Oxidación de aguas residuales municipales por mecanismo de radicales libres.

Un
estudio de espectroscopia UV/Vis
E. Giannakopoulos a, E. Isari a, K. Bourikas a, H.K. Karapanagioti b, G. Psarras c, G. Oron d, I.K.
Kalavrouziotis a,

a. School of Science and Technology, Hellenic Open University, Tsamadou 13-15 & Saint Andrea,
262 22, Patras, Greece
b. Department of Chemistry, University of Patras, Patras, 26504, Greece
c. Hellenic Agricultural Organization-“DIMITRA”-Institute for Olive Tree, Subtropical Crops and
Viticulture, Lab. of Plant Mineral Nutrition & Physiology, Chania, 73 100, Greece
d. Ben-Gurion University of the Negev, J. Blaustein Institutes for Desert Research, Zuckerberg
Water Research Center, Kiryat Sde Boker, 8499000, Israel

Resumen
Este estudio investiga la oxidación de las aguas residuales municipales (WW) por complexación
con polifenoles naturales con actividad de barrido de radicales, como el ácido gálico (GA) (3, 4,5
trihidroxi-benzoico) en pH alcalino (>7), a temperatura y O2 ambiente. Las características
fisicoquímicas y estructurales de la formación de complejos GA-WW se evalúan mediante
espectroscopia UV/Vis. El análisis comparativo entre los espectros UV/ Vis del monómero GA, el
polímero GA-GA, los compuestos WW y el complejo GA-WW revela diferencias significativas
entre 350 -450 y 500- 900 nm. Según la espectroscopia de reflectancia total atenuada (ATR) y el
análisis termogravimétrico (TGA), estas diferencias espectrales corresponden a distintos
complejos formados. Este estudio sugiere un papel novedoso de los polifenoles naturales en la
degradación y humificación de los residuos.

Palabras clave:
Aguas residuales municipales, Oxidación, Polifenoles, Radicales libres y Complexación.

Introducción Hachemita de Jordania, el Reino de Arabia

Hoy en día, la recuperación de aguas
residuales municipales (WW) ha sido
ampliamente reconocida como una
solución prometedora para superar la
creciente presión sobre los recursos
hídricos (Wintgens et al., 2005). Esto podría
liberar agua limpia para su uso en otros
sectores que necesitan agua dulce y
proporcionar agua a sectores que pueden
utilizar el agua, por ejemplo, la agricultura,
que es el principal usuario de agua, y que
extrae alrededor del 70% de toda el agua
(OMM, 1997). Riego por goteo de los
cultivos, con agua bruta o sin tratar y WW
recuperada, es ya una práctica muy
extendida (Smit y Nasr, 1992). Muchos
países como Australia, EE.UU., el Reino
Saudita, Irán, Turquía y en algunos países
mediterráneos han incluido la reutilización
de aguas residuales como importante
elemento de la planificación de los recursos
hídricos (Pescod, 1992; Kalavrouziotis y
Alaton, 2008; Pedrero et al., 2009;
Kalavrouziotis y otros, 2013, 2015; Kellis y
otros, 2013). Los riesgos surgen de una gran
variedad de patógenos microbianos,
contaminantes orgánicos y metales pesados
presentes en las aguas residuales
(Kalavrouziotis, 2015; Fatta-Kassinos et al.,
2011; Muñoz et al., 2009). El tratamiento
convencional de aguas residuales consiste
en una combinación de procesos físicos,
químicos y biológicos que eliminan sólidos,
materia orgánica y, a veces, nutriente de las
aguas residuales. En la bibliografía se
informa de una multitud de procesos
convencionales y alternativos para la
descontaminación de aguas contaminadas y
aguas residuales, como la coagulación, la
precipitación, la extracción, la evaporación,
la adsorción sobre carbón activado, el
intercambio iónico, la oxidación y la
oxidación avanzada, la incineración, la
electroflotación, el tratamiento
electroquímico, la biodegradación y la
filtración por membranas (Mondal, 2008;
Moo-Young, 2007; Lefebvre y Moletta,
2006; Swami y Buddhi, 2006; Dabrowski et
al., 2005; Matsumoto y otros, 1996; Cotillas
y otros, 2014, 2015; Llanos et al., 2014). La
coagulación/floculación es un proceso
frecuentemente aplicado en la purificación
primaria de aguas residuales (Manu, 2007;
Moreno et al., 2007; Grenoble et al., 2007;
Stechemesser y Dobias, 2005; Kulkarni et
al., 2006; Aboulhassan et al., 2006;
Dovletoglou et al., 2002; Jiang y Graham,
1998). El uso de coagulantes puede tener
varias consecuencias ambientales: i) un
aumento de la concentración de metales en
el agua (que puede tener consecuencias
para la salud humana), ii) la producción de
grandes volúmenes de lodos (tóxicos), iii) la
dispersión de oligómeros de acrilamida, que
también puede ser perjudicial para la salud.
Los últimos avances en la tecnología de
floculación utilizan polímeros orgánicos
naturales (biopolímeros) (Kalavrouziotis et
al.., 2014) polielectrolitos como floculantes
y/o coadyuvantes de floculación en el
tratamiento de aguas fluviales y aguas
residuales (Al-samawi y Hama, 2012; Aygun
y Yilmaz, 2010; Miller et al., 2008; Theodoro
et al., 2013) primando sobre los polímeros
inorgánicos y sintéticos.
Los biopolímeros son productos naturales
de bajo costo, caracterizados por su
comportamiento ambientalmente amigable
(Bratby, 2006). Las ventajas de estos
floculantes poliméricos son las siguientes:
fácil manejo, alta solubilidad en agua,
reducción del volumen de lodos, de fácil
disponibilidad y biodegradabilidad y
producen flóculos grandes, densos y
compactos con buenas características de
sedimentación (Renault et al., 2009).
А número de polímeros y polielectrolitos
naturales han sido explorados y
establecidos para ser efectivos en la
descontaminación de aguas residuales, ya
sea a través de procesos de adsorción o
coagulación/floculación. Estos incluyen
Alginato (algas marrones) (Olad y Azhar,
2013; Zambrano et al., 2013), materiales
celulósicos (plantas verdes y algas) (Ahmad
y Kumar, 2011; Gupta et al.., 2015), almidón
(plantas verdes) (Chukwudi y Uche, 2008;
Tripathy y De, 2006), quitosano (hongos)
(Renault et al., 2009; Srinivasan y
Viraraghavan, 2010), goma xantana
(Mukherjee et al.., 2014; Verma et al.,
2012), moringa oleifera (Ali et al., 2010;
Beltrán Heredia y Sánchez-Martín, 2009;
Bichi, 2013; Debora et al.., 2013; Kazi y
Virupakshi, 2013), okra (Al-samawi y Hama,
2012), goma guar y goma cassia tora
(Sharma et al., 2006; Tripathy y De, 2006) y
taninos (plantas polifenólicas) (Sanchez-
Martín et al., 2010; Thakur y Choubey,
2014) sólo por mencionar algunos.
Los estudios sobre los productos vegetales
como posibles agentes de tratamiento de
aguas residuales tienen una larga historia.
En particular, se considera que los derivados
de la madera son adsorbentes altamente
eficaces (Geay et al., 2000) al igual que los
taninos (Sánchez-Martín et al., 2010; Thakur
y Choubey, 2014). Compuestos
polifenólicos naturales, como taninos,
proteínas de enlace y precipitación y varios
otros compuestos orgánicos incluyendo
aminoácidos (p. ej. péptidos) y alcaloides
(Siebert et al.., 2006; Hagerman y otros,
1998a,b; Baxter y otros, 1997; Riedl y
Hagerman, 2001; Riedl y otros, 2001;
Charlton y otros, 2002; Chen y Hagerman,
2004). Se probó un nuevo floculante
coagulante a base de tanino para el
tratamiento de agua a nivel de planta piloto
para cuatro tipos de agua: agua superficial
(recogida de un río) y agua municipal,
industria textil y aguas residuales de
lavandería. Las pruebas en planta piloto
proporcionaron una mejora significativa en
la eliminación de contaminantes, turbidez y
BOD5. A pesar del flujo continuo, se observó
un aumento en la reducción del color (hasta
un 50%), la eliminación de tensioactivos
(hasta un 75%), y la eliminación de materia
orgánica (COD y BOD5) (40% y 60%,
respectivamente), la eliminación total de
turbiedad en el WW municipal, la
eliminación de colorantes en un 95% en el
caso del WW de la industria textil, y la
eliminación de tensioactivos en un 80% en
el WW de la lavandería (Sánchez-Martín et
al., 2010). Un coagulante natural autóctono
como el tanino, obtenido de Acacia catechu,
se examina como coagulante primario. En la
dosis óptima de 3.0 mgL-1 , Acacia catechu
polvo puede eliminar la turbidez hasta el
91% (Thakur y Choubey, 2014). Los taninos
naturales se encuentran en las hojas, frutos,
cortezas, raíces y madera de los árboles. El
término "taninos" abarca muchas familias
de compuestos químicos vegetales. Sin
embargo, el término "tanino" por extensión
se aplica ampliamente a cualquier
compuesto polifenólico de gran tamaño
que contenga suficientes hidroxilos y otros
grupos adecuados (como los carboxilos)
para formar complejos fuertes con varias
macromoléculas. La unidad base de la
estructura tánica es el monómero de ácido
gálico (GA) (Fig. 1) (Pengelly, 2004). GA es
un producto natural de la hidrólisis de
taninos y está presente en alimentos de
origen vegetal (Strlic et al., 2002). Entre los
polifenoles naturales, el GA exhibe la
capacidad antioxidante más considerable
en las plantas y posee una mayor actividad
de eliminación de radicales que los
derivados de alquilgalatos (Gunckel et al.,
1998), así como ácido protocatecúico y
ácido 4-hidroxibenzoico (Fukumoto y
Mazza, 2000; Rice-Evans et al., 1996). Los
cálculos teóricos para la AG (Saiz-Jimenez et
al., 1975; Giannakopoulos et al., 2005), y
otros compuestos fenólicos proporcionaron
una base teórica para sus características
espectroscópicas vibracionales
(Mohammed Ziegler y Billes, 2002), así
como el mecanismo de su actividad
antioxidante (Leopoldini et al., 2004).
Basado en la espectroscopia de resonancia
paramagnética electrónica, GA es un buen
modelo para los radicales de los ácidos
húmicos (Giannakopoulos et al., 2005,
2006). En un estudio espectrofotométrico a
pH > 7, la GA y sus análogos son
rápidamente oxidados por el oxígeno
atmosférico (Friedman y Jurgens, 2000). En
un estudio electroquímico de GA y
derivados de alquil-galato a pH 2 - 7, se
observó que la oxidación era irreversible y
se postuló un esquema de oxidación de dos
electrones que conducía a la producción de
estructuras de quinona en medios ácidos
(Gunckel et al., 1998). Dada la importancia
de los ácidos polihidroxibenzoicos, se
investigó la adsorción de la GA en el
electrodo de gota de mercurio colgado
(HMDE) en función del pH y la temperatura
(Giannakopoulos y Deligiannakis, 2011,
2012). En este contexto, el HMDE ofrece
una superficie hidrofóbica ideal donde los
eventos de adsorción y redox pueden ser
monitoreados bajo condiciones
controladas. La interacción de la AG con el
HMDE es un proceso termodinámico
complejo que implica la quimisorción de
especies radicales como interacciones
débiles de H - adhesión y adsorción
hidrofóbica (Giannakopoulos y
Deligiannakis, 2011). Además, con el
aumento de los grupos OH en el anillo
benzoico, las moléculas se orientan desde
una posición paralela del anillo benzoico a
una posición perpendicular hacia la
superficie del electrodo. Esta posición
ayuda a la adsorción de más moléculas en la
superficie del HMDE (Giannakopoulos et al.,
2012). Se ha investigado la posibilidad de
producción de polímeros, sin el uso de un
material catalítico, de varias moléculas
polifenólicas de ácidos mono y tri-
hidrobenzoicos bajo el O2 ambiente por
complexación oxidativa (Giannakopoulos et
al., 2009). La copolimerización oxidativa
entre GA y ácido protocatehíico (PA) (3,4
ácido dihidroxibenzoico), dio como
resultado un policondensado tipo ácido
húmico soluble en agua que imita las
propiedades fisicoquímicas y separación de aceite y arena. Sus
espectroscópicas fundamentales de los
ácidos húmicos naturales. La
espectroscopia de RMN y RPE de estado
sólido 13C para polímero (GA-PA) mostró
que (i) las reacciones de apertura de anillo
de los monómeros de GA y PA están
implicadas en la formación de (GA-PA) y (ii)
contiene radicales estables a base de fenol,
con una concentración dependiente del pH
respectivamente (Giannakopoulos et al.,
2009).
El objetivo del presente trabajo es estudiar
espectroscópicamente el mecanismo de
complexación entre compuestos GA y WW
municipales en presencia de O2 atmosférico
a pH > 7.
Materiales y métodos
Materiales
Todas las soluciones se prepararon con
productos químicos de grado analítico y
agua purificada (Milli-Q Academic) con una
conductividad de 18,2 uS cm-1. El NaOH se
utilizó para ajustar el pH de las muestras a
10,5.
aproximadamente 20.000 personas por día.
Las fuentes de aguas residuales son los
efluentes domésticos, algunos residuos
agrícolas y los purines. Las muestras de agua
de lavado se recogieron después de la
eliminación de grandes sólidos y la
principales propiedades fisicoquímicas se
indican en la Tabla 1. Todas las
determinaciones analíticas se realizaron de
acuerdo con los métodos estándar de la
Asociación Americana de Salud Pública
(APHA, 1998). En comparación con los datos
de la literatura (Sfaelou et al., 2015;
ArslanAlaton et al., 2007; Gómez Cerezo et
al., 2001), esta muestra de WW tiene una
concentración moderadamente baja de
COD y metales. Esto se debe
probablemente al origen doméstico del
agua de mar y su dilución con aguas
pluviales debido a conexiones ilícitas,
desbordamientos y fugas a través de
desbordamientos alcantarillas (Panasiuk et
al., 2015).
Tabla 1
Principales características físico-químicas y
microbiológicas de las aguas residuales
municipales de Nafpaktos, Grecia Occidental.

Solución patrón GA
GA (3,4,5 tri-hidroxi-benzoico) se obtuvo de
SigmaeAldrich (Lote G7384, Aldrich, ensayo
>99%), y se utilizó sin purificación adicional.
La solución madre de GA se preparó a
concentraciones de 2 mM.

Muestras de WW Municipales
Se tomaron muestras de aguas residuales
municipales de la planta de tratamiento de
aguas residuales de Nafpaktos, una
pequeña ciudad del oeste de Grecia. Esta
planta de tratamiento de aguas residuales
recibe aguas residuales municipales de
Fig. 1. Estructuras químicas monómero GA y oligómero/polímero GA-GA (tipo tanino).
Instrumentos y procedimientos
Espectroscopia UV/Vis
Las mediciones UV/Vis se llevaron a cabo
con un instrumento UV/Vis de haz simple
Hitachi U-1900. Las mediciones UV/Vis se
llevaron a cabo entre 200 - 1000 nm con una
velocidad de exploración de longitud de
onda de 800 nm/min. Las muestras para las
mediciones UV/Vis se filtraron utilizando un
filtro de fibra de 0,45 mm prelavado
(Whatman). Las muestras fueron llevadas al
mismo pH para su medición debido a que la
absorción de luz por los ácidos orgánicos
estudiados puede variar con el estado de
protonación y, por lo tanto, con el pH
(Giannakopoulos et al., 2005). La técnica
analítica simple para las moléculas
orgánicas utilizadas aquí también ha
demostrado ser robusta y rápida.
Espectroscopia ATR
Los espectros ATR fueron registrados en un
''Bruker Optics' Alpha-P Diamond ATR
Spectrometer of Bruker Optics GmbH''. Las
mediciones de absorbancia se realizaron
dentro de los 400 - 4000 cm-1 con velocidad
de escaneo de 7,5 kHz, resolución de 4 cm-1
y tiempo de escaneo de muestra de 24 s. Los
espectros ATR se obtuvieron por software,
versión 7.2. Para las mediciones ATR se
utilizó material en polvo (liofilizado) que se
obtuvo a - 66ºC utilizando un liofilizador.
Análisis termogravimétrico (TGA)
El TGA se realizó bajo atmósfera de
nitrógeno (caudal: 200 mL min-1) en un
aparato de Análisis Térmico
Diferencial/Termogravimétrico de
Diamante PerkinElmer (TGA/DTG). Se
colocó una cantidad de la muestra (unos 10
mg) en un recipiente de platino a
temperatura ambiente. Inicialmente, la
temperatura se elevó a 100 ºC y se mantuvo
constante en este valor hasta que se eliminó
la humedad y se alcanzó la estabilización
ponderada. Después de registrar este peso
como el inicial, la temperatura se
incrementó de 100 a 250 ºC a una velocidad
de calentamiento de 10 ºC min-1. Se
obtuvieron las curvas TGA y DTG por
software. Para las mediciones de TGA, se
utilizó material en polvo (liofilizado) que se
obtuvo a 66 ºC utilizando una liofilizadora.
ICP-OES-análisis de metales
Las concentraciones de metales se
determinaron utilizando un espectrómetro
de emisión óptica Perkin-Elmer Optima
2100 DV (Inductively Coupled Plasma-
Optical Emission Spectroscopy ICP-OES)
(PerkinElmer, Waltham, EE.UU.). Las
soluciones patrón se prepararon por
dilución de cada elemento puro estándar
obtenido de Merck (Darmstadt, Alemania).
Para la calibración y el aseguramiento de la
calidad de cada metal se utilizó el material
de referencia estándar de los metales.
Mediciones electroquímicas
El pH y la conductividad eléctrica (EC) de las
muestras se midieron con un pH-metro
Crison (Modelo GLP21) y un medidor de
conductividad Metrohm (Modelo 712),
respectivamente.
Procedimientos de complexación
Complexación GA-WW, (GA-WW)
complejo
La complexación se realizó en una solución
acuosa bajo O2 ambiental, a pH alcalino
controlado (>7). La muestra de agua de la
planta de tratamiento se diluyó 1:3
añadiendo agua purificada (Milli-Q). El pH
de la muestra se ajustó a pH > 7 utilizando
NaOH como tampón y fue monitoreado
continuamente por medio de un electrodo
de pH sumergido en las soluciones. La
muestra de WW se dividió en dos partes. La
primera parte fue usada como referencia
(referida como WW). La complexación de
GA con compuestos de WW se preparó
añadiendo una cantidad de solución patrón
de GA en la segunda parte de WW a una
concentración de GA de 100 mM.
(Denominado complejo GA-WW). Las
muestras fueron mezcladas en 200 rpm
bajo O2 ambiente durante 60 min.
GA polimerización, (GA-GA)
oligómero/polímero
La polimerización de GA se probó con el
mismo protocolo descrito anteriormente
para el complejo GA-WW. La cantidad de
solución patrón de GA se diluyó añadiendo
agua purificada (Milli-Q) a una
concentración de 100 mM, el pH de la
muestra se ajustó a pH > 7 y, a continuación,
la muestra se agitó a 200 rpm con O2
ambiental durante 60 min.
Resultados y discusión
Control UV/Vis de la oxidación de GA en
ausencia/presencia de WW
Los productos de oxidación formados a
partir de GA en ausencia o presencia de WW
a pH > 7, fueron monitoreados por
espectroscopia UV/Vis. Como se presenta
en las Figs. 2 y 3 tanto para el
oligómero/polímero GA, GA-GA en ausencia
de WW, como para el complejo GA-WW en
presencia de WW en la solución, se
observaron cambios significativos en el
espectro UV/Vis a pH > 7.
Fig. 2. Espectro UV/Vis de GA a pH > 7 en
presencia de O2 a (A) 5 min para tiempos de
incubación cortos (tiempo inicial) y (B) 60 min
para tiempos de incubación largos (tiempo de
equilibrio).
La oxidación de los compuestos
polifenólicos depende en gran medida del
pH, la temperatura y el oxígeno atmosférico
(Friedman y Jurgens, 2000; Giannakopoulos
y Deligiannakis, 2011, 2012). Como se
presenta en la Fig. 2, a pH > 7 GA es
rápidamente oxidado por el oxígeno
atmosférico. El suplemento, en la Fig. 2,
muestra la cinética de la formación de
nuevas estructuras de la GA a 332 nm. De
acuerdo con estos resultados, el tiempo
óptimo de incubación para que los
procedimientos de complexación se lleven a
cabo cuando se utilizan especies GA fue de
60 min. Para periodos cortos de incubación
(tiempo inicial) hasta 5 min, la señal de
absorción UV/Vis (Fig. 2 ver espectro A), se
extiende de 200 a 400 nm. Se observaron
tres bandas a 220, 280 y 332 nm para GA en
su espectro y se atribuyen al π- sistema del
anillo de benceno. Las posiciones de estas
bandas dependen del estado de ionización
y de la naturaleza de la subsistencia, es
decir, su naturaleza de donación o retirada
de electrones y su absorción disminuye con
el tiempo (Bozic et al., 2012). Para un largo
tiempo de incubación de aproximadamente
60 min de tiempo de equilibrio (ver Fig. 2),
la señal de absorción UV/Vis de GA (Fig. 2:
ver espectro B) se amplía y se extiende de
200 a 600 nm. La absorción a 220 nm
disminuyó mientras que la absorción a 220
y 235 nm fue disminuida, desplazada y
ampliada a una meseta horizontal entre 260
- 290 nm y 330 -430 nm, respectivamente.
Ambos cambios están asociados con la
transición n - π * debido al acoplamiento C
- C y C -O -C, indicando la ocurrencia de una
reacción que involucra cadenas laterales
fenólicas (Pati et al., 2006) indicando una
mayor polimerización con una mayor
longitud de conjugación y una reducción en
la energía para las transiciones de los
electrones durante la absorción de la luz.
Recientemente, las propiedades redox y la
disponibilidad de la GA para transferir
electrones al electrodo durante la oxidación
enzimática a pH 6.5 y su autoxidación a pH
> 7, fueron investigadas por
voltamperometría cíclica y De acuerdo con la Fig. 3A, el espectro
voltamperometría de onda cuadrada,
respectivamente (Bozic et al., 2012;
Giannakopoulos et al., 2012). Tal y como se
presenta en estos trabajos, los procesos de
polimerización se produjeron durante la
oxidación de los monómeros GA, lo que dio
lugar a una disminución de la corriente de
pico y a la detección de nuevos picos. Según
Giannakopoulos et al (2005, 2009), a pH
alcalino, los sustituyentes como los grupos
carboxilo -COOH e hidroxilo -OH en el anillo
fenólico pueden influir significativamente
en la densidad de electrones "en el anillo" y,
por lo tanto, modificar drásticamente el
espectro UV/Vis. Así, el espectro UV/Vis del
PhOH gobierna la reacción del PhOH con el
O2 para formar radicales libres aniónicos
PhO- e hidroperóxidos (O2-/ HOO-). Estos
radicales libres están unidos formando
productos de oligómero y polímero de
acuerdo con el siguiente mecanismo para la
reacción de la molécula de polifenol GA, (1):
Fig. 3. Espectros UV/Vis de (A) polimerización
GA en presencia de WW, (B) polimerización GA
en ausencia de WW y (C) WW, a pH > 7. Las
flechas muestran la evolución de las bandas.
En la Fig. 3 se presentan los espectros
UV/Vis de los compuestos WW, del
polímero GA-GA y del complejo GA-WW a
pH > 7.
UV/Vis para la solución WW se extiende de
200 a 300 nm de longitud de onda con un
máximo de alrededor de 225 nm, lo que
probablemente se atribuye al sistema del
anillo de benceno. Esta banda se mantuvo a
lo largo del tiempo. Para identificar
espectroscópicamente la oxidación fenólica
de GA en presencia de WW, una cantidad de
la solución madre de GA se diluye a una
concentración de 100 uM en una solución
de WW (diluida 1:3) con un pH > 7. Como se
muestra en la Fig. 3, para tiempos de
incubación largos de aproximadamente 60
min (tiempo de equilibrio), las cromóforos en 650 nm de acuerdo con el
características espectrales del complejo siguiente mecanismo, reacción (2):
funcionalizado GA-WW a pH > 7 entre 200 y
500 nm son similares a las del complejo
funcionalizado GA-WW espectro de AG
polimerizado a pH > 7 (Fig. 2), lo que sugiere
la presencia de de cromóforos similares y/o
analogías estructurales. Además, el valor de DQO en el complejo
Más específicamente, como se presenta en WW-GA ha disminuido en un 23% en
la Fig. 3, el espectro UV/Vis del complejo tiempo de equilibrio, lo que demuestra que
funcional GA-WW se extiende de 200 a 900 la complexación entre WW y GA por el
nm. El complejo GA-WW exhibió una banda mecanismo redox está gobernada.
de 225 nm, una banda ancha entre 260 y Como se muestra en la Fig. 4, el color de
290 nm similar a la de la GA polimerizada, cada muestra (A), (B) y (C) es diferente. Esto
una banda ancha entre 335 y 370 nm que es es una fuerte evidencia de que la
menor a la de la GA polimerizada, mientras complexación entre compuestos GA y WW
que apareció una nueva banda ancha entre se debe a la quimisorción.
500 y 900 nm con un máximo de alrededor En conclusión, la interacción de WW y
de 650 nm. compuestos fenólicos es un fenómeno
La comparación entre los espectros UV/Vis complejo y fue investigado más a fondo por
del complejo GA y GA-WWW mostró una espectroscopia ATR.
disminución de la banda ancha, entre 335 y
370 nm. Esto puede atribuirse a la menor
cantidad de grupos cromóforos de
estructuras oligoméricas/poliméricas GA
conjugadas por las reacciones de
acoplamiento C-C y C-O-C debido a la
transición π - π * y n - π * o a la
deslocalización de electrones.
Además, la aparición de una banda
alrededor de 650 nm, probablemente
atribuida a la reacción entre GA y proteínas
de WW (Ozdal et al., 2013). Las proteínas
presentan solubilidad dependiente del pH.
A pH alcalino, las proteínas sufren
Fig. 4. Color de soluciones acuosas: (A)
hinchazón debido a la desprotonación del
Complejo GA-WW (B) Polímero GA-GA y (C)
grupo amino en condiciones de pH alto. En WW en tiempo de equilibrio.
un estudio previo (Sousa et al., 2009), la
aparición de una banda de longitud de onda Características espectroscópicas ATR de
> 350 nm se atribuyó a la reacción entre las GA, WW y formación de productos
o-quinonas formadas por la oxidación Para caracterizar los mecanismos de
enzimática de los ácidos fenólicos y los reacción de oxidación de GA y sus
grupos amino de quitosano. Por lo tanto, oligómeros/polímeros producidos en
sugerimos que a pH > 7 los radicales libres ausencia o presencia de WW a pH > 7, se
fenólicos de GA interactúan con grupos utilizó la espectroscopia ATR. En la Fig. 5 se
aminos de proteínas para formar productos presentan los espectros ATR de a)
poliméricos (GA-WW) con grupos monómeros GA, b) oligómeros
GA/polímeros en ausencia de WW, c)
compuestos WW y d) oligómeros
GA/polímeros en presencia de WW,
complejo GA-WW a pH > 7, para una
incubación de 60 minutos (tiempo de
equilibrio).
De acuerdo con la Fig. 5, los
oligómeros/polímeros GA y los espectros
ATR del complejo GA-WW exhibían
diferentes perfiles en comparación con los
monómeros GA y con los compuestos WW,
respectivamente. Ambos, los
oligómeros/polímeros GA-GA y el complejo
GA-WW, mostraron características
polifenólicas típicas con la existencia de un
anillo fenólico -OH que se estira dentro de
los 3100 -3650 cm-1 y -OH en flexión plana a
1365 cm-1, un anillo aromático C - C que se
estira dentro de los 1550 -1750 cm-1, y C-
O/C - C que estira vibraciones dentro de los
1200 -1300 cm-1(Yamada et al., 2007). El
ancho de estas bandas depende en gran
medida de la pKa de grupos activos como -
OH, COOH, -NH2. A pH alcalino > 7, los
grupos activos se disocian (pKa de -COOH y
-OH en GA es 4.3 y > 8.8, respectivamente).
Fig. 5. Espectros ATR de monómeros GA,
oligómeros/polímeros GA-GA, compuestos
WW y complejo GA-WW.
Como se presenta en la Fig. 5, las bandas
ATR del polímero GA se desplazaron,
aumentaron y ampliaron en comparación
con el espectro de monómeros GA. Como
consecuencia de la alta cantidad de grupos
libres y de H-OH, las bandas de absorción
dentro de los 3380 - 3550 cm-1 aparecieron
como una amplia banda de resumen. Como
se presenta en la Fig. 5, la banda del
monómero GA a unos 1020 cm-1 se desplazó
y ensanchó a 1000 cm-1 en los
correspondientes espectros de
oligómeros/polímeros. Esta banda puede
atribuirse a la vibración de estiramiento de
C-O que indica los enlaces de los ácidos
fenólicos C - C y la polimerización extendida
(Yamada et al., 2007). Además, una banda
de estiramiento de carbonilo,
correspondiente a los enlaces de éster,
apareció dentro de los 1735 -1780 cm-1 en
el espectro de oligómeros/polímeros,
mientras que faltaba en el espectro de
monómeros. Esto puede ser atribuido a la
esterificación redox empleando grupos
hidroxilo y carboxilo de la GA. Además, las
desapariciones de las regiones
características de las huellas dactilares de
1000 - 500 cm-1 para el monómero pueden
ser observados en el espectro de polímeros
GA-GA.
El espectro ATR de los compuestos WW (Fig.
5) mostró una banda ancha dentro de 3330
-3550 cm-1, que puede atribuirse al
estiramiento de -OH y -NH y bandas anchas
dentro de 1590 -1791 cm-1 y 1320-1510 cm-
1
atribuidas a las configuraciones de la
amida (amida I, II y III) C - N,
respectivamente (Muzzarelli et al.., 1980;
Sousa et al., 2009). Las bandas pequeñas a
1174 y 1064 cm-1 correspondientes al
estiramiento antisimétrico del puente C-O-
C y la vibración esquelética que implica
estiramiento C-O, son características de una
estructura sacárida, respectivamente
(Muzzarelli et al., 1980; Sousa et al., 2009).
Además, las bandas de 846 y 574 cm-1 se
pueden atribuir a las aromáticas vibraciones
de flexión C-H.
Como se muestra en estudios
espectrofotométricos a pH > 7, la GA y sus
análogos son rápidamente oxidados por el
oxígeno atmosférico (Friedman y Jurgens,
2000; Giannakopoulos et al., 2005, 2006).
Giannakopoulos et al. estudiaron en 2009
el papel del O2 durante la polimerización de
GA y con otras moléculas a pH alcalino. De
acuerdo con los resultados de este trabajo
la reacción entre GA y O2 es redox y la
concentración de O2 disuelto estaba
disminuyendo de un valor máximo inicial a
cero (Giannakopoulos et al., 2009). Estudios
de RMN y EPR mostró que la interacción de
la AG con el O2 a pH alcalino puede ser
atribuido al gasto de equivalentes oxidantes
de O2 (Giannakopoulos et al., 2005).
En otros estudios electroquímicos de GA y
derivados del galato de alquilo a pH 2-7, se
observó que la oxidación era irreversible y
se postuló un esquema de oxidación de dos
electrones que conducía a la producción de
estructuras o-quinoides en medios ácidos
(Gunckel et al.., 1998; Giannakopoulos et
al., 2012), mientras que a pH > 7, GA puede
oxidarse y convertirse en radicales libres
aniónicos activos GAC que experimentan
reacciones formadoras de oligómeros con
otros radicales libres, reacción (1)
(Giannakopoulos et al., 2005, 2006). Según
Muzzarelli et al. (Muzzarelli et al., 2003), las
o-quinonas reaccionan con otras quinonas,
así como con grupos de aminas nucleofílicas
para formar productos de
oligómeros/polímeros. La química de la
reacción de quinonas con grupos de aminas
de proteínas no se entiende bien, pero es se
espera que las quinonas se conjuguen
covalentemente con amina libre grupos a
través de la base Schiff y/o las reacciones de
tipo Michael (Sampaio et al., 2005).
Como se presenta en la Fig. 5, el espectro
del complejo GA-WW mostró los cambios
más significativos en comparación con los
espectros de monómeros GA, polímeros
GA-GA y compuestos WW.
De acuerdo con la Fig. 5, las bandas
principales se ensanchan, desplazan y
extienden en comparación con sus
posiciones en el monómero GA, el polímero
GA-GA y el espectro WW ATR, debido a las
interacciones entre los radicales libres
hidroxilo GAC y los grupos de aminas para
formar productos de polímeros GA-WW.
Las principales bandas ATR son las
siguientes: dentro de los grupos 3010-3670
cm-1 (estiramiento y adherencia -OH, -NH),
regiones de 1730 cm-1 C-O-C (enlaces de
ésteres fenólicos del estiramiento
carbonílico), dentro de los 1520 -1700 cm-1
(estiramiento y flexión -NH, estiramiento
aromático del anillo C -C), C-O y/o grupos
COOH disociados), regiones de 1354 cm-1 (-
OH en flexión plana, amida I, II y III), dentro
de los 1150-1270 cm-1 (vibraciones de
estiramiento C-O/C-C y deformación-OH de
COOH, estiramiento C-O de ésteres arílicos),
regiones de 1020 cm-1 (C-O-C antisimétrico
estiramiento de la estructura del sacárido).
En conclusión, los resultados anteriores
confirman que la banda de absorción es de
aproximadamente 650 nm en UV/Vis GA-
WW espectro atribuido a especies de
complejos de oligómeros/polímeros de la
GA con compuestos WW por oxidación de
radicales libres mecanismo.
Una adición por computadora de los
espectros GA-GA y WW ATR, que se reporta
como SUM = GA-GA + WW en la Fig. 6 (ver
espectro punteado) da un espectro con
diferentes bandas en comparación con el
espectro ATR complejo (GA-WW). Esto es
evidencia de que los polifenoles con
compuestos WW interactúan por
quimisorción.
Evaluación TGA del complejo GA-WW
La Fig. 7 muestra los perfiles TGA de los
compuestos WW y del complejo GA-WW.
Los perfiles se normalizaron según el peso
inicial. Como se presenta en la Fig. 7, tanto
para el complejo WW como para el
complejo GA-WW, las curvas TGA se
observan en dos zonas: la primera es una
zona de "pico" en la fase inicial y la segunda
es una zona de "decaimiento rápido y larga
cola" (Vamvuka et al., 2003).
La primera zona, entre 100 y 170 C,
representa la descomposición de la biomasa
en CO y CO2. Según la Fig. 7, los pesos de los
compuestos WW y del complejo GA-WW
disminuyen gradualmente entre 100 y 170 residuos es especialmente compleja, se
ºC en la fase inicial. Más específicamente, el necesitarán más estudios para obtener una
TGA de la curva de compuestos WW imagen más detallada de todas las
muestra una pérdida de peso de 23.4% interacciones. Este método sugiere un
dentro de 100-130º C con un pico (primer papel novedoso de los polifenoles naturales
derivado) a 115º C mientras que el TGA de en la degradación y humificación de los
la curva compleja GA-WW muestra una residuos. Este método se propone como
pérdida de peso de 14.5% dentro de 120 - una alternativa respetuosa con el medio
170º C con un pico (primer derivado) a 155 ambiente tratamiento de aguas residuales
ºC. Una comparación entre las curvas DTG en contraposición al tratamiento biológico y
mostró que la zona "pico" del complejo GA- posterior incineración de lodos.
WW se desplaza a temperaturas más altas
en comparación con la zona "pico" de los
compuestos WW (∆Tpeak = T (GA-WW) - TWW =
+40 ºC). Este cambio es una evidencia clara
de que la fuerte complejación entre los
grupos activos de los compuestos WW y el
anillo aromático GA por enlaces C-C, C-O
(grupos hidroxilo -OH) y C-O (grupos
carboxilo -COOH) (González et al., 2005) con
mecanismo de radicales libres hidroxilo
GAC, reacción (2). Según Gonzalez et al.
(Gonzalez et al.., 2005), la liberación de CO
y CO2 entre 120 y 170º C se debe a la Fig. 6. Espectro GA-WW comparado con el
espectro de una adición de ordenador entre los
ruptura de los enlaces C-C y C-O que se
espectros GA-GA y WW.
originan esencialmente de la hemi-celulosa
y la celulosa y la liberación de CO a
temperaturas más altas debido a la lignina,
posiblemente a través de la liberación de
grupos COOH y la ruptura de grupos C-O
(Gonzalez et al., 2005). Los resultados
mostrados en la Fig. 7 apoyan los hallazgos
de González et al. Consecuentemente, el
complejo GA-WW es un nuevo producto
con diferentes propiedades físico-químicas
en comparación con el monómero GA, el
polímero GA-GA y los compuestos WW.

Conclusión
Este estudio está un paso más cerca de la Fig. 7. Análisis TG (curvas sólidas) y DTG
comprensión de las interacciones entre (curvas punteadas) de muestras
polifenoles con actividad radical y complejas de polímeros GA-GA y GA- WW
compuestos de aguas residuales a nivel realizadas en atmósfera de nitrógeno.
molecular. El análisis comparativo para el
polímero GAGA y el complejo GA -WW
mediante técnicas UV/Vis, ATR y TGA revela
diferencias debidas a mecanismos de
complejidad. Como la matriz orgánica de los