr una
óptima regeneración.
Materiales y métodos
Como material experimental se utilizaron cuatro
plantas estaminadas (357, 710, 777 y 861) y seis
pistiladas (28, 163, 221, 226, 473 y 859)
provenientes de ambos sistemas productivos a
partir de los cuales se obtuvieron los meristemas
que fueron multiplicados in vitro (Fig. 1). Esas
plantas son los progenitores de siete híbridos
selectos en ensayos previos derivados del
Programa de Mejoramiento de Espárrago que se
desarrolla en la Facultad de Ciencias Agrarias de
la UNR ubicada en la localidad de Zavalla, Santa
Fe.
De cada uno de los progenitores se extrajeron
cinco turiones de 10 cm de longitud los cuales
fueron desinfectados sumergiéndolos en una
solución de etanol 70 % durante cinco minutos y
en hipoclorito de sodio al 3 % de cloro activo por
igual período de tiempo, efectuando posteriores
lavados con agua bidestilada estéril bajo cámara
de flujo laminar horizontal. De los turiones
desinfectados se obtuvieron los meristemas que
constituyeron los explantos iniciales.
Se sembraron 20 meristemas por genotipo y
sistema de cultivo en tubos de vidrio de base plana
de 25 mm de diámetro y 12 cm de altura,
conteniendo 15 ml de medio de cultivo formulado
con los macroelementos, microelementos y
vitaminas de Murashige y Skoog (1962)
suplementado con 2,5 mg/l de cinetina + 2,5 mg/l
de ácido naftalen acético + 5 mg/l de ancymidol
como inhibidor de la síntesis de giberelinas (Chin,
1982). La incubación se efectuó en cámara de
cultivo con una intensidad lumínica de 50 µmol m-
2 -1
s con un fotoperíodo 16 h a una temperatura de
25 ± 1 ºC. Se efectuaron tres repiques a intervalos
constantes de 40 días, de acuerdo a un diseño
Revista Científica Agropecuaria 6, 2002
 Micropropagación de plantas elite de espárrago

completamente aleatorizado, seccionando los nuevo explanto en tubos con medio de cultivo
vástagos a nivel de entrenudos y colocando cada fresco.

a b

c d

Figura 1. a- Diferentes estadíos de desarrollo de los vástagos b- Detalle del desarrollo radicular c- Plántulas en
condiciones de ser transferidas a tierra d- Aclimatación de las plantas bajo invernadero

Fueron evaluadas por genotipo y por tipo de
manejo las siguientes variables: porcentaje de
contaminación de los meristemas desde la siembra
hasta el primer repique (MC), porcentaje de
desarrollo de vástago desde la siembra hasta el
primer repique (DV), porcentaje de vástagos
enraizados (EN) y el número promedio de
plántulas por explanto (PP) producidas en un
período de 4 meses. El análisis de las tres primeras
variables se efectuó por medio de la prueba no
paramétrica G (Sokal y Rohlf, 1967)
comparándose los efectos de los sistemas de
producción sobre los genotipos mediante la prueba
de ji-cuadrado (Sokal y Rohlf, 1967). Para la
variable PP se realizó un análisis de variancia
utilizando el programa estadístico SAS (1982) y se
obtuvieron los promedios por genotipo, por sexo y
por sistema de manejo.
Resultados y discusión
En el Cuadro 1 se muestran los valores de los
porcentajes de contaminación (MC), de desarrollo
de vástago (DV) y de enraizamiento (EN). La
prueba de G permitió establecer un
comportamiento diferencial de los genotipos con
respecto a las variables evaluadas (Cuadro 2).

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 Pablo D. Asprelli et al.

Cuadro 1. Porcentajes de meristemas contaminados (MC), de vástagos desarrollados (DV) y de enraizamiento (EN)
por genotipo y sistema de producción

MC (%) DV (%) EN (%)

Manejo Manejo Manejo
Genotipos Blanco Verde χ2 Blanco Verde χ2 Blanco Verde χ2
Estaminados

357 0,0 0,0 ns 14,3 18,2 ns 12,5 0,0 ns

710 53,8 60,0 ns 16,7 0,0 ns 0,0 0,0 ns
777 33,3 40,0 ns 62,5 66,7 ns 41,7 0,0 *
861 50,0 41,7 ns 16,7 28,6 ns 12,5 0,0 ns
28 --- 36,4 --- --- 28,6 --- --- 0,0 ---
Pistilados

163 36,8 16,7 ns 16,7 10,0 ns 0,0 0,0 ns

221 12,5 --- --- 0,0 --- --- 0,0 --- ---
226 58,3 16,7 * 80,0 10,0 ** 16,7 22,2 ns
473 10,0 27,8 ns 22,2 7,7 ns 23,1 0,0 ns
859 100,0 8,3 *** 0,0 9,1 ns 0,0 22,2 ns

(---) No se obtuvieron meristemas; ns=no significativo; (*) significativo al 5%; (**) significativo al 1%; (***)
significativo al 5 °/°°.

Cuadro 2. Valores de la prueba G para los porcentajes de meristemas contaminados (MC), de vástagos
desarrollados (DV) y de enraizamiento (EN)

Hipótesis Evaluada g.l MC DV EN

*** *
Igualdad entre genotipos 9 29,53 17,43 21,61 **
*** *
entre plantas estaminadas 3 19,86 8,58 6,79 ns
entre plantas pistiladas 5 9,64 ns 6,47 ns 14,79 *
entre sexos 1 0,03 ns 2,38 ns 0,02 ns
Igualdad entre manejos 1 8,18 *** 2,18 ns 2,84 ns
Interacción genotipo x manejo 9 27,02 *** 7,51 ns 13,13 ns
ns=no significativo; (*) significativo al 5%; (**) significativo al 1%; (***) significativo al 5 °/°°.

Para MC se determinaron diferencias altamente provenientes de este tipo de manejo, de manera de

significativas entre los tipos de manejo (G=8,18;
p<0,005) y entre genotipos estaminados (G=19,86;
p<0,005) no manifestándose interacción genotipo-
manejo. Los meristemas provenientes de
materiales manejados como blanco tendrían mayor
posibilidad de contaminarse debido a que. entre el
tallo y la escama que protege al meristema,
podrían quedar restos de tierra arrastrados durante
la emergencia del turión, acarreando bacterias o
esporas junto con el meristema a sembrar. Si bien
este comportamiento solo resultó significativo
para los genotipos 226 y 859, convendría
intensificar las condiciones de desinfección al
iniciar el cultivo in vitro con meristemas
reducir las pérdidas por contaminación.
Los meristemas que no sufrieron
contaminación (aproximadamente el 65% del total
sembrado) desarrollaron uno o más vástagos de
los cuales se obtuvieron uno o más explantos para
ser repicados.
Para DV y EN se encontraron interacciones
entre el genotipo y el tipo de manejo del cultivo
(G=7,51 y G=13,13) por ser no significativas las
hipótesis evaluadas. Para la variable DV el
genotipo pistilado 226 mostró un mayor
porcentaje de vástagos desarrollados cuando los
meristemas se obtuvieron de turiones provenientes

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 Micropropagación de plantas elite de espárrago
de un sistema de producción de espárrago blanco
(Cuadro 1) mientras que el resto de los genotipos
no modificó su comportamiento al cambiar el
sistema de producción.
La existencia de variabilidad genética para el
desarrollo in vitro podría ser explicada por
diferencias en el contenido hormonal endógeno de
cada clon, ya que los que poseen mayores tasas de
desarrollo contienen niveles más altos de
sustancias inhibitorias del ácido giberélico (Chin,
et al., 1990) haciendo que el catabolismo y
anabolismo de ácidos orgánicos, aminoácidos
libres y carbohidratos sea más rápido. La
Valores
Promedios
10
6 Blanco
0
357 710 777 861 28
Figura 2. Número promedio de plántulas desarrolladas por meristema de cada genotipo para ambos sistemas de
manejo
En espárrago, la formación in vitro de raíces
mediada por auxinas está relacionada con la
ruptura de la dominancia apical y es esencial para
el desarrollo de la araña con raíces adventicias y
de reserva ya que determinan la supervivencia de
las plántulas luego de transferirlas a tierra (Doré,
1990). Si bien los meristemas de los genotipos
estaminados provenientes de un sistema de
producción de espárrago blanco mostraron en
general un comportamiento superior para EN, esta
diferencia sólo fue significativa para el genotipo
777 (Cuadro 1).
21
acumulación de compuestos poliméricos conlleva
a la pérdida del potencial de regeneración y
desarrollo (Reuther, 1990).
Para la variable PP las plantas estaminadas
provenientes de materiales blancos presentaron
valores superiores, mientras que los genotipos
pistilados se comportaron de forma inversa (Fig.
2), por lo que el potencial de propagación estuvo
condicionado por la interacción entre el tipo de
manejo y el sexo de los materiales de los cuales se
extrajeron los meristemas (F=5,07; p<0,05).
Verde
163 221 226 473 859
Genotipos
Los genotipos pistilados mostraron diferentes
tendencias en función del sistema de producción.
Aunque las diferencias estadísticas fueron no
significativas (Cuadro 1), el progenitor 473 mostró
mayor valor de EN cuando los meristemas fueron
obtenidos de un sistema de producción de
espárrago blanco, mientras que el progenitor 859
mostró un comportamiento inverso. El progenitor
pistilado 226 no mostró tendencias diferenciales
según el manejo.
Para ninguna de las variables analizadas
existieron diferencias significativas entre ambos
sexos. Una constante característica en espárrago
Revista Científica Agropecuaria 6, 2002
 Pablo D. Asprelli et al.
es que la capacidad de micropropagación no está
relacionada con el sexo pero sí con el genotipo,
observándose en el primer subcultivo diferencias
respecto a la cantidad de explantos por material
que desarrolla vástagos, la cantidad y el diámetro
de los brotes, la cantidad de microcortes y de
fragmentos potenciales (Thévenin y Doré, 1976)
como así también diferencias en la formación de
raíces inducidas por el ancymidol (Gross, 1987).
El ancymidol reduce el período de tiempo
necesario para producir plántulas. Yang y Clore
(1973) lograron tener plántulas repicables en 20
semanas utilizando un medio de cultivo sin
ancymidol. Chin (1982) logró reducir ese período
a 8 semanas incorporando ancymidol al medio de
cultivo, logrando asimismo el desarrollo de tallos
y raíces más vigorosas y suprimiendo la formación
de callos. En el presente trabajo, se obtuvieron
vástagos en condiciones de ser repicados a las seis
semanas posteriores a la siembra, por lo que la
incorporación de ancymidol al medio de cultivo
resultó satisfactoria.
Asimismo, mientras que a través de las técnicas
convencionales de clonación por división de la
araña sólo pueden obtenerse dos o tres plantas por
año (Takatori et al., 1968), esta técnica de cultivo
in vitro de meristemas permitiría obtener entre 25
y 30 plantas en el mismo período de tiempo. Por
este motivo, resulta un método rápido y eficiente
para obtener clones de aquellos genotipos que al
ser cruzados generen híbridos con características
agronómicas superiores y homogéneas (Cointry et
al., 1993), permitiendo adecuar las condiciones de
multiplicación en función de la variabilidad
observada entre los materiales y de las
interacciones existentes con los sistemas de
producción.
Conclusiones
Los meristemas provenientes de materiales
manejados como blanco mostraron en el primer
subcultivo una leve superioridad, aunque no
significativa, para el desarrollo de vástagos y para
el enraizamiento. Además, los genotipos
respondieron de manera diferente tanto a la
inducción del desarrollo de vástagos como de
raíces por lo que habrá que sembrar mayor
cantidad de meristemas de aquellos materiales en
los que se observe un bajo número de vástagos
repicables o un escaso desarrollo de raíces para así
22
obtener un número considerable de plántulas en
condiciones óptimas para ser transferidas a tierra.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado con fondos aportados
por la Agencia Nacional de Investigaciones
Ciéntificas y Tecnológicas dentro del marco del
Proyecto 08-07333.
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