SINTESÍS DE DNA.

El proceso de replicación de ADN es el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia
idéntica). De esta manera de una molécula de ADN única, se obtienen dos o más "réplicas" de la primera. Esta
duplicación del material genético se produce de acuerdo con un mecanismo semiconservador, lo que indica que los
dos polímeros complementarios del ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la síntesis de una
nueva cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva doble hélice contiene una de las
cadenas del ADN original. Gracias a la complementación entre las bases que forman la secuencia de cada una de las
cadenas, el ADN tiene la importante propiedad de reproducirse idénticamente, lo que permite que la información
genética se transmita de una célula madre a las células hijas y es la base de la herencia del material genético.

La molécula de ADN se abre como una cremallera, por ruptura de los puentes de hidrógeno entre las bases
complementarias en puntos determinados: los orígenes de replicación. Las proteínas iniciadoras reconocen
secuencias de nucleótidos específicas en esos puntos y facilitan la fijación de otras proteínas que permitirán la
separación de las dos hebras de ADN formándose una horquilla de replicación. Un gran número de enzimas y
proteínas intervienen en el mecanismo molecular de la replicación, formando el llamado complejo de replicación o
replisoma. Estas proteínas y enzimas son homólogas en eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias.

Replicación de ADN. La doble hélice es desenrrollada y cada hebra hace de plantilla para la síntesis de la nueva
cadena. El ADN polimerasa añade los nucleótidos complementarios a los de la cadena original.

Características generales del DNA.

 Es una cadena molecular, quiere decir que es una sustancia constituida por distintos tipos de moléculas
sencillas ligadas entre sí para así ir formando cadenas.
 Es bastante largo y extremadamente delgado. Si aumentáramos cien veces el tamaño del núcleo celular
alcanzaría el tamaño de la punta de un alfiler, mientras que el ADN plegado en ese mismo núcleo alcanzaría
la longitud de un campo de fútbol.
 Hay cuatro tipos de eslabones, esos son las moléculas denominadas nucleótidos en la cadena. Sus nombres
son: ácido adenílico (adenina), ácido guanílico (guanina), ácido citidílico (citosina) y ácido timidílico
(timina) y las abreviaturas, A, G, C, T, para cada una.
Semiconservadora

En cada una de las moléculas hijas se conserva una de las cadenas originales, y por eso se dice que la replicación
del ADN es semiconservadora. Hasta que finalmente se pudo demostrar que la replicación es semiconservadora, se
consideraron tres posibles modelos para el mecanismo de la replicación:

 Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las moléculas hijas se conserva una de las cadenas
originales.
 Conservadora. Se sintetiza una molécula totalmente nueva, copia de la original.
 Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de la cadena antigua y fragmentos de la
nueva.

Tres posibles modelos de replicación. a) Conservadora, b) Dispersora, c) Semiconservadora (mecanismo real).

ADN polimerasa

La ADN polimerasa es la enzima que cataliza la síntesis de la nueva cadena de ADN a partir de
desoxirribonucleótidos y de la molécula de ADN plantilla o molde que es la que será replicada. La enzima copia la
cadena de nucleótidos de forma complementaria (A por T, C por G) para dar a cada célula hija una copia del ADN
durante la replicación.

Estructura en 3D de un ADN polimerasa.

Modo de operación
En cada horquilla de replicación, la ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan dos nuevas cadenas de ADN que son
complementarias respecto a las 2 cadenas originales. Durante este proceso, la ADN polimerasa reconoce una base
nucleotídica no apareada de la cadena original y la combina con un nucleótido libre que tiene la base
complementaria correcta. Luego, la ADN polimerasa cataliza la formación de nuevos enlaces covalentes que ligan el
fosfato del nucleótido libre entrante con el azúcar del nucleótido previamente agregado en la cadena hija en
crecimiento. De esta forma, la ADN polimerasa sintetiza el esqueleto de azúcar-fosfato de la cadena hija.

Las ADN polimerasas también realizan otras funciones durante el proceso de replicación. Además de participar en
la elongación, desempeñan una función correctora y reparadora gracias a su actividad exonucleasa 3', que les
confiere la capacidad de degradar el ADN partiendo de un extremo de éste. Es importante que existan estos
mecanismos de corrección ya que de lo contrario los errores producidos durante la copia del ADN darían lugar a
mutaciones.

 La helicasa rompe los puentes de hidrógeno de la doble hélice, abriendo las dos hebras, permitiendo el
avance de la horquilla de replicación.
 La topoisomerasa relaja la tensión provocada por el superenrollamiento del ADN al abrirse las dos hebras.
 Las proteínas SSB estabilizan las cadenas abiertas y las mantienen separadas una de otra.
 El cebador fragmentos de ARN que se unen a la cadena molde por puentes de hidrógeno para que la ADN
polimerasa III reconozca donde debe unirse para empezar a añadir nucleótidos.
 La ADN polimerasa III sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra adelantada y de
forma discontínua en la hebra rezagada, ya que solo puede sintetizar en dirección 3'→ 5'.
 La ADN polimerasa I reemplaza los cebadores de ARN por nucleótidos de ADN.
 La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la síntesis de la cadena complementaria a la
cadena rezagada.
 La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

El proceso se puede dividir en 3 fases: iniciación, elongación y terminación.

Iniciación

Mediante consumo de ATP en dirección a la horquilla de replicación, es decir, en dirección 3' → 5' en la hebra
rezagada y 5' → 3' en la hebra adelantada, la helicasa actúa rompiendo los puentes de hidrógeno que mantienen
unida la doble hélice. El siguiente conjunto de proteínas reclutadas son las denominadas proteínas SSB encargadas
de la estabilización del ADN monocatenario generado por la acción de las helicasas, impidiendo así que el ADN se
renaturalice o forme de nuevo la doble hélice, de manera que pueda servir de molde. Estas proteínas se unen de
forma cooperativa, por lo que su unión al DNA conforme avanza la helicasa es rápida. Por otro lado, conforme las
helicasas van avanzando se van generando superenrollamientos en la doble cadena de ADN por delante de la
horquilla y si éstos no fueran eliminados, llegado a un punto el replisoma ya no podría seguir avanzando. Las
topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los superenrollamientos cortando una o las dos cadenas
de ADN y pasándolas a través de la rotura realizada.

Elongación

En el siguiente paso, el ADN Pol III cataliza la síntesis de las nuevas cadenas añadiendo nucleótidos sobre el molde.
Esta síntesis se da bidireccionalmente desde cada origen, con dos horquillas de replicación que avanzan en sentido
opuesto. Cuando el avance de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando dos burbujas se
tocan, se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha quedado replicado.

Puesto que el ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es necesario que un ARN primasa catalice la
formación de un fragmento corto específico de ARN llamado cebador, que determinará el punto por donde la ADN
polimerasa comienza a añadir nucleótidos. Así, durante la síntesis, en cada horquilla de replicación se van
formando dos copias nuevas a partir del cebador sintetizado en cada una de las dos hebras de ADN que se
separaron en la fase de iniciación, pero debido a la unidireccionalidad de la actividad polimerasa de la ADN Pol III,
que sólo es capaz de sintetizar en sentido 5´ → 3', la replicación sólo puede ser continua en la hebra adelantada; en
la hebra rezagada es discontinua, dando lugar a los fragmentos de Okazaki.

La mitad del dímero de la ºADN Pol III sintetiza la hebra adelantada y la otra mitad la hebra rezagada. La
elongación de la hebra rezagada ocurre por medio del modelo del trombón.

Enzimas que participan en la eliminación de cebadores y unión de los fragmentos de Okazaki. El cebador de ARN
está pintado en azul y el ADN que lo reemplaza en naranja.

En la hebra rezagada, cuando la ADN Pol III hace contacto con el extremo de otro fragmento de Okazaki contiguo, el
cebador de ARN de éste es eliminado y los dos fragmentos de Okazaki de ADN recién sintetizado son unidos. Una
vez se han juntado todos se completa la doble hélice de ADN. La eliminación de cebadores también se da en la
hebra conductora, de síntesis continua, pero debido a que en ésta hay un solo cebador es un proceso que sólo tiene
lugar una vez, mientras que en la hebra rezagada se dará tantas veces como fragmentos de Okazaki haya.

En la eliminación del cebador (también denominado iniciador o primer) intervienen dos enzimas: por un lado la
ADN Pol I, que va eliminando el ARN con su actividad exonucleasa 3' → 5' y simultáneamente rellenando con ADN
mediante su actividad polimerasa 5' → 3' (proceso denominado nick-traslation). Al final queda rotura (o "mella")
entre el extremo 3'-OH libre y el fosfato 5' de la cadena sintetizada; por último, la ADN ligasa sella esa rotura
catalizando la reacción de condensación entre el grupo fosfato y el OH de la desoxirribosa del nucleótido contiguo,
completando el enlace fosfodiéster; para ello, es preciso hidrolizar una molécula de ATP.

Terminación (de los genomas lineales)

El final de la replicación se produce cuando la ADN polimerasa III se encuentra con una secuencia de terminación.
Se produce entonces el desacople de todo el replisoma y la finalización de la replicación.