ALUMNOS: ANGELES LEON MAGDALENA; ESQUIVEL ROJAS GUSTAVO

GRUPO: 4QM1 SECCION: 02

PRACTICA: “REACCION DE TRANSAMINACION Y SU RECONOCIMIENTO POR MEDIO DE
CROMATOGRAFIA EN PAPEL”.

Objetivo. GluP=17.9 0.6172

Cuantificar la actividad de la transaminasa ALAT/GTP Testigo.=18.7 0.6448

presente en un extracto crudo de hígado, empleando un
Ala=25.6 29 0.8827
método cromatografico y otro espectrofotométrico.

RESULTADOS:
Calculo de UT/mL Problema

0.05µmol → 60µL

x → 1000µL

x=0.85 µmoles de acido glutámico/mL.

Calculo de UT/mL Testigo

0.01µmol → 60µL

x → 1000µL

x=0.17 µmoles de acido glutámico/mL.

UT=P-T=0.83UT/mL-0.17UT/mL= 0.66 UT/60 µL

0.66µmol → 60µL

x → 1000µL
Figura 1. Revelado del cromtograma por aspersión
con Ninhidrina. De izquierda a Derecha tenemos : 1g → 30mL
Ala, Glt25 µ𝐋, Glt20 µ𝐋, Problema, Testigo, Glt
x → 2mL
15 µ𝐋, Glt 10 µ𝐋, Glt5 µ𝐋
x=0.066 g
Tabla 1. Relacion de Rf entre glutamato y solvente.
x=11 µmoles de acido glutámico/mL.
Frente de Frente de Rf=fm/fs
Mancha(fm), solvente(fs), cm 𝑈𝐴𝑇
𝑚𝐿
=11 µmoles de ác. glut/mL/0.066g*1=166.67
cm
UAT/mL
Glu5=21.5 0.7413

Glu10=20.5 0.7068

Glu15=20.2 0.6965

Glu20=19.5 29 cm 0.6724

Glu25=14.5 0.5
 ALUMNOS: ANGELES LEON MAGDALENA; ESQUIVEL ROJAS GUSTAVO
GRUPO: 4QM1 SECCION: 02
PRACTICA: “REACCION DE TRANSAMINACION Y SU RECONOCIMIENTO POR MEDIO DE
CROMATOGRAFIA EN PAPEL”.

Discusiones.

A partir de una preparación cruda de transaminasa, se

comprobó el efecto sobre la Alanina y el acido α-
cetoglutarico. Sabiendo que la transferasa en la alanina va
a transferir su grupo α-amino, al carbono α de la α-
cetoglutarato con la intervención del piridoxal fosfato
como grupo prostetico formando así el glutamato y el α-
cetoalaninato.
Para corroborar esto se efectuó una cromatografía en
papel Whatman, poniendo de manifiesto el acido
glutámico en diferentes cantidades, además de colocar la
muestra problema con su respectivo testigo, y una muestra
de alanina, esta es para identificar la muestra que no
reacciono con el testigo.
El problema nos determinara la actividad enzimática con
los sustratos y el testigo nos permitirá saber la
concentración de alanina que reacciono y que no
reacciono. Las muestras que utilizamos del papel
Whatman, se fragmentan para cuantificar la
concentración de los analitos por el método
espectrofotométrico.
Las muestras de acido glutámico a diferentes
concentraciones, sirven para realizar la curva tipo, esta
nos permite compara nuestra prueba. En este caso la
prueba tiene una gran concentración de acido glutámico,
lo que evidencia el efecto de la transferasa sobre la alanina
y el acido α-cetoglutarico.

CONCLUSIONES
La enzima TGP ( Alanina Transaminasa Glutámico
pirúvica)), transfiere un grupo amino de la alanina a un α-
cetoacido aceptor; dando como resultado la formación de
un nuevo aminoácido y un nuevo cetoacido.

BIBLIOGRAFIA
Vejar Rivera Eva Irma, Prácticas de Bioquímica
descriptiva, 2da Edición, Editorial UNISON, México
2005, pp. 152,153.