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Extra 4 Soluciones
Extra 4 Soluciones
INTRODUCCIÓN
Ej.: “PBS 5X” es una solución stock de PBS 5 veces más concentrada que el PBS de uso
normal (ó “1X”). Puede prepararse PBS 1X haciendo una dilución 1/5 de la solución
stock (para 500 ml: 100 ml PBS stock + 400 ml H2O bidestilada.)
* A veces es necesario diluir “mucho” una solución concentrada (Ej.: 1/10 4 , 1/106). En
estos casos se suelen hacer diluciones sucesivas o “diluciones seriadas” para
disminuir los errores de medición al pipetear volúmenes muy pequeños.
Ej.: Preparar 1 ml de una solución de un anticuerpo que contenga 0.1 µg/ml, a partir
de una solución stock de 1 mg/ml. Debería realizarse una dilución 1/10000 (1/10 4) es
decir pipetear 0.1 µl stock + 999.9 µl buffer de dilución. Conviene entonces hacer
diluciones sucesivas que, con menor error de pipeteo, permitan alcanzar la
concentración buscada. Ej. 4 diluciones sucesivas: 1/10 . 1/10 . 1/10 . 1/10 = 1/10000.
Unidades de concentración
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Introducción a la Biología Celular y Molecular
• % m/m: Por ciento masa en masa, g de soluto por cada 100 g de solución (SN)
(soluto + solvente).
• % m/v: Porciento masa en volumen, g de soluto por cada 100 cm 3 o 100 ml de SN.
• % v/v: Porciento volumen en volumen, ml de soluto por cada 100 ml de SN.
• M: Molaridad, Nº de moles de soluto por cada 1 litro o 1000 cm 3 de SN.
• m: Molalidad, Nº de moles de soluto por cada 1 Kg de solvente.
• N: Normalidad, Nº de equivalentes de un ácido o de una base por cada 1 litro de SN.
Una solución 2 M de HCl es lo mismo que una solución 2 N, mientras que una solución
4 M de ácido sulfúrico será lo mismo que una solución 8 N para este ácido.
OBJETIVOS
Familiarizarse con las unidades mas utilizadas en biología molecular y ser capaces
de intercambiar ágilmente las distintas unidades.
Familiarizarse con el material de uso corriente en el laboratorio, la preparación de
soluciones y el empleo de diluciones a partir de soluciones concentradas.
DESARROLLO DEL TP
Se partirá de una solución stock de colorante (por ejemplo: azul de toluidina o azul de
metileno) de concentración conocida.
b) Dilución incógnita:
Problemas de Diluciones
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Introducción a la Biología Celular y Molecular
4) ¿Qué volumen de HCl 6M debe usarse para preparar 500 ml de una solución de
HCl 5 mM?
6) Si se cuenta con una solución 2,2 M de NaCl, ¿Cuántas diluciones seriadas 1/10
deben realizarse para llegar a una solución de concentración 22 μM? Indique que
volúmenes utilizaría si las diluciones se realizan en eppendorfs con Vfinal=1,5ml.
9) Usted posee una sustancia coloreada y desea realizar una curva de calibración
con al menos 4 puntos para el rango de concentraciones 0,1 mM a 0,2 M. Si ud.
posee una solución 2,5 M y sabe que la ε490 = 50 M-1cm-1
a. Indique qué diluciones seriadas haría para obtener esos puntos.
b. ¿Cuál será la Absorbancia a 490nm de cada uno de los puntos que ud. eligió?
10) Las β-lactamasas son una familia de proteínas generadas por algunos
microorganismos, que les confieren resistencia a los antibióticos β-lactámicos. Una
de ellas en particular tiene un peso molecular (MW) de 29374 g/mol y ε280=24750
M-1cm-1. Al medir absorbancia en una cubeta estándar (1 cm de camino óptico) a
280nm se obtiene un valor de 0,500.
a. Calcule la concentración en μg/ml de la solución de proteínas.
Ayuda: Para resolver este problema deben recordarse los conceptos de ecuación de
la ecuación de Lambert-Beer y que la longitud de onda a la que se miden las
proteínas es 280 nm
b. Si cuenta con 1 ml de esta solución, ¿Cómo prepararía 500 μl de una solución
400 μg/ml?
c. ¿Qué valor de absorbancia presentará dicha solución?
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